Штамм бактерий bacillus sphaericus - продуцент энтомопатогенного препарата против личинок кровососущих комаров

 

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий, который может быть использован для борьбы с кровососущими комарами. Цель изобретения - получение штамма бактерий, обладающего высокой энтомицидной активностью в отношении кровососущих комаров. Предложен штамм бактерий Bacillus sphaericus ЦМПМ - 3276 (В 101), обладающий вирулентностью (ЛК₅₀) на Culex pipiens - 0,58·10³ спор/мл, титр спор - 1,2 ·10⁹ спор/мл. 1 табл.

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм (бактерий), который может быть использован для борьбы с кровососущими комарами. Целью изобретения является получение штамма бактерий, обладающего высокой энтомицидной активностью в отношении кровососущих комаров. Штамм Bacillus sphaericus является природным, выделен из погибших личинок комаров, авторами присвоен N В 101, хранится в коллекции Центрального музея промышленных микроорганизмов ВНИИгенетики за N 3276. Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики: молодые клетки имеют вид палочек, очень подвижны, размер их зависит от возраста культуры. При формировании субтерминально расположенной споры, клетки приобретают булавовидную форму, споры округлые. На МПА колонии суточной культуры серовато-белые, гладкие, блестящие, округлые с ровным краем, пастообразные. На картофельном агаре рост по штриху обильный, сплошной, с волнистым краем, серовато-белого цвета, пастообразный, зернистой консистенции, пигмента не образует. Мясо-пептонную желатину разжижают не очень интенсивно. При посеве уколом на МПА рост на поверхности и в верхнем слое. На мясо-пептонном бульоне через двое суток наблюдается образование рыхлого осадка (довольно обильного); бульон слегка мутноватый, помутнение однородное. Биохимические свойства штамма: не утилизирует углеводы глюкозу, сахарозу, ксилозу, арабинозу, маннозу, маннит, глицерин. Обладает активностью протеазы, уреазы, каталазы. Крахмал не гидролизует, нитраты не восстанавливает. Штамм Bacillus sphaericus N В 101 не чувствителен к вирулентным фагам (7, 17, 18, 25, 25/16, И-77, 22, C/П коллекция ВНИИИПМ) дизирующим культуры Bacillus thuringiensis. Штамм хорошо растет на дрожже-полисахаридной среде (ДПС), используемой в производстве средств защиты растений и на более бедных средах (2- и 3% БВК). Средняя продуктивность штамма на ДПС (титр спор) составляет (1,6±0,45)·10⁹ спор/мл, максимальная 3,2· 10⁹ спор/мл. Инсектицидная активность штамма ЛК₅₀ в отношении комаров Aedes aegypti составляет (10,7 ±5,9)· 10⁴ спор/мл; ЛК₅₀ эталонного штамма Bacillus sphaericus 2362 (один из лучших известных в мире штаммов) 19·10₄ спор/мл. Инсектицидная активность штамма В 101 в отношении комаров Culex pipiens в сравнении с таковой одного из наиболее вирулентных штаммов Вacillus sphaericus 1593 (по данным литературы) представлена в таблице. Примеры конкретного использования штамма Bacillus sphaericus ЦМПМ В 3276 (в 101). П р и м е р 1. Культивирование штамма на дрожже-полисахаридной среде (ДПС): 3% БВК; 1,5% кукурузной муки, рН 7,0-7,2, вода водопроводная. Условия глубинного культивирования: на круглой качалке (260 об/мин) в колбах емкостью 750 мл с объемом среды 30 мл 29-30^oC в течение 40-48 ч. Посевной материал суспензия спор, полученная смывом культуры с картофельного агара. Продуктивность штамма определяли методом серийных разведений с последующим высевом на МПА глубинным способом. Средний титр спор составлял - 2,67· 10⁹. Инсектицидная активность штамма определялась в отделе медицинской энтомологии Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. И. Марциновского. Вирулентность штамма в соотношении комаров Culex pipiens (ЛК₅₀) составляла 0,85·10³ спор/мл; в отношении Aedes aegupti 4·10⁴ спор/мл. П р и м е р 2. Культивирование штамма на среде следующего состава: 2% БВК; 0,5% соевой муки; вода водопроводная рН 7,0-7,2. Условия культивирования и методы определения продуктивности и вирулентности штамма те же, что в примере N 1. Титр клеток в конце культивирования составлял - 4,3·10⁹, спор -1,98· 10⁹. Вирулентность по отношению к личинкам Culex pipiens (ЛК⁵⁰ 0,58·10³ спор/мл. П р и м е р 3. Культивирование штамма В 101 в трехлитровом ферментере АНКУМ-203 на среде следующего состава: БВК 3% кукурузная мука 1,5% СаСl₂ 0,15% MgSO₄ 0,03% вода водопроводная, рН исходное - 7,0. Условия культивирования: аэрация 0,6 объемов / объем среды поддерживается в период интенсивного размножения культуры и спорообразования; мешалка работает постоянно с начала режима (220-300 об/мин); температура культивирования (29±1)^oС, время культивирования 40-48 ч. Титр спор и вирулентность определяли вышеуказанным способом (пример 1). Титр спор составлял -1,2· 10⁹ спор/мл, вирулентность (ЛК₅₀) на Culex pipiens 0,58 · 10³ спор/мл.

Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus sphaericus ЦМПМ 3276 продуцент энтомопатогенного препарата против личинок кровососущих комаров.

РИСУНКИ

Рисунок 1