Способ получения протеолитических ферментов

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в ч аст- НОСТ.И, к получение биологически активных веществ протеолитических ферментов И инсектицидного комплекса. Целью изобретения является одновременное получение, инсектицида и протеолитических ферментов на одной питательной среде. Для одновременного .получения на одной питательной среде протеолитических ферментов и инсектицида используют штаммы бактерий Bacillus thuringiensis v. galleria 69-6 - промьшленный продуцент инсектицидного препарата-энтобактерина и Bacillus thuringiensis v. galleriae GFP-51 - продуцент протеолитических ферментов. Посевные вегетативные культуры используют для засева чферментациойной среды, содержащей источники азота, углерода и стимуляторы роста. В ферментационную среду вносят вначале посевной материал штамма Вас. thuringiensis v. galleriae GFP-51. При выходе культуры на стадию экспоненциальной фазы роста вносят посевной материал штамма Вас. thuringiensis V. galliae 69-6 при Соотношении посевных доз 9:1. Культивирование проводят при , 220об/мин, в качапочных колбах. Длительность ферментации (до 95% высыпания спор). составляет 44-48 ч. По окончании ферментации биомассу отделяют, от культуральной жидкости центрифугированием. Из культуральной жидкости одним из промьгашенньп методов получают ферментный препарат. Биомасса используется в качестве биологического инсектицида , t табл. с (Л с 1чЭ ОЭ 0

СОЮЗ COBETCHNX

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕОЪЬЛИК

OnHGAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ Y

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ГЮ ДЕЛАМ ИЗО1Ы%ТЕИИЙ И OTHPHTHA (46) 30.07.91. Бюл. Р 28 (21) 3794948/13 (22) 24.09.84 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт. прикладной микробиологии и Всесоюзный научно-исследовательский проектно-конструкторский институт прикладной биохимии (72) В.А.Говорунова, П.В.Бабаева, В.В.Шевцов, Ф.Н.Чегодаев, А.И.Пахту" ев, Т.Ф.Ломовская, В.И.Коровкин и Л.Д. Сидорова (53) 577.15.07:632.953.1(088.8) (56) Прогрессивные методы производ, ства энтомопатогенных препаратов,.

M., 1981, с. f0;

Авторское свидетельство СССР

В 1181316, кл. С 12 0 9/54, 28. 05. 84. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности, к получению биологически активных веществ протеолитических ферментов и инсектицидного комплекса.

Целью изобретения является одновре.менное получение инсектицида и про-: теолитических ферментов на одной питательной среде. Для одновременного получения на одной питательной среде

80,1316239 И (51)5 C 12 N 9/54 А 01 М 63/00 протеолитических ферментов и инсектицида используют штаммы бактерий Bacillus thuringiensis ч. galleria

69-6 — промьппленный продуцент инсектнцидного препарата-энтобактерина и

Bacillus thuringiensis v. galleriae

GFP-5 1 - продуцент протеолитических ферментов. Посевные вегетативные культуры используют для засева .ферментационной среды, содержащей источники азота, углерода и стимуляторы роста. В ферментационную среду вносят вначале посевной материал штамма

Bac. thuringiensis v. galleriae

GFP- 51. При выходе культуры на стадию экспоненциальной фазы роста вносят посевной материал штамма Вас. thuringiensis v. ga11iae 69-6 при соотношении посевных доз 9: 1. Культивирование проводят при 30 С, 220об/мин, в качалочных колбах. Длительность ферментации (до 95Х высыпания спрр). составляет 44-48 ч. По окончании фер- ®®ь ментации биомассу отделяют. от культуральной жидкости центрифугированием. еь

Из культуральной жидкости одним из фф промьппленных методов получают фермен- р тный препарат. Биомасса используется в качестве биологического инсектицида. 1 табл.

1 13162

Изобретение относится к микробно логической промьппленности, s част ности к получению биологически активных веществ — протеолитических фер ментов и инсектицнднога комплекса.

Цель изобретения - одновременное получение инсектицида на одной питательной среде.

Пример. Для одновременного получения на одной питательной среде f© протеолитических ферментов и инсектицида используют следующие штаммы.

Штамм 69-6 Вас. thuringiensis

v. galleriae - промышленный продуцент инсектицидного препарата — энтобак- 1$ терина. Штамм GFP-51 Вас. ЬигЫфепsis v. galleriae - продуцент протеолитических ферментов депонирован в

ЦИПКО "ВНИИгенетика", коллекционный номер ЦИПИ В-3004. 20

Именно зти штаммы из большого ко" личества изученных микробных ассоци аций не проявляют антагонистических свойств и представляют собой перспек.тивную микробную ассоциацию. 25

Для получения посевного материала используют культуры микроорганизмов, выращенные до спорового состояния на

СПА. Перед засевом в ИПБ с целью по-. лучения посевного материала споры 3(} о прогревают при 75 С 15 мин. Затем, культуры подращивают в ИПБ при

220 об/мин, 30 С, в колбах емкостью

750 мл, Полученные посевные вегетатинные культуры используют для эасе1:5 1:9 2:1

5:1

9:1

Асинхронность штаммов активность биомассы ЬК р (cn./ìë) < тоновый, порошок - ферментный препарат. Протеологическая активность ацетонового порошка определяется модифицированным методом Ансона. Биомасса используется в качестве биологическоу ро инсектицида. Инсектицидная активность (LKрр) штаммов определяется по

ГОСТ 21108-75, энтобактерин сухой.

Таким образом, при использовании предлагаемого способа повышается коСоотношения посевных доз штаммов СРР-51 и 69"6 Вас.

thuringiensis v. galleriae

Синтез активность проБАВ теаз (ед/г) Культивирование проводят при 30 С, 220 об/мин, в качалочных колбах емкостью 750 мл. Длительность ферментации (до 95% высыпания спор) составляет 44-48 ч. По окончании ферментации биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием.

Из культуральной жидкости одним из промышленных методов — методом осаждения белков ацетоном получают аце-

39 2 ва ферментационной среды. Состав ферментационной. среды и условия ферментации при совместном раздельном выращивании штаммов, Ж:

xgso, 0,05, Мп80 . 0 04

° CaCl< 0,23 и 0,08 р 1,13

Сп$0 0,001

Ва-цитрат 0,01 (Вн,), 8О 0,02

Кормовые сухие, дрожжи 2

Кукурузный экстракт 0,5

Соевая мука 0,5 рН среды до 7,2-7,3 доводят до 40% йаОН.

В ферментационную среду вносят вначале посевной материал штамма

GFP-51 Вас. thuringiensis v. galleriae и при выходе культуры на стадию экспонеяциальной фазы роста вносят посевной материал штамма 69-6 Вас.

thurihgiensis v. galleriae в соотношении 9:1. При других пропорциях посевных доз поставленная цель не до:стигается.

В таблице показано влияние соотно" шения посевных доз штаммов GFP-5 1

H 69-6 Вас. thuringiensis ч. galleriae на синтез биологически активйых веществ (БАВ).

25-50 30-80 70-140 (1-3) 109 (4-9) 10 (3-7) 101

1316239

Составитель В.Романова

Техред Л.Сердюкова . Корректор A.0бручар

Редактор Л.Волкова

Тираж 373 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3130

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 зффициент использования оборудования в результате того, что эа одну ферментацию и» одного ферментера можно получиФЪ два продукта - ферментный препарат и биологический инсектицид вследствие комплексного использования продуктов культивирования расход питательной среды сокращается вдвое; продукты культивирования используются полностью, что предполагает воэмош- 10 ность органиэации малоотходного производства.

Формула изобретения

Способ получения протеолитическнх ферментов путем приготовления посевного материала штамма бактерий Bacillus thuringiensis var. galleriae

GFP"51, засев и,культивирование в жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода и стимукя" торы роста, с последующим отделением биомассы и выделением иэ культуральной жидкости протеолитическнх ферментов, о т л и ч а to шийся тем, что, с целью одновременного получения инсектицида, на стадии экспоненциального роста в питатеЛьную среду допол-. нительно вносят посевной материал штамма бактерий Bacillus thuringiensis var. galleriae 69-6, при этом посевной материал каждого из штаммов берут s соотношении, соответственно равном 9:I., а отделенная от культуральной жидкости биомасса является инсекти- цидом.