Средство для прижизненного выявления клеток нервной ткани

 

Изобретение относится к нейрохирургии , точнее к средствам для прижизненного выявления нервнь1х и глиальных клеток периферической и центральной нервной системы (ЦНС) в культурах ткани ЦНС, в культурах периферической нервной системы и свежих срезах нативного мозга. Цель изобре,тения - сокращение времени выявления .нервных клеток путем поддержания оптимальных физиологических условий во время окрашивания исследуемых препаратов . Для этого средство содержит вещества в следующем соотношении, мас.%: метиленовый синий 0,30-0,60; хлористый натрий 0,75-0,90; хлористьй калий 0,03-0,06; хлористый кальций 0,011-0,020; сернокислый магний 0,015-0,030; двузамещенный фосфорнокисльш калий 0,004-0,008; кислый углекислый натрий 0,03-0,045; глюкоза 0,2-0,4; вода остальное. Время выявления 18-20 мин. 1 табл. с S (Л со vj оо

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11)

А1 (5114 С О N 0

ICE". : -

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3781638/28-14 (22) 18.08.84 (46) 15.06.87. Бюл. Ф 22 (71) Институт биологической физики

АН СССР (72) А.P. Чубаков и Э.Ф. Саркисова (53) 615.475(088.8) (56) Чумасов Е.И., Материалы V-VI конференций и выставок по изобретательству и рационализации в медицине. Л.:

Медицина, 1976, с. 136-138. (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ПРИЖИЗНЕННОГО ВЬИВЛЕНИЯ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ (57) Изобретение относится к нейрохирургии, точнее к средствам для прижизненного выявления нервных и глиальных клеток периферической и центральной нервной системы (ЦНС) в культурах ткани ЦНС, в культурах периферической нервной системы и свежих срезах нативного мозга. Цель изобретения — сокращение времени выявления нервных клеток путем поддержания оптимальных физиологических условий во время окрашивания исследуемых препа- . ратов. Для этого средство содержит вещества в следующем соотношении, мас.7.: метиленовый синий 0,30-0,60; хлористый натрий 0,75-0,90; хлористый калий 0,03-0,06; хлористый кальций 0,011-0,020; сернокислый магний

0,015-0,030; двузамещенный фосфорнокислый калий 0,004-0,008; кислый углекислый натрий 0,03-0,045; глюкоза

0,2-0,4; вода остальное. Время выявления 18-20 мин. 1 табл.

0S г

1 13173

Изобретение относится к нейрогистологии, в частности к средствам для прижизненного выявления нервных и глиальных клеток центральной и периферической нервной системы,, и может быть предназначено для выявления и исследования нервных и глиальных клеток в культурах ткани ЦНС, а также может найти применение для прижизненного исследования нервных и 10 глиальных клеток в культурах периферической нервной системы и свежих срезах нативного мозга.

Цель изобретения — сокращение 15 времени выявления нервных клеток путем поддержания оптимальных физиологических условий во время окрашивания исследуемых препаратов.

Пример 1. Готовят средство 20 для прижизненного выявления клеток нервной ткани, для чего растворяют

0,3 r химически чистого кристалли,ческого красителя метиленового синего в 25 мл сбалансированного соле- 25 всго раствора состава, г/л: хлористый натрий 7,5; хлористый калий 0,3, хлористый кальций 0,11; сернокислый магний О, 15; двузамещенный фосфорнокислый натрий 0,04; од- 30 нозамещенный фосфорнокислый калий

0 04; кислый углекислый натрий 0,30, глюкоза 2,0, остальное вода, а за.— тем непосредственно перед опытом разбавляют 1 мл исходного раствора в

3 мл того же солевого раствора.

На препарат культуры гиппокампа, выделенного из мозга новорожденньгх крыс и культивированного методом вращающихся пробирок, наносят 3 капли приготовленного средства и помещают его в термостатированную камеру, в качестве которой используют столик-термостат (t +37 С). Контроль за окрашиванием проводят с помощью 45 микроскопа .аЬоча1 (Фирмы Кари Цейсс

Йена, ГДР).

Через 5 — 6 мин были окрашены глиальные клетки в тонкой части (зоне

Роста) культуры. Спустя 10 мин нача ли проявляться нервные клетки и их отростки. Оптимальная степень окрашивания была достигнута в данком случае к 20-й минуте.

Пример 2. Средство для прижизненного выявления клеток нервной ткани, содержащее г/л: метиленовый синий 4,5; хлористый натрий 8,60; хлористый .калий 0,4; хлористый кальций 0,14 сернокислый магний 0,20; двузамещенный фосфорнакислый натрий

0,06; однозамещекный фосфорнокислый калий 0,06; кислый углекислый натрий 0,35; глюкоза 3,0; остальное вода. Готовят по примеру 1.

Для выявления нервных клеток на препарат культуры ткани коры головного мозга крыс, выделенный и культивированный по примеру 1, наносят 3 капли свежеприготовленного вышеопи-санного раствора. Процесс окрашива-, ния проводят также, как в примере 1 °

В данном случае нервные клетки начали выявляться по всему эксплантагу через 8 мин. Спустя 18 мин было достигнуто хорошее окрашивание нейронов и их отростков.

Пример 3. Средство для выявления нервных клеток, содержащее г/л: метиленовый синий 6,0; хлористый натрий 9,0; хлористый калий 0 5, хлористый кальций 0,20; сернокислый кальций 0,20; сернокислый магний

0,30, двузамещенный фосфорнокислый натрий 0,08; однозамещенный фосфорнокислый калий 0,08; кислый углекислый натрий 0,45; глюкоза 4,0, остальнре

I вода, Готовят по примеру 1. На препарат культуры ткани ядер шва наносили 3 капли этого раствора и окрашивание проводили, как описано в примере 1.

Спустя 5 мин краска включалась в глиальные клетки на периферии культуры, а нервные клетки начали выявляться к 10-1 минуте от начала окрашивания. Через 20 мин нейроны и их отростки были хорошо окрашены.

Сравнительные данные по времени выявления клеток нервной ткани в зависимости от состава использованного средства на 1 л водного раствора представлены в таблице.

Формула изобретения

Средство для прижизненного выявления клеток нервной ткани, содержащее метиленовый синий, хлористый натрий и воду, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью физиологической оптимизации средства и возможности сокращения в1эемени выявления, оно дополнительно содержит хлористый калий, хлористый кальций, сернокислый магний, двузамещенный фосфорнокислый натрий, однозамещенный фосфорнокислый калий, кислый углекислый натрий и

1317308 глюкозу при следующем соотношении компонентов, мас.7:

О, 004-0, 008

0,004-0,008

0,30-0,60

0,75-0,90

0,03-0,06

0,011-0,020

0,0!5-0,030

Метиленовый синий

Хлористый натрий

Хлористый калий

Хлористый кальций

Сернокислый магний

0,03-0,045

0,2-0,4

Остальное

Компоненты

1 2 3 4

6,00

4,5

Метиленовый синий

9,00

8,00

7,5

NaC1

0 5

0,4

0,3

КС1

0,20

0,14

0,11

0,30

0,20

0,15

0,08

0,06

0,04

0,08

0,06

0,04

0,45

0,30

0,35

4,0

3,0

2,0

Время окрашивания составов: 1 — 60 — 90 мин 2 — 20 мин;

2 — 20 мин; 3 — 18 мин; 4 - 20 мин.

Составитель А. Рыбина

Техред Л.Олейник

Корректор М. Шароши

Редактор В. Ковтун

Подписное

Заказ 2414/37 Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

СаС1

М@80„

Иа НРО

КН РОд

NaHC0

Глюкоза

Двузамещенный фосфорнокислый натрий

Однозамещенный фосфорнокислый калий

Кислый углекислый натрий

Глюкоза

Вода

Содержание компонентов, г, в составах