Способ дифференциации @ -форм от бактериальных форм холерного вибриона

 

1. СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ в -ФОРМ ОТ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ФОРМ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА путем выращивания культуры на питательной среде, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, на поверхность выросших колоний наносят кашпо смеси, состоящей из 0,005-0,05%-ного раствора И-нитроголубого тетразолия хлорида и 10-25 мМ концентрации одного из субстратов цикла Кребса, взятых в соотношении 1:t, и дифференциацию еС-форм от бактериальных форм холерного вибриона осуществляют по отсутствию окрашивания колоний. 2. Способ ПОП.1, отличающийся тем, что в качестве субстрата цикла Кребса используют яблочную кислоту, янтарную кислоту, цитрат натрия, изоцитрат натрия или Di-кетоглутарат. а

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

4 у1) С 12 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3631415/28-13 (22) 05.08.83 (46) 15.06.85. Бюл. 0 22 (72) Ю.M.Ëoìîâ, Л.А.Голубкова, Л.Е.Асеева и В.С.Каграманов (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (53) 576.8.093. 1(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР по заявке Ф 3435223/28-13, кл. С 12 Q 1/04, 1982. (54)(57) 1. СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ

И-ФОРМ ОТ БАКТЕРИАЛЪНЫХ ФОРМ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА путем выращивания культуры на питательной среде, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения способа, на поверхность выросших колоний наносят каплю смеси, состоящей из 0,005-0,05Х-ного раствора И -нитроголубого тетразолия хлорида и 10-25 мМ концентрации одного из субстратов цикла Кребса, взятых в соотношении 1: 1, и дифференциацию е(-форм от бактериальиых форм холерного вибриона осуществляют по отсутствию окрашивания колоний.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю " шийся тем, что в качестве субстрата цикла Кребсе используют яблочную кислоту, янтарную кислоту, цитрат натрия, изоцитрат натрия или -кетоглутарат..Составитель Г.Смирнова

Редактор Н.Кнштулинец Техред А,Бабннец Корректор И.Зрдейи

Заказ 3938/31 Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная, 4

1 11615

Изобретение относится к микробиологии и касается выявления ес-форм холерного вибриона.

Известен способ дифференциации -форм от бактериальных форм холерно- 5 го вибриона путем выращивания культуры на питательной среде с последующим приготовлением бактериальной суспензии и определение в ней одного из конечных продуктов перекисного окисле- 10 ния липидов малонового диальдегнда с помощью тиобарбитуровой кислоты (tJ .

Однако известный способ длителен.

Цель изобретения - ускорение способа. f5

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифференциации О(-форм от бактериальных форм холерного вибрииона путем выращивания культуры на питательной среде на по- 2р

såpõí0ñòü выросших колоний наносят каплю смеси, состоящей из 0,0050,05Х-ного раствора Ь»нитроголубого тетразолия хлорида и 10-25 мИ концентрации одного иэ субстратов цикла 25

Кребса, взятых в соотношении 1: 1, и дифференциацию К-форм от бактернальных форм холерного вибриона осуществляют по отсутствию окрашивания колоний.

39

В качестве субстрата цикла

Кребса используют яблочную кислоту, янтарную кислоту, цитрат натрия, изоцитрат натрия или К-кетоглутарат.

Hp и м е р 1. Непосредственно на подозрительную колонию, выросшую на плотной питательной среде, наносится капля смеси, состоящей из

0р05Х-ного раствора И -нитроголубого тетразолия хлорида и 25 мМ раствора 46 иэоцитрата s соотношении 1: 1. Отсут- ствие окраски свидетельствует о наличии -фори холерных вибрионов. При раскапывании предлагаемой смеси на колонии бактериальной формы холеры мгновенно появляется интенсивно-синяя окраска, свидетельствующая о вос-

55 2 становлении тетразолия в присутствии субстрата цикла Кребса.

Определение можно проводить и на стекле.

Пример 2. На предметное стекло помещают каплю смеси, состоящей из 0,005Х-ного раствора и -нитроголубого тетразолия хлорида и 10 мИ раствора субстрата цикла Кребса — малата в соотношении 1:1 и суспендируют в ней петлей часть колонии, подозрительной на М-форму холерного вибриона. При наличии в культуре о бтрансформированных клеток холерного вибриона восстановления тетраэолия

I не происходит, окраска не развивается. В качестве контроля использовали заведомо бактериальную форму холерного вибриона. При суспендировании в указанной смеси колоний бактериальных культур холерных вибрионов в течение 2-5 мин происходит восстановление тетразолия до формазана и появления синего окрашивания капли.

Пример 3. На предметное стекло помещают каплю смеси, состоящей из Ор057.-ного раствора -нитроголубого тетразолня хлорида и 15 мИ раствора Ф-кетоглутарата в соотношении 1: 1. Затем капилляром пастеровской пипетки берут часть колонии и опускают пастеровскую пипетку с подозрительным на о(-формы материалом в каплю смеси.

Контроль. Пастеровская пипетка с вегетативной формой холерного вибриона. Материал, подозрительный на

Ы-формы холерного вибриона, скрашивания не дает. В контрольной пастеровской пипетке в .течение 5 мин культура окрашивается в синий цвет.

Использование изобретения позволяет упростить и ускорить (2-5 мин вместо 18-24 ч) проведение дифференциации Ы -форм от бактериальных форм холерных вибрионов.