Способ получения адсорбентов с гидразидными группами на основе полисахаридных носителей

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДСОРБЕНТОВ С ГВДРАЗИДНЫМИ ГРУППАМИ НА ОСНОВЕ ПОЛИСАХАРИДНЫХ НОСИТЕЛЕЙ, включающий активацию полисахаридного носителя и обработку гидразинсодержащим реагентом, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повьшения устойчивости адсорбентов, активацию проводят обработкой метоксикарбонилхлоридом при объемном соотношении метоксикарбонилхлорида и носителя

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 С 08 В 37 2

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ с

CO

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

Il0 делАм изОБРетений и ОтнРытий (21) 3633081/23-05 (22) 03.08.83 (46) 07.08.85. Бюл. У 29 (72) Б.А,Клящицкий, В.Ф.Позднев, И.В.Межова, 3.П.Славик и В.И.Швец (71) Московский ордена Трудового

Красного Знамени институт тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова и Институт биологической и медицинской химии AMH СССР (53) 678.555(088.8) (56) Akanuma Н, Уашазак1 М.J.

Simple hydrazidation method for

carboxymethyl groups on cross linked

dextran. — J. Biochem, 1978, ч..84, р.р. 1357-1362.

Milchek М., Miron Т, Stable

high capacity and noncharges agarose

derivatives for immobilization of

biologically active compounds

and «r affinity chromatography.

"Мо1. апб. Cell. Biochem" 1974

v. 4, р.р.181-187.

„„SU„, 11714 3 A (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДСОРБЕНТОВ С ГИДРАЗИДНЫМИ ГРУППАМИ НА OCHO—

BE ПОЛИСАХАРИДНЫХ НОСИТЕЛЕЙ, включающий активацию полисахаридного носителя и обработку гидразинсодержащим реагентом, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения устойчивости адсорбентов, активацию проводят обработкой метоксикарбонилхлоридом при объемном соотношении метоксикарбонилхлорида и носителя (1-4):

: 10, в качестве гидразинсодержащего реагента используют гидразингидрат, а обработку проводят при соотношении гидразингидрата и активированного носителя (1-2):?

1 1171

Изобретение относится к химии полимеров, конкретнее к усовершен-. ствованному способу получения адсорбентов с гидразидными группами на основе полисахаридных носителей, которые находят применение при получении биоспецифических адсорбентов для очистки биополимеров методом аффинной хроматографии и могут ис1 пользоваться для иммобилизации раэ- 10 личных лигантов непосредственно или после соответствующих модификаций, Целью изобретения является упрощение процесса и повышение устойчивости носителей. 15

Пример 1 ° Получение адсорбента гидразидосефароза 4В.

Метоксикарбонилирование сефароэы

4В.

10 ил препарата сефароза 4В промы-20 вают на стеклянном фильтре смесью ацетон: вода .(25:75, 50;50, 75:25, по 50 мл) и затем 100 мп сухого ацетона. Гель суспендируют в 10 мл сухого толуола и 2 ил сухого пириди- 25 на и при 4 С и перемешивании добавляют эа 2 мин раствор 1 мл (10 ммоль) метоксикарбонилхлорида в 2 мл сухого ацетона. Смесь перемешивают 30 мин при 4 С, гель отделяют, промывают

50 мл сухого ацетона и 50 мл изопропилового спирта. Для анализа пробу высушивают над Р О . В ИК-спектре полученного образца метоксикарбоналсефарозы 4В обнаружена полоса

1750 см, характерная для группы

-1

ОСОСН .

Гидраэинолиз метоксикарбонилсефарозы 4В, 40

К суспензии 10 мл метоксикарбонилсефарозы 4В в 5 мп изопропилового спирта добавляют 20 мл гндразингидрата и перемешивают при 20 С в течение 16 ч. Затем гель переносят на 45 фильтр и промывают 50 мп изопропилового спирта, 100 мл О, 1 М НС и затем водой до отсутствия гидразингидрата в промывных водах (тест с тринитробенэолсульфокислотой). По- 50 лученный адсорбент — гидразидосефароза 4 — при обработке тринитробензолсульфокислотой в боратном буферном растворе (РН 9) дает красное окрашивание, характерное для гидРа- 55 зидных групп. Количество гидразидных групп на адсорбенте здесь и далее определяют по элементному анализу

463 2 на азот. Оно равно 150 ш моль на 1 г сухого веса.

Пример 2. Получение адсорбента гидраэидо-СЬ-сефароза.

Метоксикарбонилирование сефарозы CL.

Метоксикарбонилирование 10 мп Q; сефарозы проводят, как в примере 1, используя в качестве растворителя хлороформ, не содержащий спирта. Полученный продукт промывают 50. мл сухого ацетона и 50 мл изопропилового спирта. ИК-спектр, см : 1750 (ОСОСН ).

Гидразинолиз метоксикарбонилсефарозы CL.

К суспензии 10 мл метоксикарбонилсефарозы CL в 5 мл изопропилового спирта добавляют 20 мл гидразингидрата и нагревают 3 ч при 70 С. Затем гель промывают, как в примере 1.

Адсорбент гидразидо-CL-сефароза содержит 80 (смоль гидраэидных групп на 1 r сухого веса.

Пример 3. Получение адсорбента гидразидносефадекс G-75.

Метоксикарбонилирование и гидразинолиэ 10 мл сефадекса С-75 про" водят по методике, описанной в примере 2. Полученный адсорбент содержит 38 р моль гидразидных групп на

1 r сухого веса и окрашивается в красный цвет при обработке тринитробензолсульфокислотой.

Пример 4. Получение адсорбента гидразидоцеллюлоза.

Метоксикарбонилирование целлюлозы.

20 мл коммерческого препарата мелкокристаллической целлюлозы обезвоживают промыванием смесями ацетонвода (25:75, 50:50, 75:25, по !00 мл) и затем 100 мл сухого ацетона. Затем носитель суспендируют в 15 мл сухого толуола, содержащего 10 мл сухого пиридина, смесь охлаждают до 4 С и при о перемешивании эа 2 мин добавляют раствор 4 мл (-4 смоль) метоксикарбонилхлорида в 5 мл сухого ацетона. Суспензию перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 мин при о

4 С. Гель отделяют и промывают 50 мл изопропилового спирта.

Гидраэинолиз метоксикарбонилцеллюлоэы.

Гидразинолиэ метоксикарбонилированной целлюлозы проводят, как в примере 1. Полученный продукт дает красСоставитель Т.Мартинская

Редактор Н.Егорова Техред А.Бабинец Корректор JI.Бескид

Заказ 4813/24 Тираж 475 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий .

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

3 11 ное окрашивание при качественном тесте с тринитробензолсульфокислотой.

Содержание гидразидных групп на полученном адсорбенте определяют по следующей методике. К 200 мг адсорбента (сухой вес) добавляют 1 мл насыщенного раствора тетрабората натрия и 1 мл 1 -ного раствора тринитробенэолсульфокислоты, суспензию перемешивают 30 мин при 20 С. Затем ярко-красный гель отделяют, промывают 0,2 М раствором хлористого натрия (общий объем фильтрата и промывных вод 25 мп). К аликвоте фильтра-. та (О, 1 мп) добавляют 0,9 мл насыщенного раствора тетрабората натрия и 1 мл 0,2 M раствора дигидразида адипиновой кислоты. Через 15-20 мин определяют поглощение полученного раствора при 500 нм, считая коэффициент молярной экстинкции Е

РО

16500. По разности между первоначальным и отмытым с адсорбента количеством тринитробензолсульфокислоты ъ 71463 4 считывают содержание гидразидных групп на адсорбенте. Гидразидоцеллюлоза содержит 25 мкмоль гидраэидных групп на 1 г сухого веса.

Пример 5. Получение адсорбента гидразидосефароза CL-4B.

Метоксикарбонилирование сефароэы

CL — 4B.

10 Метоксикарбонилирование сефарозв, CL-4B проводят, как в примере 1, используя 4 мл (40р моль) МКХ в 6 мп сухого ацетона. Полученный продукт промывают 50 мл сухого ацетона и 50 мп изопропанола.

Гидразинолиз метоксикарбонилсефарозы CL-4B.

Гидразинолиз метоксикарбонилсефарозы CL-4B проводят, как в примере 1, 2о используя 10 мл гидразингидрата на 10 мп адсорбента. Полученный адсорбент содержит 190 мкмоль гидразидных групп на 1 r сухого веса адсорбента.