Способ получения сорбента для аффинной хроматографии белков

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ БЕЛКОВ взаимодействием декстрана мол.м. 4-10, содержащего фиксированный на нем триазиновый краситель , и агарозы, отличающийс я тем, что, с целью его упрощения, смешивают равные объемы водных растворов декстрана и агарозы концентрацией 6-10 мас.% при 50-60 с, смесь охлаждают и получившийся гель измельчают двухкратным продавливанием через сетку диаметром пор 200 300 мкм.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

WWMC5H

РЕСПУБРИН (511 С 08 В 37 12 (21) 3558638/23-05 (22) 06. 01. 83 (46) 23.07 ° 85. Бюл. 11 27 (72) М.И. Болеэнин, В.В. Смолянинов и О.Б. Лисина (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (53) 678.555(088.8) (56) Ryan L.D и др. Arch Dochem

Dophys, т, 160, 1974, с. 279-284.

„„SU„„) 168564 A (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА

ДЛЯ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ БЕЛКОВ взаимодействием декстрана мол.м.

1 ° 10 — 4 -10, содержащего фикси— с рованный на нем триаэиновый краситель, и агарозы, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью его упрощения, смешивают равные объемы водных растворов декстрана и агарозы концентрацией 6-10 мас.7 при 50-60 С, смесь охлаждают и получившийся гель измельчают двухкратным продавливанием через сетку диаметром пор 200—

300 мкм.

11685

40 Таблица 1

Содержание агароэы в матрице, 7

Белок

3,6

3,45

Цитохром.С (мол. м. 11700) .4,4

4,3

4,75

2,9

2,9

3,45

3,4

3,65

3,6

Изобретение относится к производству носителей для хроматографии и может быть использовано на предприятиях, получающих сорбенты для аффинной хроматографии белков и S занимающихся очисткой белковых препаратов.

Цель изобретения — упрощение процесса получения .сорбента.

Пример 1. 9,5 r декстрана с фиксированным на нем триазиновым красителем Cibacron blue ГЗСА (мол.м. декстрана х10 ) растворяют

С в 150 мл воды, нагревают до 50 С и смешивают с 150 мл водного 107-ного 15 раствора агароэы, нагретого до

60 С. Смесь помещают в водяную баню для охлаждения. После застывания гель разрезают на кусочки 1х1 см и продавливают дважды через сетку с 20 диаметром пор 200 мкм. После этого проводят декантацию в воде до тех пар, пока надосадочная жидкость станет прозрачной и бесцветной, после чего сорбент помещают в хроматографическую колонку и промывают после.довательно 1 М КС1 (20-кратное промывание) и 20 мм трис-НС1 буфером, рН 7,4 (5-кратное промывание), После промывки иммобилизованным остается 30 около 98Х первоначально взятого декстрана.

Пример 2. 16 5 r декстрана с фиксированным на нем триазиновым красителем Cibacron blue ГЗСА (мол. м. 4x10 ) растворяют в l50 мл воды, нагревают до 60 С и смешивают с 150 мл водного 6Й"ного расто вора агарозы, нагретого до 50 С.

Смесь помещают в водяную баню для охлаждения. После застывания гель

Альбумин человеческий (мол. м. 68000) 64 г разрезают на кусочки 1х1 см и продавливают через сетку с диаметром пор

300 мкм. После этого проводят декантацию в воде до тех пор, пока надосадачная жидкость станет прозрачной и бесцветной, после чего сорбент помещают в хроматографическую колонку и промывают последовательно 1 M КС1 (20-кратное промывание)и 20 мм трис-НС1 буфером, рН 7,4 (5-кратное промывание). После промывки иммобилизованным остается около 977 декстрана.

Пример 3. 13,1 r декстрана с фиксированным на нем триазиновым красителем Cibacron blue ГЗСА (мол.м. 2х10 ) растворяют в 150 мл воды, нагревают до 55 С и смешивают

J с 150 мл водного 8Х-ного раствора агароэы, нагретого цо 50 С ° Смесь .помещают в водяную баню для охлаждения ° После застывания гель разделяют на кусочки 1х1 см и продавливают дважды через сетку с размером пор

250 мкм. После этого проводят декантацию в ваде до тех пор, пока надосадочная жидкость станет прозрачной и бесцветной, после чего сорбент помещают в хроматографическую колонку и промывают последовательно 1 M КС1 (20-кратное промывание) и 20 мм трис-НС1 буфером, рН

7,4 (5-кратное промывание). После промывки фиксированным остается около 987 декстрана.

Сравнительные да1нные по емкости сорбента даны в табл. 1; в табл,2— зависимости количества фиксированного декстрана в агарозе от его мол. массы; в табл. 3 — зависимости емкости предлагаемого сорбента от диаметра пор сетки для продавливания агарозы.

Емкость сорбента, мг/мл, по способу предлагаемому известному

1168564

Таблица 2

Мол.м. декстрана

100

4. 10

85

100

100

82

1 00

100

100

95 е

Таблица 3

EMK0CTb* ° Ж

Диаметр пор, мкм

50

100

100

200

100

300

400 .

500

* 3a 100Х емкости принята емкость при диаметре частиц геля 200-300мкм.

Составитель И. Стояченко

Техред N.Êóçüìà Корректор В. Синицкая

Редактор Н. Гунько

Заказ 4561/23 .Тира к 475 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Концентрация агарозы, Х

2 ° 10

1. ° 10

0,5 ° 10

4 106

2 ° 10

1 10

0,5 10

4 1О

2 ° 10

1.10

0,5 10

Количество зафиксированного декстрана,Ж