Перхлорат 2,6-ди- @ -метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия как импрегнатор в тонкослойной хроматографии

 

Перхлорат 2,6-ди-п-метоксифенип-4-фенилэтинилпирилия формулы CECCgHs СНзО как импрегнатор в тонкослойной хроматографии . Vi

861 А

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (l9) (ll, / .

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯМИ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

C:-CC

«s0 СЮ oem

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3785896/23-04 (22) 28.06.84 (46) 07.11.85. Бюл. У 41 (71) Ростовский ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М.А. Суслова и Ростовский-на-Дону научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и гигиены (72) А.В. Коблик, Л.А. Мурадьян, С.Г. Благородов, Л.Н. Чернавская и Н.А. Дмитриева (53) 547.8 12.7.03(088.8) (56) Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. — М.: Мир, 1981, с. 98. (51)4С 07 D 309/34 G 01 N 30/90 (54) ПЕРХЛОРАТ 2,6-ДИ-П-МЕТОКСИФЕНИЛ-, -4-ФЕНИЛЭТИНИЛПИРИЛИЯ КАК ИМПРЕГНАТОР

В ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (57) Перхлорат 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия формулы как импрегнатор .в тонкослойной хроматографии. е

1189861

t0

ОСЦ сн

„Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к перхлорату 2,6-ди-h-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия формулы

С

3 который является импрегнатором в тонкослойной хроматографии, и может найти применение при анализе сложных липидных смесей в клинической и лабораторной практике.

Цель изобретения — поиск новых веществ в ряду солей 2,6-диарил-4фенилэтинилпирилия, обладающих новым ,свойством импрегнаторов в тонкослойной хроматографии.

Пример 1. Перхлорат 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия.

Металлируют 2,0 r (0,02 моль) фенилацетилена бутиллитием в абсолют- ном эфире в атмосфере аргона при 3435 С в течение 1,5 ч. К образовавшемуся фенилацетилениду лития добавляют 3,9 г (0,01 моль) перхлората

2,6-ди-п-метоксифенилпирилия, пере- 30 мешивают при кипячении 30 мин до полного растворения добавленного перхлората. Реакционную смесь обрабатывают насыщенным раствором хлорида аммония, эфирный слой отделяют, сушат35 сульфатом натрия и прибавляют

0,03 моль ацетилперхлората. Выход перхлората 2,6-ди-h-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия 65-707, Т.пл.2092!О С. 40

ИК-спектр в вазелиновом масле, см : 2210 (С=С), 1620, 1610 (ароматич.), 1270 (С-О-С), 1100 (С f0 ).

ПМР-спектр в трифторуксусной кислоте, внутренний эталон ГМСД,у,.м.д. 45

3,45 (с, 6Н, 2 ОСНОВ), 6,42-8,0 (м.„

1ЗН, ароматические протоны).

Найдено, 7: С 65,07; Н 4,87;

Cl 7,39.

С Н 1С10

Вычислено, 7:С 65,79; Н 4,29;

Cl 7,,19.

Перхлорат 2,6-ди-ь-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия представляет собой ярко-красные кристаллы, имеющие в растворе оранжево-желтую люминесценцию, не изменяющуюся под действием снета.

Разделение и индикацию липидных смесей осуществляют следующим образом.

Перхлорат 2,6-ди-h-метоксифенил-4-фенилэтилпирилия вводят в силикагель и проводят разделение липидной смеси в системе растворителей, не растворяющей импрегнатор. После разделения смеси липидов по прохождению фронта растворителя пластины сушат на на воздухе при любом освещении. Индикацию разделенных фракций осуществляют в ультрафиолетовом свете (вариант ck), либо после кратковременной обработки парами иода также в ультрафиолетовом свете (вариант 5 ), либо визуально после проявления белых пятен на общем окрашенном фоне (вариант 5 ).

Разделение фракций характеризуется хроматографической подвижностью

R,ò.е. отношением длины пробега фракции (01) к длине пробега всего фронта растворителей (й ) Rg=P> g; шириной фракции d, т.е. величиной пятна, измеренной вдоль линии пробега растворителей; наличием диффузной зоны — "хвоста" С.

Пример 2. Разделение стандартных веществ в силикагеле с предлагаемым и известным импрегнаторами, нитратом серебра и без них.

А. Готовят суспензию 4 r силикагеля в 8 мл О, 17-ного хлороформного раствора перхлората 2,6-ди->-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия и выпивают ее на пластину из стекла

9х12 см. После испарения хлороформа пластина готова к употреблению.

Б. По известной методике готовят суспензию 4 г силикагеля в 10 мл

107.-ного водного раствора нитрата серебра и выпивают ее на такую же пластину. Пластину с суспензией сушат

12-18 ч при комнатной температуре и активируют 1 ч при 105 С. Все процессы проводят в темноте. После остывания пластина готова к употреб— лению.

В. Готовят такую же пластину без импрегнатора. Для этого 4 г силикагеля суспендируют в 8 мл хлороформа или в 10 мл дистиллированной воды, наносят суспензию на пластину и сушат при комнатной температуре и активируют при 105 С 1 ч.

На стартовую .пинию каждой пластины (A, В и Б) наносяч н нице точечных

1189

Как видно из табл. 1, стандартные вещества дают после разгона также одно пятно и на пластинах с 40 предлагаемым импрегнатором. Величина

Rg стандартных веществ при этом не изменяется, т.е. характеристики веществ остаются прежними. Применение перхлората 2,6-ди-й-метоксифенил-4- 45

-фенилэтинилпирилия дает возможность сократить ширину фракций по сравнению с нитратом серебра в среднем на

0,7 мм. Неизменность R при сокращении размеров фракции свидетельствует 50 о повышении точности разделения.

Пример 3. Разделение эвкалиптового масла в тонком слое силикагеля, импрегнированного перхлоратом

2,6-ди-п-метоксифенилэтилпирилия. H

Готовят пластины аналогично примеру 2 (А и Б). На стартовую линию наносят в виде точечного пятна пробу, 3 пятен диаметром не более 5 мм по

5 мкг раствора стандартного вещества (кефалина, холестерина, пальмитиновой кислоты, триолеина, этилстеарата) в хлороформе. Содержание липида 10 мкг.

Разделение фракций проводят в системе растворителей петролейный эфир: диэтиловый эфир: ледяная уксусная кислота 90: 10: 1. По прохождению фронта растворителя пластины вынимают, под- 1р сушивают на воздухе и обнаруживают фракции на пластинах Б и В после сжигания липидов 50Х-ной серной кислоты, а на пластине А в ультрафиолетовом свете после кратковременной обработки парами иода (вариант 5 ). Разная обработка вызвана тем, что пластины Б и В не флуоресцируют в ультрафиолетовом свете и не дают визуального проявления пятен липидов без об- 2О работки, а сжигание липидов на пластине А серной кислотой невозможно за счет реакции импрегнатора с кислотой.

Индикация липидов в парах иода на пластине с нитратом серебра также д невозможна из-за реакции импрегнатора с иодом, и дает общее пожелтение пластины без проявления пятен липидов.

-Стандартные вещества дают на хроматограммах четко очерченные пятна без диффузных зон, что объясняется их высокой очисткой и однородностью.

Поэтому разделение стандартных веществ характеризуют только двумя показателями R< и d. Результаты опре35 деления приведены в табл. 1.

861 4 содержащую 10-100 мкг липидов, а также растворы стандартных веществ,служащих для идентификации фракций пробы. Проводят разделение липидов в смеси растворителей, приведенной выше. Пластины высушивают на воздухе и обнаруживают пятна липидов одним из вариантов а. 5 или з .

В табл. 2 приведены значения R и

d, а также с — наличие (+) или отсутствие (-) диффузной зоны — "хвоста".

Эвкалиптовое масло на силикагеле без импрегнатора дает не более четырех фракций на фоне общей диффузной зоны так как в отличие от стандартных веществ природные смеси липидов обладают большой неоднородностью и содержат минорные компоненты, которые и дают "хвосты

Из табл. 2 видно, что использование в качестве импрегнатора перхлората 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия позволяет не только сократить ширину разделяемых фракций на 0,7 мм в среднем, но и устранить образование "хвостов", т.е. размытых зон, препятствующих четкой индикации пятен, вместо них обнаруживаются минорные компоненты в виде тонких четко очерченных пятен. Кроме того, повышается четкость хроматографического разделения, так как обнаруживаются, помимо основных, минорные фракции, не улавливаемые нитратом серебра, которые дают "хвосты", Как видно из вариантов а и 5, возможно использование предлагаемого импрегнатора для индикации без дополнительной обработки как в ультрафиолетовом, так и при обычном свете, т.е. импрегнатор является одновременно и индикатором.

Пример 4. Подбор оптималь ных для разделения липидов концентраций перхлората 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия.

Аналогично примеру 2 (А) готовят пластины, импрегнированные веществом общей формулы в различных концентрациях (табл. 3). Хлороформные растворы стандартных веществ в одинаковых количествах наносят на стартовую линию в виде точечных пятен на все пластины и разгоняют их в приведенной системе растворителей. После разделения пятна липидов обнаруживают по варианту 6, как наиболее чувствительному. Результаты определения при1189861 ведены в табл. 3, где знаком (+) обозначено наличие пятна, а знаком (-) его отсутствие °

Из табл. 3 видно, что четкое разделение фракций при использовании перхлората 2 6-ди-п-метоксифенил-4-.

-фенилэтинилпирилия происходит при минимальной концентрации 0,05Х и выше, тогда как концентрация нитра- $0 та серебра в тех же условиях составляет 10Х.

Таким образом, рабочая концентрация перхлората 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия в 200 раз 15 меньше концентрации используемого нитрата серебра. Повышение концентрации предлагаемого импрегнатора (выше О, 1X) нецелесообразно, так как она не влияет на результаты определения (интенсивность окраски и люминесценции фона в интервале 0,51,07 достаточна для индикации фракций липидов по всем вариантам a — ь).

Концентрация не оказывает видимого р5 влияния на свойства импрегнатора.

Пример 5. Определение времени визуального проявления пятен липидов на пластинах, импрегниро-, ванных перхлоратом 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия.

Аналогично примеру 2 (А) готовят пластины, импрегнированные предлагаемым соединением концентрации. 0,17, наносят на стартовую линию пробы стандартных веществ, разделяют в системе растворителей и оставляют для визуального обнаружения пятен при комнатной температуре. Результаты. определения приведены в табл. 4. Для нитрата серебра обнаружение пятен в таких условиях невозможно.

Как видно из табл. 4, проявление пятен липидов всех классов заканчи45 вается через 8 ч, а большинство пятен через 7 ч. Некоторые фракции проявляются уже через 5 ч. Поэтому, в зависимости от определяемого класса липидов для визуального обнаружения 50 достаточно 5 — 8 ч.

Пример 6. Определение чувствительности способа с использованием перхлората 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия в качестве импрегнатора — индикатора.

Аналогично примеру 2 (А и Б) гото-вят пластины,.импрегнированные предлагаемым соединением общей формулы и . нитратом серебра и наносят на стартовую линию растворы стандартных веществ с различным их содержанием.

После разделения в системе растворителей проводят обнаружение пятен липидов. Результаты определения приведены . в табл. 5.

Как видно из табл. 5 чувствительность определения с использованием импрегнатора — соединения общей формулы, как индикатора не уступает известному AgNO для свободных жирных з кислот и их эфиров и превосходят его в два раза для фосфолипидов, триглицеридов и холестерина.

Таким образом, по сравнению с наилучшим из применяемых импрегнаторов нитратом серебра при использовании импрегнатора перхлората 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия отпадает необходимость соблюдать определенные условия освещения; повышается точность хроматографического разделения: в среднем на 0,7 мм сокращается ширина фракций и устраняется образование диффузных зон

"хвостов" при неизменной величине К появляется возможность определения фракций как без дополнительной обработки (визуально в обычном или ультрафиолетовом свете), так и с кратковременной обработкой в парах иода.

Кроме того, использование предлагаемого импрегнатора позволяет заменить дефицитный для народного хозяйства нитрат серебра.

Перхлорат 2,6-ди-п-метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия может использоваться в медицине для анализа сложных липидных смесей, а также в органической и аналитической химии.

1189861

Т а б л и ц а

Показатели для силикагеля

Компоненты без импрегнатора с нитратом серебра с предлагаемым импрегнатором

Rg dg MM

Фосфолипиды (кефалин) 0

5 0

3,0

2,8

Свободный холестерин

0,19

4,0

0,19

3,0

0,19 2,5

0,31 4,0

0,31

6,0

0,30-0,31 5,"

Глицериды (триолеин) 0 51

0,51

6,0

0, 51

4,0

3 5

0,88

7,0

0,88

6,0

0,88

5,0

Таблица

Показатели для силикагеля, импрегниро-ванного перхлоратом 2,6-ди-п-метоксифенилэтинилпирилия для варианта

Показатели для силикагеля импрегнированного нитратом серебра для варианта

С dмм С

dмм С

2,8

2,8

2,8

3,0

0,00

2,5

0,13

2,5

2,5

3,3

0,19

1,5

0,24

4,0

4,0

0,31

5,0

2,5

2 5

0,38

-3,5

3 5

3,5

4,0

0,51

1 5

1,5

0,62

0,88

5,0

5 0

5,0

6,0

Неэтерифицированные жирные кислоты (пальмитиновая) Эфиры жирных кислот (этилстеарат) J 4, мм

) а, 1,5

4,0

Rg J d, им

1189861

Та блица 3

Фракция

1,0 0,1

Фосфолипиды

Холестерин

Свободные жирные кислоты

Глицериды

Эфиры жирных кислот

Таблица 4 фракция

5 т

Фосфолипиды

Холестерин

Свободные жирные кислоты

Глицериды

Эфиры жирных кислот

+ +

Таблица 5 динение общей

+ + + +

+ + +

11!1ИИПИ Заказ 6929/26 Тираж 383 Подписное и.псап 1П1П "11атент", r.Ужгород, ул.Проектная, 4

Фосфолипиды

Холестерин

Свободные жирные кислоты

Глицериды

Эфиры жирных кислот

Наличие пятна при концентрации перхлората 2,6-ди-п-xeтoкcифенил-4-фенилэтинилпирилия, % .

10,0 0,05 0,01 0,005

Наличие пятен через, ч

)