Способ определения пармидина и его метаболитов в биологических жидкостях

 

Изобретение относится к сп особам анализа лекарственных препаратов в биологических жидкостях. Цель изобретения - повышение точности и чувствительности способа за счет проведения жидкостной хроматографии высокого давления в обратной фазе и элюции смесью метилового спирта, воды и уксусной кислоты в объемном соотношении (8-10):(86:88):(3,4-3,5). Спектрофотометрирование проводят при длине волны 260-264 им. ISP о5 Р5 00 а О5

ае ао (5р 1. С О1 И 30/00, 33/15

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДа СтнЕННЫй НОМИтЕт СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTI44 (21) 3781027/28-14 (22) 08.08.84 (46) 07.06.86. Бюл. У 21 (71) Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений (72) А.В.Соколов, Н.П.Данилова, Л.Е.Холодов, А.А.Драгунов и P.B.Ìçõaðàäçå (53) 615.3(088.8) (56) Bernard N., Brazier J.L., Sassard J. — J.of Chromatogr, 1978, v.152, Ф 1, р. 260-263. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАРИИДИНА И

ЕГО ИЕТАБОЛИТОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИД-, КОСТЯХ (57) Изобретение относится к crioocoбам анализа лекарственных препаратов в биологических жидкостях. Цель изобретения — повышение точности и чувствительности способа за счет проведения жидкостной хроматографии высо-. кого давления в обратной фазе и элюции смесью метилового спирта, воды и уксусной кислоты в объемном соотношении (8-10):(86:88):(3,4-3,5).

Спектрофотометрирование проводят при длине волны 260-264 нм.

4 12

Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа лекарственных препаратов в биологических жидкостях, и может быть использовано при определении концентрации пармидина и его метаболитов в крови и моче человека для оптимизации фармакотерапии при фармакокинетических исследованиях.

Цель изобретения — повышение точности и чувствительности способа sa счет проведения жидкостной хроматографии высокого давления в обратной фазе и элюции смесью метилового спирта, воды и уксусной кислоты.

Способ осуществляют следующим образом.

Образец биологической жидкости (сыворотки крови, мочи), содержащий пармидин (пиридинолкарбамат, ангинин, продектин-0,0 -диметилкарбамоI ил-(2,6-диоксиметилен) пиридин, эффективный противосклеротический пре/ I парат) и 4 его метаболита — I-дезме тилпармидин, (N-мстил, 0,0 -дикарбамоил-2,6-диоксиметилен пиридин), II дидезметилпармидин (0,0 -дикарбамоил-)2,6-диоксиметилен(пиридин), IIIО-метилкарбамоил-(2,6-диоксиметилен)ппридин и IV — (2,6-диоксиметилен) пиридин, подвергают экстракции хлороформом при рН 8. Затеи экстракт упаривают, остаток растворяют в элюенте и вводят пробу полученного раствора в хроматографическую колонку длиной 15 — 25 см, заполненную нитрилг гым обратнофазным сорбентом,, например, "Сферисорб 5SCN". Детектирование ведут с помощью переменно-волнового спектрофотометра с проточной ячейкой объемом 8 мкл. Времена удерживания препарата и его метаболитов различны, что позволяет проводить их качественное и количественное определение, например, при условиях хроматографирования: колонка "Сферисорб 5SCN" 25 см х 4,6 мм, подвижная фаза — метиловый спирт, вода, ледяная уксусная кислота в соотношении

1 (8-10): (86-88): (3, 4-3, 5) по объему при скорости элюирования 1,8 мл/мин.

Времена удерживания полученных пиков препарата и его метаболитов соответственно равнялись I — 7,8 мин, II

7.,1 мин, Ш: — 3,72 мин, IV—

6„36 мин, Ч вЂ” 4,4 мин. На хроматограмме, полученной в результате исследования сыворотки крови и мочи челове36366 2

25 ка, в этих условиях нет пиков эндогенных веществ в интервале 3-10 мин.

Детектирование выходящих из колонки разделенных компонентов смеси осуществляют по поглощению УФ света с максимумом при длине волны 260-264 нм при котором все анализируемые компоненты разделяемой смеси (I-V) характеризуются сильным пбглощением.

Такой. метод детектирования гарантиру= ет высокую чувствительность анализа.

Содержание препарата и его метаболитов рассчитывают по калибровочным графикам обычными способами. Иинимально детектируемое количество вещества в пробе составляло 5 нг. Площадь под хроматографическими пиками могут определять I с помощью электронного интегратора, а также Графическим методом треугольников. Показана линейная зависимость сигнала детектора от концентрации анализируемьгх веществ (I-V) н большом диапазоне концентраций от 5 нг до 20 мкг в 1мл биологической пробы. Коэффициент вариации при параллельных анализах одинаковых проб 4,8Х.

Hp и м е р f. Определение концентрации пармидина и четырех его метаболитов в моче больного Н. после приема внутрь 0,5 г препарата.

К пробе мочи, собранной за 6 ч после приема пармидина, объемом 0,2 мл прибавляют 0,1 мл фосфатного буфера рН 8 и 3 мл хлороформа. Экстрагируют однократно при встряхивании в течение

20 мин, затем хлороформенный слой от-. деляют, растворитель упаривают в токе

0 азота при 45 С. Сухой остаток раство"ряют в 100 мл элюата и 50 мкл полученного раствора через мерную петлю инжектора вводят в хроматографическую колонку. Условия разделения: колонка

"Сферисорб 5БСИ", элюент СН ОН:H 0:

:СНзСООН (9:87,5:3,5 o6.X). Детектирование проводилось на проточном переменноволновом спектрофотометре

"Алтекс 165 нм, (объем проточной ячейки 8 мкл, диапазон измерения 0 05 А на всю шкалу). Расчет хроматограмм проводили по калибровочным графикам, на оси координат которых откладывали высоту хроматографического пика, а на оси абсцисс — концентрацию вещества в стандартных растворах. При расчете было найдено следующее содержание пармидина в моче

3 1236366 4

15,3 мкг/мл, метаболита II — 21,4 мкг/ Ф о р м у л. а н з о б р е т е н и я

/мл, III — 1,2 мкг/мл, IV — 0,8:мкг/мл.

Пример 2. Определение кон- Способ определения.пармидина и его центрации пармидина и его метаболитов метаболитов в биологических жидкостях в сыворотке крови больного Н. после g путем экстракции, разделения жидкостприема внутрь 1 r препарата. ной хроматографией высокого давления, Образец сыворотки крови больного, элюции и спектрофотометрирования, отобранной через 2 ч после приема отличающийся тем, что, с внутрь 1 г препарата, подвергают экс- целью повьнпения точности и чувствитракционной процедуре и последующему 1О тельности способа, хроматографировахроматографическому разделению ана- ние проводят в обратной фазе, в калогично примеру 1. При этом концент- честве элюента используют смесь метирация пармидина равна 2,3 мкг/мл, лового спирта, воды и уксусной кислометаболита II — 2,8 мкг/мл, III— ты в объемном соотношении (8-10):

0,8 мкг/мл, IV — 0,1 мкг/мл. Опреде- 15 :(86-88):(3,4-3,5), а спектрофотометление концентраций проводили также рирование проводят при длине волны с помощью калибровочного графиКа. 260-264 нм.

Составитель Н.Гуляева

Редактор Н.Данкулич Техред В.Кадар Корректор М.Самборская

Заказ 3083/46 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4.

Способ определения пармидина и его метаболитов в биологических жидкостях Способ определения пармидина и его метаболитов в биологических жидкостях Способ определения пармидина и его метаболитов в биологических жидкостях 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к газохроматографическому анализу изомерных органических соединений, и может быть использовано в качестве метода контроля содержания изомеров трикрезилфосфата в образцах

Изобретение относится к храматографии

Изобретение относится к области аналитической химии и может найти применение в сельском хозяйстве
Наверх