Способ идентификации породы тутового шелкопряда

 

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПОРОДЫ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА, включающий определение характеристик идентифицируемой породы на стадии яйца, сравнительньы анализ полученных характеристик с аналогичными характеристиками известных пород и оценку породной принадлежности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени идентификации, а также снижения трудоемкости , в качестве определяемой характеристики используют белковые формулы, полученные путем сравнения белкового спектра эталона с белковым спектром идентифицируемой породы, при этом белки разделяют по изоэлектрическим точкам, а эталоном служит суммарный белковый спектр всех белковых зон, выявленных у известных пород тутового шелкопряда методом изозлектрофокусирования, причем S оценку породной принадлежности осу (Л ществляют по совпадению белкового с спектра исследуемой породы с одним из белковых спектров известных пород.

СОЮЗ ССВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51) 4

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPGKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТЭЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3720431/30-15 (22) 15.02.84 (46) 23.10.85. Бюл. Р 39 (72) Ю. Б.Филиппович, A.С.Коничев и В.Г.Иванов (71) Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный педагогический институт им. В.И.Ленина (53) 638.22 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 293, 1962. (54)(57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПОРОДЫ

ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА, включающий определение характеристик идентифицируемой породы на стадии яйца, сравнительный анализ полученных характеристик с аналогичными характеристиками известных пород и оценку пород(19> ((((SU„А ной принадлежности, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени идентификации, а также снижения трудоемкости, в качестве определяемой характеристики используют белковые формулы, полученные путем сравнения белкового спектра эталона с белковым спектром идентифицируемой породы, .при этом белки разделяют по иэоэлектрическим точкам, а эталоном служит суммарный белковый спектр всех белковых зон, выявленных у известных пород тутового шелкопряда методом изоэлектрофокусирования, причем оценку породной принадлежности осуществляют по совпадению белкового спектра исследуемой породы с одним из белковых спектров известных пород.

1186! 79

10

30

40

ВНИИПИ Заказ 6461/5 Тираж 742 Подписное филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к биохимии и селекции хозяйственно-ценного вида насекомых — тутового шелкопряда и может быть использовано для определения породы, а также гибридов тутового шелкопряда на фазе яйца.

Цель изобретения — повышение точности и сокращение времени идентификации породы тутового шелкопряда, а также снижение трудоемкости способа.

Предложенный способ осуществляется следующим образом.

Для выделения растворимых белков навеску грены (100 мг) заливают 1 мл

О, 15 М раствора хлорида натрия и растирают в фарфоровой ступке при

0 С в течение 15 мин. Полученный экстракт центрифугируют при 19 .000 g в течение 30 мин, осадок отбрасывают, а супернатант фильтруют через двойной слой капроновой ткани, определяют в нем концентрацию белка и используют для дальнейшей работы.

Фракционирование белков осуществляют методом изоэлектрофокусирования в" тонком слое полиакриламидного геля в диапазоне рН 4,0-6,5. Для получения спектра растворимых белков достаточно 200 мкг белка иэ одного образца грены. По окончании изоэпектрофокусирования гелевые пластины фиксируют в смеси, состоящей из

150 мл этилового спирта и 350 мл дистиллированной воды с растворенными в ней 17,5 сульфосалициловой

KHcJIotbI H 57,5 г трихлоруксусной кислоты. Фракцию проводят в течение

45 мин, после чего белки на пластине окрашивают 0,1Х-ным раствором кумаси

R-25О, который готовят на смеси: этанол — уксусная кислота — вода (в соотношении 3:1:8). Окрашивание ведут при 60 С в течение 15 мин. о

После окрашивания избыток красителя отмывают смесью этанола, уксусной кислоты и воды (3:1:8) в течение

18 ч. Отмытую пластину заливают на

1,5 ч предохраняющим раствором, содержащим глицерин и отмывочную смесь в соотношении 1:10, и далее высушивают при комнатной температуре в течение 14 ч.

Полученная таким образом электрофореграмма может храниться при комнатной температуре по крайней мере в течение 1 года. . Электрофореграмму растворимых белков идентифицируемой породы сопоставляют с эталонной электрофореграммой. Эталоном является суммарный белковый спектр всех белковых зон, выявленных у различных пород тутового шелкопряда методом изоэлектрофокусирования.

Для составления формул растворимых белков грены белковые фракции, выявленные на электрофореграмме, обозначают соответствующими номерами: 1-й номер — у белковой эоны с. наивысшей изоэлектрической точкой (р1), а последний (24-й)номер — у белковой зоны с наименьшей величиной р 1. Степень выраженности белковых зон обозначают черточкой под номером (интенсивная зона) или над номером (слабая зона). Очень слабые эоны обозначают двумя черточками над номером, а двойные эоны — двумя точками. Каждая порода тутового шелкопряда характеризуется неповторимым белковым спектром и соответствующей формулой.

На протеинограммах выявлены характерные белковые спектры двух пород. По эталонному спектру находим, что этим неизвестным породам соответствуют белковые формулы: 1, 2, 3

4, вЂ, вЂ, 7, Д, 9, 10, вЂ, вЂ, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23„

24 и 1, вЂ, 3, 4, вЂ, вЂ, 7, 8, 13, 14, вЂ, 16, 17, â€, 19, 20, 21, 22, 23, 24

Полученные белковые формулы сопоставляют с белковыми формулами известных пород тутовогЬ шелкопряда и делают заключение о принадлежности исследуемой грены к породам

Калхида и САНИИШ-113.