Способ определения циметидина в плазме крови
Изобрете1ше относится к области медицины, к анализу эндогенных и экзогенных веществ в биологических жидкостях. С целью повышения точности определения экстракцию циметидина из плазмы крови проводят этилацетатом в присутствии избытка сухого карбоната натрия. Дансилирование циметидина по остатку имидазола проводят при рН 6. Экстрагируют бензолом, промывают 0,5м бикарбонатом натрия и хроматографируют. Разделение на с -шикагеле проводят смесью хлороформ: ацетон: метанол :25%-ный растзор амг-шака в соотношении 86,9:10:3 1 г :0,05 (по объему). Определение содер-. жания целевого продукта проводят с помощью флуоресцентного детектора. ю со CD Nui О5
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН
„„SU„„129616> А ) (5l) 4 A 61 К. 31/41 р рт4т оц д ер(ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
Il0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3868557/28-14 (22) 17.01.85 (46) 15.03.87. Бюл. Р 10 (71) 1-й Московскиймедицинскйй институт им.И.И.Сеченова (72) С.П.Катруха, С.М.Давыдов, Е.В.Карпенко и В.Г.Кукес (53) 615.?87(088.8) (56) Kozma I,et а1. J. Chromatogr"., 1983, v. 273, р. 223-227. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИМЕТИДИНА
В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к области медицины, к анализу эндогенных и экзогенных веществ в биологических жидкостях. С. целью повышения точности определения экстракцию циметидина из плазмы крови проводят этилацетатом в присутствии избытка сухого карбоната натрия. Дансилирование циметидина по остатку имидазола проводят при рН 6. Экстрагируют бензолом, промывают 0,5М бикарбонатом натрия и хроматографируют. Разделение на силикагеле проводят смесью хлороформ:ацетон:метанол:257-ный раствор аммиака в соотношении 86,9: 10:3 1."
:0,05 (но объему). Определение содер-: жания целевого продукта проводят с помощью флуоресцентного детектора. а
1296167
Изобретение относится к медицине, конкретно к анализу эндогенных и экзогенных веществ в биологических жидкостях.
Цель изобретения — повышение точ- 5 ности способа. .Экстракцию циметидина из плазмы этилацетатом в присутствии сухого карбоната натрия, модифицию циметидина проводят с помощью ДНС-хлорида
10 при рН 6,0, причем переводят дансилпроизводное в гидрофобный растворитель (бензол) и разделяют хроматографией на силикагеле с помощью смеси хлороформ: ацетон:метиловый спирт:
:25%-ный аммиак в соотношении 86,9: ."10:3,1:0,05 (по объему) в использованием флуоресцентного детектора.
Способ осуществляется следующим образом. Экстракцию циметидина из плазмы крови проводят этилацетатом в присутствии избытка сухого карбоната натрия, что создает необходимое для перехода циметидина в органический растворитель высокое значение рП и иопной силы, и приводит практически к количественному извлечению препарата. Дансилирование циметидина по остатку имидазола проводят при низком значении рН (рН 6,0), что зна- " чительно уменьшает возможность образования побочных флуоресцирующих веществ, в т.ч. ДНС-пептидов и ами— нов, переходящих в этилацетат при экстракции из плазмы. Экстракцию 35
ДНС-циметидипа из реакционной смеси проводят с помощью неполярнего растворителя-бензола с поспедующей промывкой бензольпого экстракта водным 0,5 М бикарбонатом натрия, что позволяет количественно извлечь
ДНС-циметидин с. минимальными флуоресцирующими примесями. Разделение хроматографией на силикагеле проводят смесью хлороформ:ацетон:метиловый спирт:25Е-ный аммиак в соотношении
86,9:10:3, 1:0,05 (по объему) с использованием флуоресцентного детектора.
Пример 1. Изучение фармакокинетики циметидина при внутривенном введении препарата.
Больной Т., 47 лет, поступил в городскую больницу с диагнозом язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, Больному вводили в локтевую вену 200 мг циметидина (фирма "0rion"
Финляндия) в 5 мл 0,97.-ного раствоСреднее значение коэффициента детерминации, найденное для процесса распределения лекарственного средства в крови (обследовано 12 больных), составило 0,9774, а для процесса элиминации 0,9533.
Элиминация циметидина при внутривенном введении:
Время, мин Концентрация, мкг/мл
) 10
1 ) 9,65
6,90
4,83 ра NaC1 внутривенно, струйно. Забор крови произвоцили из локтевой вены другой руки с помощью катетра (фирма
"Vygon", Франция) через следующие временные интервалы: 5,10,15,30,60, 120,240,300 и 360 мин. Кровь центрифугировали при 3 тыс.об./мин, Плазму отбирали и хранили при -20 С.
К 1 мл плазмы добавляли сухой карбонат натрия до насыщения (150 мг) и 2 мл этилацетата. После 5-минутного встряхивания смесь центрифугировали и 1,5 мл этилацетатного экстракта, упаривали при температуре о
50 С в токе азота. К сухому остатку добавляли 0,2 мл 0,17 М фосфатного буфера (рН 6,0) и смесь инкубировали при 37 С в течение 30 мин. Дансилциметидин экстрагировали 1,5 мл бнзола при сильном встряхивании. Водную и органическую фазы разделяли центрифугированием, бензольный экстракт промывали 0.,5 М раствором карбоната натрия и водой (по 0,2 мл) . мл бепзольного раствора ДНС-циметидина упаривали при 50 С в токе азота. Сухой остаток растворяли в 0,5 мл подвижной фазы и аликвоту (50 мкл) наносили на колонку хроматографа.
Определение дансилциметидина проводили на жидкостном хрсматографе фирмы "Alt«x" с инжектором на 50 мкл и колонкой с необращенным силикагелем фирмы Partisil PXS 5/25 (250х4,6мм) .
Подвижной фазой служила смесь хлороформ:ацетон:метиловый спирт:257.-ный аммиак в соотношении 8,6: 10:3, 1:
:0,05 (по объему). Скорость элюции мл/мин, скорость ленты на самописце 20 см/ч. Детекцию проводили с помощью флуориметра фирмы "Gijson (рабочая область лампы 300-600 нм), range 5-10.
1296167
30 2,76
60 1,66
120 1,15
240 0,57
300 0,43
360 0,28
Злиминация циметидина при оральном введении:
Время,мин Концентрация мкг/мл
0 !
420
1,0 1, 79
1,52
1,58
1,41
0,45
0,29
О, 19
0,16
Составитель Л.Пашук
Редактор N.Òîâòèí Техред М.Ходанич Корректор С.Черни
Тираж 596 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 648/8
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул.Проектная, 4
Пример 2, Изучение фармакокинетики циметидина при оральном введении.
Через сутки после внутривенного введения тому же больному вводили через рот 400 мг циметидина (фирма
"Orion", Финляндия). Забор крови производили из локтевой вены с помощью катетра (фирма "Vygon", Франция) в следующие. временные интервалы: 15, 30, 45 мин, 1,2,3,5,6 и 7 ч.
Дальнейшая обработка крови и анализ проводились точно также, как описано в примере Р 1. Результаты определения концентраций циметидина в крови представлены в таблице. Среднее значение коэффициента детерминации, найденное для процесса элиминации лекарственного средства из организма при оральном введении препарата (обследовано 12 больных), составило
0,9534 °
Способ позволяет проводить анализ циметидина в плазме крови с линейной зависимостью между высотой пика на хроматограмме и концентрацией в кро5 ви в пределах 0,05-10 мкг/м, что соответствует концентрациям, наблюдаемым в крови при лечении больных данным препаратом при любом способе введения. Среднее квадратичное откло10 нение метода составляет менее 57.
В способе линейность в соотношении концентрация лекарственного средства в плазме — высота пика на
f5 хроьгатограмме соблюдается в диапазоне 50-10000 нг/мл, т.е. диапазон концентраций шире чем в прототипе (30700 нг/мл) и охватывает интервал концентраций наблюдаемых у больных
20 от 0 до 12 ч после введения препарата, при оральном и внутривенном введении.
Ф о р и у л а и з о б р е т е н и я
25 Способ определения циметидина в плазме крови путем экстракции органическими растворителями с последую- щим разделением на силикагеле жидкостной хроматографией, о т л и ч аю шийся тем,что, с целью повышения точности способа, экстракцию из плазмы проводят этилацетатом в присутствии сухого карбоната натрия, перед хроматографией цимитидин модифицируют дансилхлоридом при рН 6,0, переводят дансилпроизводное в бензол, хроматографическое разделение на силикагеле проводят смесью хлороформ:
:ацетон:метиловый спирт:25Е-ный раствор аммиака в соотношении 86,9:
:10:3, 1:0,05, а определение содержания целевого продукта проводят с использованием флуоресцентного детектора.
