Способ получения 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина

 

Способ получения 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина, включающий экстракцию липидов из животного сырья, их гидрирование в присутствии катализатора - окиси платины (IY), омыление и очистку целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и расширения сырьевой базы, в качестве исходного сырья используют мягкие ткани морских беспозвоночных, после экстракции липиды метилируют, омыляют, обрабатывают этилацетатом, очищают на колонке с силикагелем и образующийся 1-алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолин гидрируют.

Изобретение относится к химии фосфорорганических соединений, а именно к усовершенствованному способу получения 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина (АГФХ), который ввиду своей биологической активности, например антираковой и антигипертонической, может найти применение в медицине. Известны различные способы получения АГФХ и его аналогов путем синтеза и выделения из природных источников [1]. Однако синтетические способы требуют дорогостоящих реактивов и представляют собой многостадийный, трудоемкий процесс. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к описываемому является способ получения 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина, заключающийся в том, что из сердца крупного рогатого скота экстрагируют липидную смесь, из которой выделяют лецитин с помощью колоночной хроматографии, гидрируют полученный плазмогенный лецитин на катализаторе - окиси платины (IV) - с последующим диацилированием лецитина щелочным гидролизом и очисткой целевого продукта хроматографией [2]. Однако этот способ технологически сложен, так как представляет собой многостадийный процесс. Кроме того, он предусматривает использование в качестве сырья ценного пищевого продукта. Целью изобретения является упрощение процесса и расширение сырьевой базы. Поставленная цель достигается описываемым способом получения 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина, заключающимся в том, что из мягких тканей морских беспозвоночных экстрагируют липиды, которые метилируют, омыляют, обрабатывают этилацетатом, очищают на колонке с силикагелем и образующийся 1-алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолин гидрируют водородом в присутствии катализатора - окиси платины (IV). Отличительными признаками описываемого способа являются экстракция липидной смеси из мягких тканей морских беспозвоночных с последующим ее метилированием, омылением, обработкой этилацетатом, очисткой на колонке с силикагелем и гидрированием образующегося 1-алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолина. Пример. 200 г печени, полученной из 5 морских звезд Asterias amurensis, промывают 400 мл ацетона, ткань гомогенизируют с 400 мл метанола и 200 мл хлороформа, гомогенат фильтруют, остаток промывают последовательно 200 мл хлороформа и 200 мл смеси хлороформ : метанол (1 : 1), экстракты объединяют, добавляют к ним 500 мл воды, после расслоения основную часть верхней фазы сливают, к нижней прибавляют 50 мл бензола и смесь выдерживают 10 ч в морозильной камере холодильника. После этого остатки верхней фазы тщательно удаляют, а нижнюю фазу упаривают в вакууме на роторном испарителе. Получают в остатке 10 г липидов. К 4 г полученной липидной смеси прибавляют 40 мл йодистого метила и 200 мг свежеприготовленного карбоната серебра на целите. Смесь перемешивают на магнитной мешалке до полного превращения фосфатидилэтаноламина в фосфатидилхолин ( в течение 5 ч), контроль за ходом реакции ведут с помощью двумерной хроматографии на силикагеле в системах Роузера. Смесь после метилирования фильтруют, фильтрат упаривают, остаток растворяют в 40 мл бензола. К полученному раствору прибавляют 40 мл 0,1 М гидроокиси калия в метаноле и смесь выдерживают 30 мин при 40^oC, затем прибавляют 40 мл этилацетата и выдерживают смесь 1 ч при 40^oC. Смесь отфильтровывают от незначительного осадка, фильтрат упаривают, остаток растворяют в 40 мл смеси хлороформ : метанол (1 : 1), наносят на колонку со 100 г силикагеля (4х12 см) и промывают 300 мл хлороформа, затем 700 мл смеси хлороформ : метанол : вода : аммиак (2 : 8 : 1 : 0,1). Состав фракций контролируют с помощью тонкослойной хроматографии. 1-Алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолин вымывается в основном последними 300 мл смеси. Получают 250 мг 1-алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолина, который растворяют в 100 мл метанола и гидрируют в присутствии 20 мг катализатора Адамса (окись платины IV) в атмосфере водорода при перемешивании. Контроль осуществляют с помощью ТСХ. Смесь фильтруют, фильтрат упаривают, получают 250 мг 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина (АГФХ). Полученный продукт не отличается по хроматографическому поведению от заведомого образца 1-ацил-sn-глицеро-3-фосфохолина в системах Роузера и в системе хлороформ : метанол : 28%-ный NH₄OH (65 : 35 : 8), а также дает положительные реакции с реактивом на фосфолипиды и с реактивом Драгендорфа. При восстановлении алюмогидридом лития образуются глицериловые эфиры, R_f которых близки к R_f заведомого образца химилового спирта в системе хлороформ : метанол (98 : 2). В ИК-спектре липида обнаружены следующие, характерные для лизолецитина с простой эфирной связью полосы, см^-1: 3300 (OH); 1140 (C-O-C); 1230 (P=O); 1050 (P-O-C). Таким образом, описываемый способ позволяет упростить процесс получения 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина за счет исключения трудоемкой стадии выделения лецитина, в котором содержится 1-алкенил-2-ацил-sn-глицеро-3-фосфохолин, из липидной смеси и за счет исключения стадии очистки целевого продукта хромотографией, а также позволяет расширить сырьевую базу за счет использования мягких тканевых морских беспозвоночных. Описываемый способ предусматривает гидрирование индивидуального 1-алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолина вместо всего суммарного лецитина, выделенного из липидной смеси, в известном способе [2], что сокращает расходы дорогостоящего катализатора - окиси платины (IV). Использование после омыления метилированной липидной смеси этилацетата - мягкого нейтрализующего агента - исключает разложение получаемого на этой стадии 1-алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолина и повышает выход целевого продукта.

Формула изобретения

Способ получения 1-0-алкил-sn-глицеро-3-фосфохолина, включающий экстракцию липидов из животного сырья, их гидрирование в присутствии катализатора - окиси платины (IY), омыление и очистку целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и расширения сырьевой базы, в качестве исходного сырья используют мягкие ткани морских беспозвоночных, после экстракции липиды метилируют, омыляют, обрабатывают этилацетатом, очищают на колонке с спликагелем и образующийся 1-алкенил-sn-глицеро-3-фосфохолин гидрируют.