Способ определения пероксидазы

Авторы патента:

G01N33/58 - с использованием меченых веществ (G01N 33/53 имеет преимущество; для исследования на живом организме A61K 51/00)

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в медицине, сельском хозяйстве, химической, пищевой, фармацевтической промьшшенности. Для количественного определения пероксидазы готовят разведения анализируемого раствора, содержащего пероксидазу путем добавления раствора перекиси водорода в натрий-ацетатном буфере. С помощью микродозатора разведения наносят на поверхность иодид серебряной фотопластинки в темноте. После инкубирования фотопластинку проявляют, закрепляют , сушат. Колнчественную оценку пероксидазы осуществляют путем микрофотометрирования пятен на фотопластинке и сопоставления данных с калибровочной кривой. Изобретение позволяет упростить определение пероксидазы при сохранении чувствительности и точности анализа. 2 табл. S Ю 00 СП 00 |

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„„1285374 А 1 (5ц 4 G OI N 33/58

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3822043/28-)3 (22) 12.12.84 (46) 23 01.87.Бюл. 11 3 (72) Д.М.Аронбаев и Н.И.Аронбаева (53) 663.15 (088.8) (56) Хаэиев Ф.Х. Ферментативная активность почв. М.: Наука, )976, с.25-28.

Porstman В., et al. "Comyarision of Cromogens for the Determination of Horse radish Pегоxidase ав о marlEer in enzyme Immunoassay.

I.С1.in. Chem. and Clin Biochem. 1981, v.19, N 7., р.435.

У.Bjorksten "А.Kinetic study of

the Horse Radish Pегоxidase CotaiyяМ Oxidation of Iodide". вЂ” Eur. J.

Biochem. 1968, N 5, р.133-142. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРОКСИДАЗЫ (57) Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в медицине, сельском хозяйстве, химической, пищевой, фармацевтической промышленности. Для количественного определения пероксидазы готовят разведения анализируемого раствора, содержащего пероксидаэу путем добавления раствора перекиси водорода в натрий-ацетатном буфере. С помощью микродозатора разведения наносят на поверхность иодид серебряной фотопластинки в темноте. После инкубирования фотоппастинку проявляют, закрепляют, сушат. Количественную оцен- ф ку пероксидазы осуществляют путем микрофотометрирования пятен на фотопластинке и сопоставления данных с калибровочной кривой. Изобретение позволяет упростить определение пв- Я роксидазы при сохранении чувствительности и точности анализа. 2 табл.

1285374

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в медицине, сельском хозяйстве, химической, пищевой и фармацевтической промышленностях, например, для 5 определения ферментативной активности гем-содержащих веществ и биологических препаратов.

Цель изобретения - упрощение способа определения пероксидазы. !

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят различные концентрации пероксидаэы на постоянном фоне пере!

5 киси водорода в натрий-ацетатном буфере рн 3,8. На смоченную дистиллированной водой или буфером эмульсионную поверхность иодид серебряной фотопластинки в темноте с помощью автоматического микродозатора наносят пероксидазосодержащие растворы. Через определенный промежуток времени в зависимости от ожидаемой концентрации пероксидазы фотоплас5 тинку проявляют, закрепляют, сушат.

Количественную оценку пероксидазы осуществляют путем микрофотометрирования -пятен на фотопластинке .и сопоставления данных с градуированным гра- 30 фиком.

Пример 1. Для построения градуировочного графика для определения пероксидаэы на эмульсионную поверхность фотопластинки "Ilford g" с помощью автоматической микропипетки наносят по 50 мкл! пероксидазосодержащих растворов, полученных путем последовательного разведения исходного раствора пероксидаэы хрена (RZ 0,6

"Reanal") на фоне 0,1 М натрий ацетатного буфера (рН 3,8), содержащим

1 мИоль перекиси водорода. Диапазон определяемых содержаний пероксидаэы (шкала) содержит 0,01 - 10,0 кг/мп пероксидаэы.

Пластину оставляют в темноте на

10 ч. Затем, стряхнув капли раствора, ее проявляют. Полученные на месте контактирования с пероксидаэосодержащим раствороМ пятна фотометрируют на микрофотометре МФ-4, используя шкалу почернений. Строят градуировочный график в координатах

"QG перокси*св ь почернение ° оэф фициент вариации определения не более 102. Результаты определения пероксидаэы приведены в табл.1.

Таблица 1

ИитенсивС еероксида.и

Объект исследовани

Концентрация ероксидазы, í r /мл ность почернений

10000

4,0

Не определяется

5000

3,7

220

3,4

2500

218

1250

186

3,1

625

2,8

160

312

2,5

112

2,2

156

1,6

1,3

10 1,0

0 (фон) 12

Пример 2. Несколько кристалликов лиофилизированного иммунопероксидазного конъюгата для иммуноферментного анализа: аспарагиназа - пероксидаэа и иммуноглобулин G осла против иммуноглобулина G кролика ме- ченый пероксидазой (соответственно конъюгат для прямого конкурентйого иммуноферментного анализа и иммуноферментного анализа с использованием вторых антител) растворяют в физиологическом растворе. Концентрацию бел" ка определяют на спектрометре с использованием номограмм при

= 260 нм и y = 280 нм. Концентрацию пероксидазы рассчитывают по формуле

С = 0,44 мг/мл при ф = .403 нм. Полученные растворы разбавляют 0,001 М раствором Н О, приготовленным в 0,1 М натрий-ацетатном буфере рН 3,8. Раэ1 ведения проводят в лунках полистироловых микроплат для проведения иммунологических реакций, получая по 12 разведений (максимальное вЂ” в 2048

12853

РасчетПроцент активстиная конная ентрация перксидазы, г/мп концентрация пероксидазы при =. 403 нм, нг/мп

Образец ности

Конъюгат аспарагиназа-пероксйдаэа

34,8

-44

1,6

79,2

13,4

35,2

То же

52,8

27,5

Коньюгат IgG осла против

IgG кцоликапероксидаза .

46,6

16,8

22,2

2,7

Составитель Е.Воробьева

Редактор А.Сабо Техред И.Попович

Корректор M,Ñàìáîðñêàÿ

Заказ 7638/46 Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д.4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 раз). В соседний ряд лунок заливают стандартные концентрации нативной пероксидаэы. Производят оценку год.ности конъюгатов, сравнивая его активность с активностью нативной пер- 5 оксидазы . по эффекту на фотопластинках. Результаты определения пероксидазы в конъюгатах для иммуноферментного анализа представлены в табл.2.

Концентрация белка

= 260 нм и Ъ

= 280 нм, мг/мп

Формула изобретения

Способ определения пероксидаэы путем проведения ферментативного окис- 40 ления иодидов перекисью водорода с последующим учетом полученных результатов, отличающийся тем, что с целью упрощения способа, фер74 4

В четырех образцах конъюгат имеет удовлетворительную активность, в одном вЂ” неудовлетворительную (127) и не может быть использован. в иммуноферментном анализе.

Таким образом, не уступая изве тным способам по показателям чувствительности и точности, предлагаемый является способом более простым.

l г

Т аблица 2 ментативное окисление, проводят на фотоматериале, содержащем иодистое серебро, а концентрацию пероксидаэы определяют по интенсивности засветки используемого фотоматериала после его проявления при сопоставлении с градуировочным графиком.

Способ количественного определения @ в моче // 875956

Способ определенияl. .^'плутония-239 // 316351

Способ лучевой диагностики метастазов в средостении // 2109292

Изобретение относится к медицине и предназначено для выявления метастазов рака легкого и опухолей других органов в средостение

Способ определения гомоцистеина в пробе и набор для его осуществления // 2121001

Способ оценки состояния органа по определению изоферментов глутатионовой s-трансферазы и набор для осуществления способа // 2154832

Изобретение относится к медицине, а именно к быстрому анализу для выявления и/или определения глутатионовых S-трансфераз (GSTs) для использования при оценке состояния органа

Способ определения ингибирующего действия веществ на комплемент // 2195665

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и касается способа определения прямого воздействия на функциональную активность компонентов комплемента различных веществ, в том числе лекарственных препаратов

Меченное люциферазой антитело и способ его получения, способ осуществления анализа на специфическое связывание и набор для применения в анализе на специфическое связывание // 2199125

Изобретение относится к биотехнологии, касается способа конъюгирования люциферазы с химической частицей, в частности антителом, предусматривающий (а) смешивание люциферазы с одним или несколькими компонентами, такими как D-люциферин, ионы магния и аденозинтрифосфат, и (b) осуществление реакции ковалентного связывания между люциферазой и связывающим реагентом с использованием ковалентно связующего агента, где D - люциферин, ионы магния и/или аденозинтрифосфат присутствуют в количестве, достаточном для защиты активности люциферазы от ингибирования ковалентно связующим агентом

Реагент для диагностирования инфекции, вызванной вирусом puumala // 2218571

Изобретение относится к диагностике вируса

Способ терапевтического воздействия на организм // 2228531

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для лечения заболеваний, связанных с нарушением функционирования иммунной системы

Способ визуализации смерти клеток в области тела млекопитающего субъекта in vivo // 2228765

Изобретение относится к области медицины, в частности к радиологии

Способ определения уровня циркулирующих аутоантител в биологических жидкостях // 2240561

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии, и может быть использовано для диагностики аутоиммунного процесса

Способ определения направления транспорта и интенсивности обмена веществ между минерализованной тканью и контактирующей с ней биологической жидкостью // 2242007

Изобретение относится к области медицины и может использоваться в стоматологии, травматологии, радиологии, биохимии и патфизиологии