Способ получения антибиотика @ -15003 @ -3

 

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА С-15003 Р-3, отличающийс я тем, что штамм Nocardia sp. С-15003 (АТСС-31281, IFO 13726) выращивают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода, добавки валика или изомасляиой кислоты или их производных, с последующим выделением целевого продукта. 2. Способ по п.1, отличающий с я тем, что в качестве добав ки используют смесь валика и изомасляной кислоты.

СВОЗ COBETCHHX

ООЛ МП

РЕСПУБЛИК

ЭСИ) С 12 P 7 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТУ

ГОСУД Ч СТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2688152/28-13 (22) 17.11.78 (31) 139385/77 (32) 18.11.77 (33) Япония (46) 15.08.83 ° Бюл. 9 30 (72) Еидзи Хигасиде, Казунори Хатано и Иицуко Acaii (Япония) (71) Такеда Кемикал Индастриз, Лтд (Япония) (53) 615.779,931(088.8) (54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИО-

ТИКА С-15003 P-Зр о т л и ч а ю щ и й„.SU„,, 1036251 А с я тем, что штамм Nocardia sp.

В С-15003 (ATCC-31281, IFO 13726) выращивают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода, добавки валина или изомасляной кислоты или их производных, с последующим выделением целевого продукта.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— шийся тем, что в качестве добавки используют смесь. валина и изомасляной кислоты.

СР

<АР

С5

Ф©

1036251

Изобретение относится к микробиологии и касается прл, «ения антибиотиков.

Предложенный антибиотик новый и способ его получения в патентной и научно-технической литературе не описан.

Целью изобретения является получение антибиотика общей формулы

el %30

tt О 0

1 0

20

30

Н Н

СН3 ОСН где R обозначает -СО-ОН2-СН3,.

СН

-СО-ОН э СО-СН2СН2-СНЗ, СН3 или -СО-СН -СНСН

2 СН

Указанная цель достигается тем, что штамм Nocardia sp. М С-15003 (ATCC-31281, IFO 13726) выращивают в питательной среде, содержащей источники азота, углевода, добавки валина или изомасляной кислоты или их производных, с последующим выделением целевого продукта.

Кроме того, в качестве добавки используют смесь валина и изомасляной кислоты.

Штамм Nocardia sp. М С-15003 продуцент антибиотика — выделен из почвы и депонирован в исследовательском институте ферментации

Agercyof Industrial Science and ,Technology (FERN) под номером 3992, в институте ферементации, осака 40 (IF0) под порядковым номером 13726 и в американской коллекции разновидностей культур (ATCC), Мэриленд CMA под номером ATCC-31281.

Морфологические признаки. 45

Вегетативный мицелий хорошо растет как на arape, так и в жидкой. среде. Гифы достигают от 0,8 до

1,2 мкм в диаметре, в некоторых случаях их.можно разделить на фрагмен- 50 ты, напоминающие палочки бактерий или короткие разветвленные гифы.Штамм ,хорошо растет на различных средах, образуя тела, похожие на монолиты (50«200х200х1000 мкм) на которых про-55

У должается дальнейший рост воздушного мицелия. Воздушный мицелий представ- ляет собой. волнообразные прямые. или петлеобразные спирали, В неко торых случаях образуются конйдии.

Клеточные суспензии, полученные Ж с поверхности культур, содержат много удлиненных эллипсоидальных (0,081;2х4,8-6,8 мкм) и эллипсоидальнйх (0,8«1,2х1,0-2,0 мкм) телец, похожих на артроспоры. 65

Штамм хорОшо растет на раэличных средах, причем вегетативный мицелий бывает от бесцветного до бледножелтого в начальных фазах и от светлого желтовато-рыжевато-коричневого до желтовато-рыжевато-коричневого на поздних фазах. Штамм продуцирует растворимые пигменты в различных средах.

Воздушный мицелий имеет порошкообразный вид и обладает уменьшенным ростом, цвет его варьируется от белого до желтого или от светлого желтовато-рыжевато-коричневого.

Сахарозо-нитратный агар. Рост умеренный, вегетативный мицелий (ярко желтый цвет дыни до янтарного рыжевато-коричневого) образует тела, похожие на монолит. Воздушный мицелий скудный, белый ° Растворимый пигмент отсутствует или бледный желтовато-рыжевато-коричневый.

Глицерино-нитратный агар. Рост умеренный. Вегетативный мицелий . св тлый, цвета слоновой кости, образует тела, похожие на монолит. Воздушный мицелий умеренный, белый.

Растворимый пигмент отсутствует.

Глюкозо-аспарагиновый агар. Рост умеренный, вегетативный мицелий от яркого цвета календулы до ярко-желтого. Воздушный мицелий скудный, белый. Растворимый пигмент яркожелтый.

Глицериново-аспарагиновый агар.

Рост умеренный. Вегетативный мицелий цвета светлой слоновой кости, образует тела, похожие на монолит.

Воздушный мицелий скудный, белый °

Растворимый пигмент отсутствует.

АГар на крахмале . P ост умеренный .

От светлой слоновой кости до светлопшеничного, образует тела, похожие на монолит. Воздушный мицелий обильный, цвета светлой слоновой кости.

Растворимый пигмент отсутствует.

Arap на овсяной муке. Рост умеренный, от светлой слоновой кости до колониального желтого, образует тела, похожие на монолит. Воздушный мицелий скудный, от белого до светло-желтого. Растворимый пигмент отсутствует.

Тирозиновый агар. Рост умеренный, от светлой слоновой кости до цвета светло-желтой дыня, образует тела, похожие на монолит. Воздушный мицелий умеренный, от белого до светлой слоновой кости. Растворимый пигмент цвета верблюда.

Физиологические признаки.

Температурный: интервал роста

12 -38 С. Температурный интервал, в котором наблюдается хороший рост вовдушного мицелик, 20-35 С.

Желатину разжижает, крахмал гид ройиэует, нитраты восстанавливает, ° молоко пептониэирует но не коагулирует, казеин разлагайт.

1036251

3 !

На arape с пептоном и .дрожжевым экстрактом меланоидные пигменты не продуцирует, на тирознновом агаре образует.

Тирозин разлагает, ксантин и гипо;ксантин не разлагает, толерантность . 5 к лизоциму положительная, толерантность к хлористому натрию 2Ъ, очень хорошо усваивает. фруктозу, маннозу.

Хорошо растет на глюкозе, сахарозе, маннитоле, на растворимом крахмале., .

Усваивает ксилозу, арабинозу; трегалозу, мелибиозу, рамнозу, галактозу.

Слабо усваивает раффииозу, мальтозу; не усваивает i-инозитол, D-сорбитол, лактозу, глицерин.

Микроорганизм рода Йоса rdia может, как; вообще все микроорганизмы, под вергаться вариациям,и мутациям, которые происходят либо самопроизвольно, . либо вызываются искусственным путем.

Так, например, многочисленйые варианты штамма, которые можно получить при облучении рентгеновскими лучамй, гамма-лучами ультрафиолетовым излучением и т,д., путем выделения отдель

25 ной клетки, путем выращивания культуры на средах, содержащих различные . химические вещества, или в результате любой другой мутагенной обработки так же, как и мутанты, спонтанно образую- ЗО щиеся из штамма, не следует рассматривать как представителей какого-либо иного вида. Любые из таких вариантов или мутантов, способные вырабатывать

С -15003 P-3, P-3 и/или P-4, можно использовать для целей предлагаемого изобретенйя.,;.Так, например, штамм, В С-15003 можно подвергать различным мутагенным обработкам и получать мутанты, которые практически не обла.. дают. способностью продуцировать растворимые пигменты: мутанты с бесцветным. субстратными мицелиями, с желтовато-зеленым, красновато-рыжеватокоричневым или оранжево-.красным мицелием; мутанты, гифы которых готовы 45 к фрагментации в бациллярные элеМенты или в фрагменты коротких разветвленных гифов) и, мутанты с обильным белым воздушным мицелием или практически без воздушного мицелия. 50

В качестве допоцнительных веществ могут использоваться валин и/или иэомасляная кислота- в виде производных.

Примерами производных являются сложные эфиры, такие как С -С алкиловые

; сложные эфиры (например, метиловый эФир,.этиловый эфир) указанных соединений, амиды, такие как амид или

; С -С g алкиламид (например, N-мет иламид

: N-этиламид) указанных соединений, их ео кетокислоты (например, ф -кетоизовалериановая -кислота), соли упомянутых соединений, такие как гидрохлорид, ратриевая соль, калиевая нли кальцие-. вая соль. Валин может быть использо- :65 ван в виде. D-формы, Ь-формы или

DL-Формы.

Упомянутые адднтивные вещества могут представлять собой смеси валина, изомасляной кислоты и/или их . производных.

Указанные вещества обычно добавляют к среде в количестве от 0,01 до

1,0% (вес./объем), и предпочтительно от около. 0,1 до около О, 5%(вес,/объем) в любое время культивирования по мере . осуществления культивирования вида Nocardia 9 С-15003, предпочтительно на начальной стадии культивирования.

Среда для культивирования может быть как жидкой, так и твердой и может содержать источники углерода и азота, которые штамм усваивает и переваривает, неорганические вещества, слепы питательных веществ, В качестве источников углерода используют глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, декстрин, крахмал, глицерин, маннитол, сорбитол, жиры и масла (например, масло из соевых бобов, свиное, сало, куриный жир):. В ка-. честве источйиков азота используют мясной экстракт, дрожжевой экстракт, сухие дрожжи,. соевую муку,жидкость от замачивания зерна, пептон, муку из хлопковых семян, мйласбу, мочевину, аммониевые сопи (например сульфат аммония, хлористый аммоний„ нитрат аммония), соли азотной .кислоты (нитрат натрия, нитрат калия).

Кроме того, среда может содержать соли натрия, калия, кальция, магния, железа, марганца, цинка, кобель та никеля, соли фосфорной и борной кислот, Среда может также содержать в качестве добавок различные витаминьв (например В, В., никотиновую кисло.ту В,,, С, Е ), нуклеиновые кислоты. (например, пурин, пиримидин и их производные). Для установления РН .в среду дббавляют неорганические ки" слоты и/или щелочной металл или аммиак, соответствующие основания в качестве регулирующух РН агентов, . а также масла, жиры, поверхностно.активные вещества и противовспенивающие агенты.

Культивирование проводят в любых ,стационарных условиях.для выРащи" вания культур со встряхиванием,аэроб" ным погружением и других. Предпоч тительным является аэробное погруже ние.

Инкубирование осуществляют при

20-35 С при начальном значении РН ,.5,5-8,5. Предпочтительным является интервал от 23 до 30 С при рН

6,5-7,5.

Время культирования 48-240 ч.

Штамм C-15003 инокулируют в культурапьную среду Т, в которую входяТ, 1036251

%г раствориьый крахмал 3; хлористый аммоний 0,2> сульфат магния 0,05; монокалийфосфат 1,09; дикалийфосфат

2,09; сульфат железа 0,001 и дополнительные веществаг или в культуральную среду ti, в которую входят, Ъг декстрин 5 ° жидкость от замачивания зерна 3; пептон 0,1;кар1 бонат кальция 0,5 и дополнительные вещества. Затем инокулированную среду культивируют 200 об/мин при 28 С 10 в течение 144 ч на ротаторном вибраторе или фермеятере.

Результаты, полученные для сред 1.и гг, приведены в табл. 1.

Активность антибиотика определяют при помощи бумажного диска для количественного определения на Т8.1агогггуces-avellaneus IF0 7721 в качестве опытного организма..

Так как антибиотик, полученный в 20 ферментационном бульоне, является липофильным нейтральным веществом, его выделяют из бульона. Антибиотик P-3 экстрагируют из питательного фильтрата несмешивающимися с водой оргаяи- 75 ческими растворителями, такими как сложные эфиры жирных кисггот (например, этилацетат и амилацетат), спирты (например, бутанол), галоидированные угЛеводороды (например, дихлор- . метан, хлороформ), и кетоны,(например, метилизобутилкетоя). Экстрагирование антибиотика P-3 из фильтрата проводят при рН близком к нейтральному, и npräïo÷òèòåëüío экстрагируют этилацетатом при рН 7. Экстракт промывают водой и концентрируют rgb пониженном давлении. Затем к концентрату добавляют неполярный растворитель, как петролейный эфир или гексан, и выIделяют сырой продукт, содержащий 40 активное соединение в виде осадка.

Сырой продукт при желании подвергают .последовательно различным способам очистки»

МОжет быть использована адсорб- 45 ционная хроматография, в качестве адсорбента используют силикагель, окись алюминия, макропористые неионные смолы. Р-3 иэ сырого продукта выделяют на силикагельном хроматогра- 5О фе с помощью петролейного эфира и гексана и элюируют, добавляя полярный растворитель (такой, как этилацетат, ацетон, этанол или метанол), или г4лоидированный углеводород (такой,как дихлорметан или хлороформ содержащий полярный растворитель, как спирт (например, метанол или этанол,), кетон (например, ацетон или метилэтилкетон ), Если в качестве средства очистки антибиотика нспользувт макРовэРастув:; смолу - адсорбежт, то ЭЛвирование антибиотика Р-3 проводят смесью воды с низшим спиртом,,низшим кетоном или сложным эфиром.

B качестве низшего спирта используют $5 метанол, этанол, пропанол или бутанол, а в качестве низшего кетона используют, ацетон или метилэтилкетон.

Сырой продукт растворяют в 60%-яой смеси метанол — вода и адсорбируют на колонке с Диапоном HP-10. Колонку прогьгвают 70%-ной смесью метанол— вода и затем проводят элюироваяие

903-,ной смесью метанол — вода.

Фракции, содержащие антибиотик

Р-3 собирают и концентрируют при пониженном давлении . К сухому продукту добавляют 5-8 объемов этилацетата и полученную смесь оставляют выстаиваться, после чего выделяют кристаллы антибиотика P-3, выход составляет 90%. (Физико-химические свойства P-3 .приведены ниже.

Антибиотик С-15003 P-3.С>>Н4y CXN Оg = 635,169. Точка плавления 190-192ОС Удельное вращение (d21,, -136 10 (с = 0,375 снс1 ).

Йайдено, Ъг С 60,06; Н 7,04;

N 4,33; CI 5,37.

В ычислено, Зг С 60,51; Н 6,82;

N 4,41; CI 5,58.

Ультрафиолетовый спектр поглощения в метаноле, нм (E): 233 (30250);

240.(пл. 2845()) 252 (27640); 280 (5750 )(288 (5700).

Инфракрасный спектр поглощения, cd, KBr: 1740; .1730; 1670i 1580;

1445; .1385; 1340; 1255; 1180i 1150», 1100т 1080т 1038Спектр ЯМР 100 МгГц в CDCI ч./млн:

1,27/д/ (ЗН); 1,28/д/ (ЗН) .

Масс-спектр, m/å: 573; 485; 470;

450.

Нерастворим в петролейном эфире, гексане и воде; Частично растворим в бензоле и эфире. Растворим в хлороформе, этилацетате, ацетоне, этаноле, метаноле, пиридине, тетрагидрофуране и диметилсульфоксиде.

Цветовая реакция: Драгендорф— положительная; Бельштейн — положительная.

Биологическая активность.

Антибактериологическая активность.

По способу бумажных дисков опреде ляют ингибирующие концентрации штамма, выращенного на триптиказно-соевом агаре (BBL) против микроорганизмов, перечисленных далее. Так, диски фильтровальной бумаги (Тоуо Seisakusho, тонкого типа, 8 мм в диаметре), пропитанные каждый 0,02 мл раствора концентрации 300 Micr/wI P-3, помещают яа пластины, инокулированные соответственно микроорганизмами перечисленными ниже, для определения минимальной ингибирующей концентрации, P-3 не обладает активностью против следующих микрооргаяизмов: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacullus

1036251

subtilis, Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens

H Mycobacterium avium.

С другой стороны рост .грибков

Talaromyces avellaneus ингибируется

P-3 на агарной пластинке, содержащей

3,5 r динатрийфосфата, 0,5 монокалийфосфата, 5 r кислого фосфата, дрожжевого экстракта (Difco), 10 г глюкозы, 15 г агара, 1000 мл дистиллированной воды, рН 7,0. Минималь- tO ная ингибирующая концентрация.

3,0 мкг/мл для Р-3. Далее культивируют в качестве исследуемого организма штамм Tetrahymena pyriformis .М на опытной среде, состоящей из 20 г протеозо-пептона (Difco), 1 г дрожжевого экстракта, 2 г глюкозы, 1000 мл дистиллированной воды и

10 мл 1М фосфатного буфера, рН 7,0, при температуре 28 С в течение 4448 ч и определяют методом последовательных разбавлений активность ингибирования роста P-3 .против простейших. Оказалось, что ингибирование роста наблюдается при концентрации

1 мкг/мл. P-3 обладает активностью против следующих микроорганизмов:

Fusicladium 1evieri, Helminthosporium siSmoidium var. irregula re, Pyricularia oryzae, Cochlioborus

miyabeanus,Schегоtinia scrегоt iorum,.

Pellicularia sasakii, Trichophyton ,rubrum, Rhodotorula гиЬга и Cryptococcus neoformans.

Противоопухолевая активность °

Исследовано терапевтическое дейст-35 вие P-З, вводимого внутрибрюшинно .в течение 9 дней, против лейкемии P388 у мышей (2x106 клеток) на животное, мышь,. трансплантированных внутрибрюшинно. Полученные результаты 4О показали, что в единицах степени продления продолжительности жизйи, эти соединения обладают противоопухолевой активностью порядка 200% при уровне дозы 0,00625 Мк/кг/день. 45

Токсичность.

В проведенных на мышах тестовых испытаниях на острую токсичность, которые предусматривали внутрибрюшинные инъекции P-3, все исследованные антибиотики дали величину LD

0,625 мг/кг и LD„ = 0,313 мг/кг.

Пример 1. 40 мл засеянной культуральной среды, содержащей, В: глюкоза 1,0; бактотриптон 2,0; бакто-дрожжевой экстракт 1,2, рН

7,0, выливают в 200-миллилитровув колбу Эрленмейера. После стерилизации в среду инокулируют Nocardia SP

Р С-15003 (IF0 13726i ATCC 31281, FERM P 3992). Инокулянт инкубирувт при 28ОС во вращающемся шейкере ,(200 об/мин) для получения засеянной

;культуры. Засеянную культуру трижды ,проьивают стерилизованной дистиллиро- ванной водой и промытые клетки вида- 65 ляют до исходного количества стери-! ,лизованной дистиллированной водой.

Одну часть по объему полученного вещества инокулируют в основную в

40 ч. по объему основной питательной среды, содержащей, %: растворимый крахмал 3; хлористый аммоний 0,2; сульфат магния 0,05; монокалийфосфат 2 09; дикалийфосфат 2,9; сульфат железа 0,001 и L-валин 0,1, и основную питательную среду культивируют .прн 28 С в течение 8 дней. во вращавшемся шейкере (200 об/мин). Общее количество полученного C-15003 составляет 16 мкг/мл, 95% (вес/вес.%) из него составил P-3.

Пример 2. Готовят посев культуры аналогично примеру 1,500 мл засеянной культуры инокулируют в

2000-миллилитровую колбу Сакагуши и культивируют при 28 С .в течение 48 ч во вращающемся шейкере (100 об/мин) до получения инокулянта. Инокулум помещают в 100х103 ч по объему среды содержащей, %: глюкоза 2,0; растворимый крахмал 3,0; жидкость от замоченного зерна 1,0; соевая мука 1 0) полипептон 0,5; хлористый натрий

0,3; карбонат кальция 0,5; рН 7,0, в 200х10 з ч по объему ферментер из нержавеющей стали.

Культивирование проводят при 28 С .в течение 48 ч при скорости аэрации

10.0х103 ч по объему/мин и размеши вании 200 об/мин. Питательный бульон (10х10 з об.ч. ) переносят 100х10 ч по объему основной питательной среды, содержащей, %". декстрин 5; жидкость от замачивания зерна 3 пептон 0,1у

L-валин 0,5; карбонат кальция 0,5, рН 7,0, — в 200х10 ч по объему ферментер, из нержавеющей стали, и культивируют в течение 4 дней при 28 С при скорости аэрации 100х10 ч по объему/мин и скорости перемешивания

150 об/мин. Полное количество полученного С-15003 12 мгк/мл, причем

P-3 в С-15003 составляет около 98% (вес. /вес.В ) .

Пример . 3. К 95 л жидкой ,питательной среды, полученной в примере 2, добавляют 50 л ацетона. Полученную смесь перемешивают в течение

30 мин, добавляют 2х10 ч Hyflo-supercell, хорошо перемешивают, затем отфильтровывают на фильтре под давлением, в результате получают 135 и фильтрата. K полученному фильтрату добавляют 50 мл вопи и 90 л этилацетата, полученную смесь перемешивают и экстрагируют. Описанную процедуру повторяют дважды. Полученные слои этилацетата объединяют и дважды промывают 80-литровыми порциями води.

K слов добавляют 1х10 ч. безводного сульфата натрия, высушивают и концентрируют до 200 мл. К полученному концентрату добавляет петролейний

9 !

1036 эфир, и образовавшийся осадок выделяют фильтрованием, в результате чего получают 35 г сырого продукта.

К сырому продукту добавляют 50 мл этилацетата и полученную смесь переr мешивают, Нерастворимую часть выделяют фильтрованием, к фильтрату добавляют .10 r силикагеля. Подле пере мешивания полученной смеси Ьтилаце.тат отгоняют при пониженном давле.нии. Остаток помещают в верхнюю часть 9 колонки с силикагелем (500 мл).Элюирование проводят последовательно

500 мл н-гексана; 500.мл смеси н-гексан-этилацетат (3:1);2000 мл смеси н-гексан-этилацетат (1 .1) и 2000 мл насыщенного водного раствора этилаце тата. При этом элюат собирают в „

50-миллилитровые фракции.

По одному миллилитру от каждой фракции концентрируют досуха и к полученному концентрату добавляют

0,1 мл этилацетата до получений смеси. Смесь дает пятно на расстоя-, нии 2,5 от нижнего края пластинй силикагель — стекло и проявляется около 17 см этилацетатом, насыщен" ным водой. После проявления проводят .определейие, ультрафиолетом .(2537 А). Активные фракции Rf 0,.42 собирают и концентрируют при пониженном давлении до 2 мл. К этому кон"3P центрату добавляют 20 мл петролейного эфира, в результате чего получают 9,1 ч. сырых кристаллов. После растворения сырых кристаллов в 20 мл теплого этилацетата и охлаждения 35 выделяют 0,85 ч. кристаллов P-3.

Точка плавлеиия 1 89-190 С (P-3

97% (вес./вес), ° П р и м .е р 4, B 400 мл 50%ногО раствора-метанола растворяют 20 г ;40 сырого продукта, полученного по при-. меру 3. Колонку 2,5 см в диаметре набивают 1000 мл диаиона Hp-10 с

3000 мл 50%-ной смеси метанол -„ вода. приготовленный таким образом раствор, 45 образца пропускают через колонку и промывают, используя 1000 мл 60%-ного метанола, и осуществляют непре.рывное градиентное элюирование:

7500 мл 60%-ной смесью метанол - во". да и 7500 мл 95%-ной смесью метанол -.5О вода, Элюат собирают в 75 миллилитровые фракции и каждую фракцию исследуют тонкослойной хроматографией на силикагеле, описанной в.примере 3.

Фракции.9 145-153 собирают и кон- Я центрируют. Е полученному концентрату добавляют 509 мл воды и 1000 мл !, этилацетата. Затем раствор встряхивают i разделительной воронке, и вод251 . 10

1 ный слой отделяют после двукратного проьывания 300 мл воды,, этилацетатный слой высушивают .над безводный сульфатом натрия, концентрируют и оставляют отстаиваться. Полученные кристаллы P-3 отфильтровывают и высушивают. Выход P"3 880 мг.

Точка плавления 188-190 С (P-3.,"

95% (вес/вес).

Пример 5. Используя вместо

Ь-валина по примеру 1, метиловый эфир валина; N-метиловый эфир валина; гидрохлорид валина;:L-кетоизовалериановую кислоту; метиловый эфир изо" масляной кислоты; N-метиловый эфир изомасляной кислоты или смесь валина и изомасляной кислоты, получают антибиотик P-,З.

Антибиотик P-3 обладает высокой ингибирующей активностью против грибковых и простейших организмов и может быть использован в качестве фунгицидного агента, а также может найти применение в качества противоопухолевого лекарства.

Как фунгицид его можно использовать для оценки бактериальной экологии в почве, активном иле, жидкости животных организмов и т.д. Так, если нужно выделить ценные бактерии из образцов почвы или оценить действие бактерий независимо от грибковых или простейших организмов при работе и исследовании активных илистых систем, используемых для очистки сточных вод, то можно использовать анти" биотик для получения селективного роста бактериальной флоры, сопровож,дающегося подавлением роста загряз» няющих грибковых.или простейших организмов. в образце. Обычйо образец добавляют к жнцкой или твердой среде и на 1 мл среды добавляют 0,1 мл ,раствора, содержащего 10-100 мкг/мл ! антибиотйка в 1%-ной смеси метанол вода, после чего образец инкубируют.

P-3 можно также использовать в качестве бактерицидного агента для борьбы с болезнями растений, вызванными !микрооргайизмами,, упомянутыми выше.

Обычно Р-3 . используют в виде

1%-ного метанольного водного раствора, содержащего 0,5 -.5 мкг/мл антибиоти ка. Так, напрймер, P-3 можно использовать для контроля за красновато-коричневой листовой гнилью бластом, гелЫминтоспориозной пятнистостью ,лиотьев и листовыми заболеваниями рисовых растений.

Предлагаемый способ позволяет получить новый антибиотик.

1036251

Время добавления, ч .

«ЮЮ » Ю

Соотнсыение компонентов, (вес./вес. Ъ ) Добавляемое вещество

Количество добавки, Ф

Полная активность, мкг/мл

P-2 P-3 P-4

Среда P"

10 65

О 1 95 О 1 97

72 2 95

О 2 95

Иэобутират натрия

О 1 91

Среда tk

0,01

25 18

5 15

3 15

2 13

3,: 13,5

Иэобутилат натрия

0,3

5 92

В графе "Время добавления" аддитивное вещество добавлено в среду в качестве одного из ингредиентов.

Составитель С. Малютина

Редактор N. Петрова ТехредМ.Йадь Корректор С. Шекмар

ФИВЫ ю ю

3 аказ 5 86 7/6 3 Тирам 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, K-35, Рау аская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Уигород, ул. Проектная, 4

Без добавки

Ь-валин

L-валин

L-валин -валин

Без добавки

L-валин

Ь-валин

Ь-валин

D-валин

0,1

0,3

0,1

0,1

0,1

0,3

0,5

0i3

О . 5

0 3

0 2

48 3

94

96

2

16

26 .