Способ газохроматографического анализа жирных кислот

 

СПОСОБ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ЖИРНЫХ КИСЛОТ путем проведения этерификации анализируемой смеси с последующим разделением полученных эфиров на хроматографической колонке с циансиликоновой неподвижной жидкой фазой, отличающийся тем, что, с целью .повьшения селективности способа и расширения области его применения, этерификацию проводят обработкой анализируемой смеси гексафторизопропанолом . (Л 9д 00 эо :У:

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСН ИХ

РЕСПУБЛИН (l 9) (l l) (5I)4 G 01 N 30/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ л

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3643774/23-.04 (22) 20.09.83 (46) 23.07.85. Бюл. Ф 27 (72) Л. Ф. Линберг и С.А. Попов (71) Московский научно-исследовательский институт туберкулеза и Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии (53) 543.54.42(088.8) (56) Т. Serng К. Быстрая простая и чувствительная методика определения свободных жирных кислот в плазме крови методом газожидкостной хроматографии на стеклянных капиллярных колонках J. Lipid Res 1981, 22,1(5, р ° 852-858.

Heckers H. "Силар 10С, снлар 9С, P-2340 и OV-275 в гаэожидкостной хроматографии метиловых эфиров кислот на наполненных колонках. Хроматографические параметры и молекулярная структура. J. Chromatogr. 1977, 135, М 1, р. 93-107. (54) (57) СПОСОБ ГАЗОХРО (АТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ЖИРНЫХ КИСЛОТ путем проведения этерификации анализируемой смеси с последующим разделением полученных эфиров на хроматографической колонке с циансиликоновой неподвижной жидкой фазой, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью .повышения селективности способа и расширения области его применения, этерификацию проводят обработкой анализируемой смеси гексафториэоnpопанолом.

1168846

Изобретение относится к аналити-, ческой химии, в частности к способам газохроматографического анализа карбоновых кислот, и может использоваться в химических и биохимических S лабораториях в качестве метода контроля за содержанием карбоновых кислот в анализируемых образцах.

Целью изобретения является повышение селективности способа и рас- ® ширение области его применения за счет улучшения условий анализа и газохроматографических характеристик образующихся эфиров.

На фиг. 1 показано разделение гек-1> сафторизопропиловых (а ) и метиловых (8 ) эфиров жирных кислот (где

С 4, — эфиры пористолеиновой кислоты, С (5 0- эфиры пентадекановой кислоты С . — эфиры пальмитиновой кис- 2О

16:0 лоты, С,, — эфиры пальмитолеиновой кислоты, С,,о- эфиры маргариновой кислоты, С<>. — эфиры стеариновой кислоты, С ш; — эфиры олеиновой кислоты, C g,z- эфиры линолевой кислоты; С,в. эфиры линоленовой кислоты; С,, — эфиры ц-11-эйкозеновой кислоты С . - эфиры

11. 14-эйкозодиеновой кислоты; С20.4 эфиры арахидоновой кислоты; С,„ — эфиры эруциновой кислоты, общая койцент-30 рация 1 мг/мл),на фиг. 2 — разделение гексафториэопропилового эфира тридексановой кислоты (Р6 С О,О)и метилового эфира церотиновой кислоты (MEC76:ä); на фиг. 3 — разделение и индексы удер35 живания гексафторизопропильвого (Р,С1,,) и метилового (СН С,о) эфира пальмитиновой кислоты на фоне предельных углеводородов С,, на фиг.

4 - нижний предел чувствительности 40

ЭЗД к гексеифторизопропиловому эфиру пальмитиновой кислоты(сигнал: шум=

10: 1), соотношение чувствительности пламенноионизационного и электроннозахватного детектора к разным количест-IS вам гексифторизопропилового эфира пальмитиновой кислоты;на фиг.5 — калибровочные характеристики электронно-захватного и пламенно-иониэационного детекторов. 50

Пример 1. К смеси жирных кислот С f4:1 С, .о С 46:о, С16;,, С <7,ру

Сщ.о, Сщ., 1 Сщ. z С 6, p, C za. 7э Czo)z в

С70 4 и С 7,1 Взятых В количестве 1б Г добавляют 50 мкл смеси бензол-гекса-SS фторизопропанол (4:1) и 50 мкл раствора (57 по объему) трифторуксусного ангидрида в бензоле. Реакционную смесь закрывают и выдерживают при о

40 С в течение 30 мин. Затем реакционную смесь упаривают в токе азота и полученный остаток растворяют в

100 мкл гептана ° В хроматограф вводят

1 мкл раствора. Анализ проводится на капиллярной колонке с фазой Силар10С. Внутренний диаметр — 0,25 мм, длина 50 м. Температурный режим анао лиза: начальная — 140 С/5 мин, коо нечная 230 С, скорость подъема температуры 2 С/мин, инжектор — 240 С, пламенно-ионизационный детектор— о

350 С. Газовый режим анализа: газноситель-водород, линейная скорость40 см/с, входное деление 1:30, при одновременном детектировании на пламенно-ионизационном детекторе и электронно-захватном на выходе капиллярной колонки устанавливается делитель потока, осуществляющий деление потока на каждый детектор в соотношении 1:1, добавочный газ, подаваемый в выходной делитель-азот, расход 50 мл/мин, промывочный поток азота в электроннозахватном детекторе 1 2 мл/мин, поток водорода в пламенно-ионизационный детектор — 25 мл/мин.

Полученная хроматограмма представлена на фиг ° 1 (а) . На фиг ° 1 (б) представлена хроматограмма тех же кислот в виде метиловых эфиров ° Как видно иэ этих хроматограмм, при одинаковом времени, анализ фторированных эфиров проходит при значительно более низкой температуре с большей чувствительностью и лучшим разрешением. Сопоставление результатов анализа по известному и предлагаемому способам представлены в табл.

Пример 2. Смесь метилового эфира церотиповой кислоты (С ) и

76, о гексафторизопропилового эфира тридекановой кислоты (С . ), полученного в условиях, аналогичных примеру 1.

Разделение проводят в условиях примера 1, детектируя разделенные компоненты пламенно-ионизационным детектором и программируя температуру колонки до 240 С. Хроматограмма разо деления смеси представлена на фиг.2, из которой следует, что способ позволяет анализировать жирные кислоты с длиной в 30 углеродных атомов на полярных фазах.

Пример 3. Смесь метилового и гексафторизопропилового эфиров

168846

4 пальметиновой кислоты (С 6. -), растворенных в предельных углеводородах С, при общей концентрации в растворе 1 мг/мл проводят .в условиях примера 1, осуществляя разделение в изотермическом режиме при 140 и детектированием разделенных компонентов одновременно на двух детекторах. Хроматограмма разделения представлена на фиг. 3. Результаты представленные на фиг. 3 и данные табл. 2, полученные при хроматографирОВании смеси кислОт С14 С22 в условиях примера 1, показывают, что жирные кислоты в виде 1, 1, 1,3 3 3гексафторизопропиловых эфиров имеют индексы удерживания на 4 единицы меньше, соответствующих им метиловых эфиров, что позволяет проводить анао лиз при температурах на 40 С ниже чем в случае известного способа.

Индексы удерживания эфиров кислот представлены в табл. 2. ной регистрации разделенных компонентов пламенно-ионизационным и электронно-захватным детекторами анализируют различные количества пальметиновой кислоты в ви е 1, 1, 1,3,3, 3-гексафторизопропиловых эфиров.

Хроматограммы представлены на фиг. 4, а на фиг. 5 и табл. 3 — ка- . либровочные характеристики. Результа10 ты калибровки пламенно-ионизационного и электронно-захватного детекторов представлены в табл. 3.

Иэ представленных данных следует, t5 что линейность электронно-захватного детектора сохраняется и не отличается от пламенно-ионизационного детектора в исследуемых количественных пределах.

20 Пример 5. В условиях примера 1 проводят опфеделение жирных кислот в виде 1,1,1,3,3,3-гексафториэо. пропиловых эфиров из 10 мкл цельной крови. Результаты анализа крови на

25 содержание жирных кислот представлены в табл. 4.

Таблица 1

Степень разделения (К) Критические пары

Результаты сравнения

Предлагаемый способ

Известный способ

0 5 (4:1 f5:О

5,25

0,1

Щ; 5 2о .1

6,5

0,01

20!4 22 1

Таблица 2

Линейные индексы удерживания (J) Известный способ

Предлагаемый способ

° М

c«., 22,6 l8,1

15: О

22,7

18,7

23,7

19,7

24,4

20,0

Пример 4. В условиях прио мера 1, но при 170 С и одновременКислоты в виде соответствующих эфиров

Превосходит извесФный в 2,5 раза

Превосходит известный в 52 раза

Превосходит известный в 650 раэ.

1168846

Продолжение табл.2

Содержание кислот, мкг/мл

Погрешность измерений, 3 Кислота

Известный способ

24,7

20,7

25,7

21,7

21,9

26,2

26,9

22,3

С 16i5

27,9

22,9

27,9

23,8

С2о; з

28,8

24,2

24;6

29,9

29,9

25,8

309600+12300

40460+1020

179+20

ЭЗД

Количест1- 10

1-10

2 ° 10 6

Площадь пика, мкВ с.

Таблица 4

Содержание кислот, мкг/мл

Кислота

Погрешность измерений, X

Известный способ

Известный .способ

3,14 0,66

50в8412э 71

5,3

3,3

4,85i0,96

11, 5+1, 02

8,9

23,39 2,09

28,5 2 20

797 во вводимого образца,г

11;о

С 16 .0.

Предлагаемый способ

М ЮЮ

15700 802

2050+108

Предлагаемый способ

17, 5+2, 10

69,6+2,35

Известный способ

1820+115

211+20

Предлагаемый способ

Таблица 3

Пр едлаг аевый способ

1168846

Продолжение табл,4

Линейные индексы удерживания (Л)

Известный способ

54,47+3,60 72,9+3,40

6,6

4,7

С .. 63,22+1,5 !?,6+1, 50 Средняя погрешность измерений

2 8

8,5

7,5

Obe.

Кислоты в виде соответствующих эфиров

Е с-О сН

Предлагаемый способ

1168846

Фиг. Г

1 I 68846

Фиг. 3

11б8846

1168846

2000

1 10

4ut. 5

Редактор А. Шандор

Заказ 4609/38

Тирак 897

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Площадь пика икб сек

НО f Ю лоличесвбо о5разца

Составитель В. Резников

Техред О.Ващипина Корректор E. Сирохман