Способ дестабилизации микробного сычужного фермента

 

1. СПОСОБ ДЕСТАБИЛИЗАЦИИ МИКРОБНОГО СЫЧУЖНОГО ФЕРМЕНТА посредством химической модификации, осуществляемой путем обработки сычуж- , ного фермента модифицирующим агентом при оптимальной температуре в водной среде, отличающийся тем, что, с целью снижения термической стабильности, в качестве модифицирующего агента используют окислитель из группы свободных галогенрв - хлор, бром или иод или их производные, в которых галоген Имеет число окисления 1-3, а массовое отношение окислителя к общему содержанию белка в реакционной смеси составляет 0,01-1,0. 2.Способ поп.1,отлич ающ и и с я тем, что обработку микробного сычужного фермента окислителем ведут при рН 5-9 до уровня дестабилизации при потере активности СО до 50%, предпочтительно до 30%. 3.Способ по пп.1,2, отличающийся тем, что в качестве микробного сычужного фермента используют фермент, продуцируемый Mucor miehei.

СОО3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК А (19) (11) S(sn С 12 Н 9/99

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР /

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

/;:Р

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ/ l3

М ПАТЕНТУ (21) 2908403/28-13 (22) 08.04.80 (31) 1456/79 (32) 09.04.79 (33) Дания (46) 15.08.84. Бюл. Ф 30 (72) Свен Браннер-йоргенсен, Палле

Шнайдер и Петер Эйгтвед (Дания) (71) Ново Индустри А/С (Дания) (53) 577.15(088.8) (56) 1. Патент Великобритании

)з 1108287, кл. СЗ НЗ, опублик. 1968.

2. Rickert W.S. Структурные и функциональные детерминанты протеазы

Мисок miehei. 1. Модификация концевых аминогрупп и радикалов лизина карбамилированием. -Biochem. Biophys. Acta, 271, 93-101, 1972. (54)(57) 1. СПОСОБ ДЕСТАБИЛИЗАЦИИ

МИКРОБНОГО СЫЧУЖНОГО ФЕРМЕНТА посредством химической модификации, осуществляемой путем обработки сычужного фермента модифицирующим агентом при оптимальной температуре в водной среде, о т л.и ч а ю шийся тем, что, с целью снижения термической стабильности, в качестве модифицирующего агента используют окислитель из группы свободных галогенов — хлор, бром или иод или их производные, в которых галоген имеет число окисления 1-3, а массовое отношение окислителя к общему содержанию белка в реакционной смеси составляет 0,01-1 О.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— шийся тем, что обработку микробного сычужного фермента окислителем ведут при рН 5-9 до уровня дестаби- I лизации 5-11 0 при потере активности до 50Х, предпочтительно до ЗОЖ.

3. Способ по пп.1,2, о т л и— ч а ю шийся тем, что в качестве микробного сычужного фермента ис- р пользуют фермент, продуцируемый

Mucor miehei.

1109054

25,Целью изобретения является сни50 жение термической стабильнос;и микробного сычужного фермента.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дестабилизации микробного сычужного фермента прс55 редством химической модификации, осу- ществляемой путем обработки фермента модифицирующим агентом при оптиИзобретение относится к способу дестабилизации микробного сычужного фермента.

В производстве сыра молоко свертывают для отделения творога от сыворотки. Для этих целей используют продукты, содержащие реннин, который является свертывающим молоко энзимом, выделенным из желудка теленка °

Известно несколько заменителеи

10 сычужного фермента теленка, включающих известные микробные сычужные ферменты из Mucor miehei u Mucor

pusillus "П.

Сычужный фермент, вырабатываемый

Mucor miehei, предпочтителен в сыроварении благодаря его низкой стоимости, низкой неспецифической протеолитической активности и большому сходству с реннином в отношении чув- 20 ствительности к иону кальция. Кроме того, Mucor miehei отличается стабильностью при хранении сычужного фермента, что объясняется его высокой термостабильностью.

Некоторые пастеризованные сыворотки используются в качестве добавок к цельному молоку, например, в виде порошка для получения обогащенного молока, например детского питания. 30

Пастеризованная сыворотка, полученная из сыра, изготовленного с помощью сычужного фермента Mucor miehei, имеет незначительный уровень активности сычужного фермента благодаря высокой термостабильности последнего, продуцируемого Mucor miehei.

Известен способ дестабилизации микробного сыжучного фермента посредством химической модификации, осу- 40 ществляемой путем обработки сычужного фермента модифицирующим агентом при оптимальной температуре в водной среде, где в качестве модифицирующего агента используют цианат калия l2) . 45

Полученный карбамилированный продукт термически менее стабилен. Однако дестабилизация карбамилированного ,фермента слишком мала (Э С).

1 мальной температуре в водной среде, в качестве модифицирующего агента используют окислитель из группы свободных галогенов — хлор, бром или иод — или их производные, в которых галоген имеет число окисления 1-3, а массовое отношение окислителя к общему содержанию белка в реакционной .смеси составляет 0,01-1,0.

Обработку микробного сычужного фермента окислителем ведут при рН 5-9 до уровня дестабилизации

5-11 С при потере активности до 507 предпочтительно до 307, а в качестве микробного сычужного фермента используют фермент, продуцируемый

Mucor miehei.

Степень дестабилизации сычужного фермента, модифицированного согласно изобретению, достаточна для удовлетворения требований, предъявляемых к использованию сыворотки, и не оказывает вредного воздействия на стабильность при хранении препаратов сычужного фермента.

В идеальных условиях фермент может быть инактивирован при соответствующей (высокой) температуре таким образом, что остаточная активность фермента уменьшается как функция времени по экспоненциальной кривой спада, т.е. характеризуется легко определяемым полупериодом долговечности и этот полупериод является функцией температуры (С). Полупериод долго- вечности Т может быть вычислен

/ по формуле (t )1 2 / 1п А -1п А, где А „ — активность фермента, измеренная после нагрева до определенной температуры за время й„;

А — активность фермента, измеренная после нагрева до той же температуры в течение времени t (При прочих равных условиях полупериод долговечности будет тем короче, чем выше температура. Для многих ферментов изменение рН ферментативного раствора и ион%ой силы, а также присутствие некоторых солей может существенно влиять на полупериод долговечности. Химическая ; олификация специфического фермента вызыва1!09054 ет термическую дестабилизацию фермента, поэтому степень дестабилизации составляет и С, если исходный (немодифицированный) и модифицированный ферменты имеют одинаковый по- 5 лупериод при, N и (N-n) С соответственно.

Однако значения дестабилизации в известной мере приближенные вследствие приблизительного характера эна- 10 чения полупериода. Все значения дестабилизации, приведенные в этом опи.сании, измерены при рН 6,0, поскольку результаты измерений зависят от значения рН. 15

Обычно обработка фермента согласно изобретению сопровождается потерей активности. Установлено, что по экономическим причинам дестабилизацию не следует проводить на стадии, 2О соответствующей потере активности в среднем более 50Х, предпочтительно на стадии при потере ЗОХ и более предпочтительно при потере активности мене 10 . 25

Обычно дестабилизацию проводят до уровня 10 С и при потере активности менее 10Х.

В качестве оксиляющих агентов, которые могут быть использованы в Зб способе согласно изобретению, используют гипохлорит, например гипохлорит натрия, гипобромид, например гипобромид натрия, свободный хлор, N-хлорсукцинимид, хлорамин-Т и три35 хлориэоциануровую кислоту.

Окислитель должен применяться в такой концентрации, чтобы желаемая степень дестабилизации достигалась эа приемлемое время, которое может исчисляться от нескольких минут до

48 ч и более в тех случаях, когда протекает не прерываемая охлаждением реакция. Если концентрация окислителя слишком мала, то дестабилизация слишком слаба, если же концентрация окислителя очень высокая, то потеря активности слишком велика. Оптимальные концентрации окислителя обычно соответствуют весовому соотношению между окислителем и общим количеством о белка, содержащегося в ферментном препарате, и составляет 3-30 ч. окислителя на 100 ч. общего белка. Если препарат микробного сычужного фермента очищен до высокой степени единичной активности, то количество окислителя может быть снижено до 1 г на

100 r общего белка.

Значения рН, при которых протекает реакция, могут варьироваться в широких пределах, т.е. примерно от 3 до 10, что главным образом заивисит от окислителя. Так, например, если окислителем служит гипохлорит, то предпочтительный предел значений рН 5-9 и более предпочтительный 6-8.

Температура реакции не является критической, если ее поддерживать на определенном уровне, т.е. ниже 30 С, когда стабильность фермента удовлетворительная. Однако стабильность фермента может быть повышена добавкой известных стабилизирующих белок агентов, например поваренной соли в коли- . честве 5-20Х от препарата фермента, или сорбита в обычных для стабилизации ферментов количествах.

Сычужный фермент, модифицированный согласно изобретению, способен производить традиционный детский сыр, по своЪм качествам подобный сыру

Sams u Danbo и по меньшей мере с такими же свойствами, как и соответствующий немодифицированный сычужный фермент.

Операция дестабилизации может и предпочтительно должна проводиться как конечная операция получения микробного сычужного фермента. рН раствора микробного сычужного фермента, готового для обычных конечных операций до введения, устанавливают на заданном уровне для обработки (например, равным 7), загем сычужный фермент смешивают, перемешивая при комнатной температуре, с раствором окислителя (3-30 ч., например 20 ч. гипохлорита на 100 ч. общего белка). Затем смесь оставляют на 2-3 ч для достижения желаемого уровня дестабилизации. Реакцию можно прервать добавкой активированного угля или восстановителя, такого как сульфит натрия, после завершения соответствующего периода реакции. Дестабилиэированный ферментативный продукт подвергают затем обычным конечным операциям, т.е. фильтрации, установлению рН и единичной ферментативиой активности до стайдартных уровней и т.д.

Пример 1. Исходным материалом служит концентрат сычужного фермента (культуральная жидкость концентрируется до активности, примерно соответствующей 1Х-ному раствору чистого фермента, 18Х-ный раствор поваS 110905 ренной соли добавляется к сырому концентрату). Этот концентрат носит название "Реннилаза-46".

В двух сериях пробы, включающих по три порции (25 мп), приготовлен- 5 ных смешением 12,5 мл реннилазы-46 и

12.5 мл воды. устанавливают рН 7,0, 8 0 и 9,0 соответственно добавлением

1 н. NaOH и к каждой из этих смесей добавляют 0,4 мл 2,25 М раствора гипохлорита натрия (NaC10), при этом значения рН сохраняют постоянными на указанном уровне.

Первую серию, включающую три порции, помещают в холодильник на ночь (приблизительно на 18 ч). Вторую серию, включающую три порции, оставляют при комнатной температуре на 2 ч.

Снижение значения рН измеряют по прошествии указанных периодов време- 20 . ни. Затем порции разбавляют смешением 0,2 мл смеси с 50 мл воды и одновременно устанавливают значение рН 6,0 смесью ацетата натрия и уксусной кислоты. 25

Влияние гипохлорита натрия на ос таточную активность фермента рН приведено в табл. 1.

Затем разбавленные образцы под1 вергают тепловой обработке при 55 С 30 в течение 30 мин при рН 6,0, после чего измеряют остаточную активность.

Влияние тепловой обработки на остаточную активность модифицированного гипохлоритом сычужного фермента приведено в табл. 2.

Влияние тепловой обработки на уровень дестабилизации фермента, модифицированного гипохлоритом, приведено в табл. 3. 40

Hp и м е р 2. Значение рН трех порций ренннлазы-46 по 150 мл в каждой устанавливают 5,0, 6,0 и 7,0 со- . ответственно. Каждую из трех порций

45 разделяют на три части, к каждой из которых добавляют 0,8, 1,2 и 1,6 мп коммерческого 2,25 М раствора NaOC1 соответственно, при этом рН поддерживают постоянным в указанных выше значениях.

Эти девять образцов хранят затем при комнатной температуре (22 C) в течение 20 ч, после чего из каждого образца берут пробу (10 мл). К каждой такой пробе добавляют 0,4, 0,6 или 0,8 мп 1 М раствора Na SO соответственно для удаления избытка гипохлорита, 0 2 мл обработанных таким

4 . а образом проб разбавляют 50 мл воды и устанавливают рН 6,0 смесью уксусной кислоты и ацетата натрия. Разбав. ленные пробы с установленным значением рН подвергают тепловой обработке при 55 С в течение 30 мин.

Результаты дестабилизации сычужного фермента гипохлоритом в условиях рН S,0-7,0 и t 18-20 С приведены s табл. 4.

Пример 3. В 600 мл ренннлазы-46 при температуре около 10 С устанавливают значение рН 6,0

4 и. NaOH. Эту порцию разделяют на

6 ч.. по 100 мл в каждой. K каждой из этих 6 ч. добавляют О, 0,8, 1,2, 1«6» 2,0 и 2,4 мл коммерческого

2,25 М раствора NaOCl соответственно и устаиавливают рН 7,0.

После выдержки около 15 ч примерно при 5 С добавляют 2 мл 1 М Na $0, с целью устранения избыточного гипохпорита. Добавка сульфита не изменяет стабильности сычужного фермента.

Измеряют изменение активности. Пробы ло 5 мл разбавляют 10-кратно

О, 1 М ацетатным буфером с рН 6,0, после чего разбавленные пробы подвергают тепловой обработке при 60 С

s течение 15 мин.

Определяют остаточную активность после тепловой обработки и вычисляют полупериод долговечности и дестабилизацию.

Результаты представлены в табл.5.

Пример 4. Исходным материалом для этого примера. служит реннелаза-46,без )8X NaC1.

На основе укаэанного исходного материала готовят пять образцов по

200 г с добавкой О,S 1О; 15 и

20Х NaC1 соответственно. Устанавливают значение рН 6,0 с помощью

4 н. NaOH.

От каждого иэ пяти образцов берут пробы но 100 мл. К каждой такой пробе добавляют 1 ми коммерческого

2,25 и. МаОС1 при 5-10 С. Затем дпя всех пяти проб устанавливают рН 7,0 с помощью 4 í. NaOH и хранят примерно при 5 С.

По истечении времени хранения (около 20 ч) определяют изменение активности-. Пробы по 5 мп разбавляют t0-кратно О, 1 М ацетатным буфером с рН 6,0, после чего разбавленные пробы с установившимся значением рН подвергают тепловой обработке при 60 С в течение 15 мин.

054 8 ляют на 10 мин и затем добавляют

4 мл 1 М раствора Na SO, с целью удаления избыточного хлора.

0,2 мл пробы до и после введения хлора разбавляют 50 мп воды и устанавливают рН 6,0 смесью ацетата натрия и уксусной кислоты. Потеря активности, связанная с реакцией между сычужным ферментом и хлором, составляет 21Х.

После нагревания обработанного хлором сычужного фермента при 55"С в течение 30 мин остаточная активность равна 637, что соответствует полупериоду долговечности около

45 мин или дестабилизации около 8 С.

Пример 8. Готовят две порции по 25 мл реннилаэы-46 и 25 г ледяной воды. Устанавливают рН 7,0

4 н. NaOH.

К этим смесям добавляют 60 и

120 мг трихлоризоциануровой кислоты соответственно и одновременно устанавливают рН 7,0.

Через 4 ч 0,2 мл полученных смесей разбавляют 50 мл воды и одновременно устанавливают рН 6,0 смесью ацетата натрия и уксусной кислоты. Разбавленные пробы подвергают тепловой обработке при 55ОС в течение 30 мин.

Результаты дестабилизации сычужного фермента трихлоризоциануровой кислотой приведены в табл. 8.

Пример 9. Две порции реннилазы-46 по 25 мл смешивают с 20 r ледяной воды для каждой порции и устанавливают рН 7,0 c oMo 4 H. NaOH.

Затем к каждой из этих порций добавляют 70 и 140 мг хлорамина Т, растворенного в 5 мл ледяной воды, соответственно и одновременно устанавливают рН 7,0.

Примерно через 2 ч 0,2 мл каждого образца разбавляют 50 мл воды с одновременным регулированием значения рН до 6,0 с помощью смеси ацетата натрия и уксусной кислоты. Разбавленные пробы с установленным рН подвергают тепловой обработке при 55 С в течение 30 мин.

Результаты дестабилизации фермента хлорамином-Т приведены в табл. 9.

7 1109

Определяют остаточную активность (не подвергнутую тепловой обработке пробу анализируют параллельно в качестве контроля) .

Результаты испытаний приведены в 5 табл. 6.

Пример 5. Готовят две порции смеси 25 мл реннилаэы-46 и 20 г ледяной воды, устанавливают рН 7,0 с помощью 4 н. NaOH. К этим двум пор- 10 циям добавляют 33 и 66 мг N-хлорсукцинимида соответственно, растворяют в 5 мл ледяной воды, при этом рН постоянно поддерживают, равным 7,0.

Через 2 ч 0,2 мл этих порций раз- 15 бавляют 50 мл воды, одновременно устанавливая рН 6,0 с помощью смеси ацетат натрия и уксусной кислоты.

Остаточная активность после реакции сычужного фермента с N-хлорсук- 20 цинимидом следующая: при использовании 33 мг N-хпорсукцинимида 99Х, а при использовании — 66 мг — 96,57.

Проводят тепловую обработку при

55 С в течение 30 мин при рН 6,0. 25

После этого определяют остаточную активность и вычисляют полупериод долговечности и дестабилизацию.

Результаты приведены в табл. 7.

Пример Ь, Готовят раствор

NaOBr (примерно 2 М), добавляя по каплям бром к 10 мл перемешиваемого

4 н. NaOH при охлаждении в ледяной бане.

25 мл реннилазы-46 смешивают с

25 мл воды и устанавливают рН 7,5 однонормальным раствором NaOH. К 25 мл полученного раствора в течение часа добавляют 0,5 мл раствора гипобромида натрия, при этом поддерживают рН 7,3-7,8 добавкой 1 н. НС1, Примерно через 30 мин определяют потерю активности и термостабильность. Потеря активности около 20Х остаточная активность после тепловой обработки в течение 20 мин при 60 С и рН 6,0 составляет 14Х, что соответствует полупериоду долговечности около 7 мин или дестабилизации около 8 С.

Пример 7. 50 мл реннилазы-46 разбавляют 50 мл воды. Смесь охлаждают в ледяной бане и устанавливают рН 7,0 с помощью 1 í. NaOH. Затем вводят около О, 1 г свободного хлора, при этом значение рН падает до 3,8, жидкость становится мутной, а затем прозрачной. Реакционную смесь оставПример 1О. Реннилазу-46 без добавки NaCl 3-кратно разбавляют.

20 мл разбавленной реннилаэы-46 доводят до рН 8,5 и охлаждают до О С, после чего добавляют 0,7 мл 0,05 И раствора иода в 0,25 M иодистом

9 11090 калии. Примерно через 15 мин устанавливают рН 6,0 добавкой 0,1 M NaHSO.

Для аиалиэа этот образец разбавляют и одновременно устанавливают рН 6,0 с помощью смеси уксусной кислоты и ацетата натрия. Затем образец нагревают пои 60 С в течение

30 мин.

Общая активность составила 42,6Х; остаточная активность после тепловой 1О обработки 35Х, полупериод долговечности при 60 С и рН 6,0 20 мин, что соответствует дестабилизации примерно 5 С (контрольный образец дает такой же полупериод при 65 C). 15

Пример 11. Зrпротеазы, продуцируемой штаммом микроорганизмов Mueor pusillus (питательная среда, 1:220000), растворяют в 30 мл

10Х-ного NaC1 и устанавливают рН 6,5 20 при 5-10 С. Добавляют 15 -ный NaOC1 . no 50 мкл трижды с интервалом 30 мин.

После перемешивания в течение 3 ч смесь выдерживают при 4 С в течение о

16 ч и затем устанавливают рН 5,0. 25

Пробы отбирают для определения активности и термостабильности.

В табл. 10 представлено влияние

20-часового хранения на уровень дестабилизации. 30

Пример 12. Исходным материалом служит реннилаза-46, в которую вместо 18Х NaCl добавлено 6Х.

1 л исходного материала разделяют на 4 ч по 250 мл. Температуру под35 держивают 5-10 С и в трех частях устанавливают рН 6,5 с помощью

4 н. NaOH. К этим трем частям добавляют 1, 1, 2 и 1,4 об. 10, 5Х-ного (по весу) NaOCl соответственно, пос- 4 ле чего устанавливают рН 7,5 с помощью 4 í. NaOH и пробы выцерживают в термостате при 5 С.

По истечении времени реакции (3,27 и 53 ч соответственно) отбирают 50 мл пробы от каждой из обработанных гипохлоритом натрия частей и к каждой отобранной пробе добавляют

250 мг (0,5 вес.Х к объему) активированного угля. Через день после введения активированного угля пробы фильтруют и испытывают на стабильность и активность сычужного фермента (1-е определение)

Пробы после добавки гипохлорита о 55 выдерживают при 5 С в течение 9 днеи, после чего их снова испытывают на стабильность и активность сычужного фермента (2-е определение).

54 10

После 4-дневной выпержки при 5 С и 2-дневной при 25 С снова определяют активность сычужного фермента и вычисляют общую активность (3-е определейие).

Полученные результаты сведены в табл. 11 и 12.

Из табл. 11 и 12 видно, что не наблюдается существенного изменения дестабилизации нли общей активности с увеличением времени реакции от

3 ч до 53 ч °

Пример 13. Пять образцов реннилазы-46 по 25 мл готовят с рН 2,0, 2,5, 3,0, 3,5 и 6,0 соответственно.

К каждому из этих образцов добавляют 0,04 r гипохлорнта натрия, при этом значения рН поддерживают на указанном уровне.

Образцы хранят при 5 С в течение

6 дней, после чего анализируют остаточную активность и термостабильность при 55 С и рН 6,0.

Результаты представлены в табл.13

Пример 14. Исходным материа- лом служит реннилаза-46, модифицированная в двух отношениях: культураль:ную питательную среду концентрируют до активности, соответствующей

1,6 -ному раствору чистого фермента, к неочищенному концентрату. добавляют

9 Nacl.

Таким образом модифицируют 5952 кг реннилазы-46 на опытной установке.

Устанавливают рН 6,4 при 9 С с .помощью 34Х-ноrî NaOH и добавляют

10 кг 12,5Х-ного (по объему) раствора НаОС1 к ферменту. Во время этой обработки рН увеличивается до 8,0 значение рН 7,4 устанавливают посредством 37 -.ной НС1. Через 18 ч при

9-5 С значение рН снижают до 6,9.

Затем добавляют 1Х активированного угля при 4-5О С ° Спустя 26 ч проводят фильтрацию через фильтр-пресс и снова измеряют дестабилизацию, после чего поверхностный слой концентрируют при пониженном давлении при 30 С и рН 6,7 и добавляют NaC1 до общего содержания 18 .

Полупериод долговечности конечного продукта равен 11 мин, а дестабилизация составляет 16 С.

Таким образом, реализация изобретения обеспечивает снижение термической стабильности сычужного фермента, сохраняя ее в необходимом интераадЕ.

1109054 рН через

2 ч

18 ч

2ч 1bч

7,0

6,9

6,9

86,3

8,0

7,6

7,6

b6,1

81 ° 7

9,0.

8,2

8,2

78 ° 4

75,4

Исходное значение рй .

Остаточнаа активность образцов, Х, серии

16,3

4,2

4,3

16,3

14,6

32,3

98,7

Эталон

Полулериод Т,, I мин чере з

18 ч

18 ч

2 ч

6 ° 5

1115

7,0

6,-6

11,$

8,0

10,8

18,4

9,0

Исходное значение рН

Исходное значение рН

Таблица т

Остаточнав активность, Х

Ф «Ф

Таблица 2

Таблица 3

Дестабилизацин, С, через

1109054

Таблица 4

Полупериод долговечности, мин

Общая активность

Остаточная активность, Х рН

99,4

59,4

39,9

5,0

0,8

9 5, 3

57,6

37,7

36,0

84,8

56,1

1,6

33,6

53,9

100

0,8

6,0

30,4

91,6

50,5

1,2

28,3

47,9

1,6

81,4

49,1

29,2

0,8

98,1

7,0

42,7

1,2

87,7

24,4

35,7

1,6

78,3

20,2

Та блица 5

Дестабилизация, оС

Изменение Остаточная общей ак- активность тивности, после теп7

Полупериод долговечности, мин

Добавка

2,25 М

Na0C1,,ловой об работки, Ж

0 35 .::

9,9

0,8 +0,6

1,2 0

1,6 -4,4

6,3

5 3

10.

2,0 -8,5

10

2,4 -14,9

3 9

Добавка

Na0C1, мл дестабилизация, С

1109054

16

Таблица 6

Добавка

2,25 М

Na0C1

Остаточная активность, 3

Дестабилиэац я С

Пол уиеракщ долговеч-. ности маи

Изменение общей активности

Добавка

NaC1, 7.

0 " 1

8,9

32

9,1

+7,8

11,3

+4,0

13 4

+6,6

t5,4

+2,4

° ю ю

Таблица 7

Таблица 8

Трихяориэоциан кислоты, мг

Общая активность, X

Полупериод Т 1/2 долговечности мин

Остаточная активность, ти; мин

33 41,5

66 26,4

23,6 с

60

93,0

15,6

10!

81,5

Таблица 9

Хлор амин-Т, Nf

Общая активность, Х

Дестабилиэацим, С

96,5 t9,2

140

77,9 8,5

Добавка

N-хлорсукцинимида, мг

Дестабилизация, еС

Пелуиериощ долговечности, в!Вк

Ю

Полупе" риод долговечносДестабилиэапия, С

1109054

Таблица 10

Полупериод долговечности, мин, после термообработки

Дестабили- зация, Ж

0-30 мин рН 6,0, при 50. С 55 С 1

100 144-155 18-31

84-91 26-22

)-11

Таблица 11

Дестабилизация, С

Определени

53

9,4

9,1

1,2

10,1 10,1

10,0

10,7 10,5

10,6

1,4

10,7

10,6

10,6

Таблица 12

Выход .(общая активность),Ж

Определение время реакции, ч

27.

96

97

99.95

97

Проба/время реакции

О.бщая активность, Ж

Контроль

24 ч

Добавка гипохпорита, об.Ж

Добавка гипохлорита, об. Ж время реакции, ч

9,4

10,1

9,3

10,0

9,3

9,8

1109054

20

Продолхение табл. 12

Выход (общая активность), 7.

Добавка гипохпо

Определение время реакции, ч

Г рита, об.Х

27

1,2

93 .

94

92

94

1,4

90

91

91 89

88!

Таблица 13

Остаточная

Исходное значение рН

Полупериод долговечносЛестабилиактивность, 7 зация, 1 тн мин

1 (через

1 30 мин после !, термо1 обра ботки)

2,0

122

5,5

2,5

6,7

3,0

7,0

3,5

48

7,3

6,0

49

7,2яНИИПИ Заказ 5898/45 Тирах 522 Подписное

III fits "мато®т", г Йхгщой,уи Проехтиая, 4