Способ получения n-ацетилмурамилпептидов

 

Изобретение касается замещенных пептидов, в частности получения производных N-ацетилмурамилпептидов (МП) общей формулы СН20Н /-Я.Н,ОН(с1 uftu р Ho)SY HjC-CHK , iSt

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1 гь," нс(о сн н с-сн-(-(oloY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕ ГЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2777850/23-04 (22) 05.06.79 (31) 7816793 (32) 05.06.78 (33) FR (46) 23,07.87. Бюл. У 27 (71) Ажанс Насьональ де Валориэасьон де ля Решерш (AHBAP) (FR) (72) Пьер Лефрансье, Моник Паран, Франсуаз Одибер, Луи Шедид, Жан Шоай и Эдгар Ледере (FR) (53) 547.964 ° 4.07(088.8) (56) Osawa Т., Jeanloz R.N. Stereoselective Synthesis of 2-amino-3-0(D-1-carboxyethyl)-2-deoxy-D-glucose (Muramic Acid). J. 0rg. Chem., 1965, v. 30, N - 2, р. 448-450.

E11ouz F., Adam А., Ciorbaru R., Lederer Е. Minimal structural requirements for adjuvant activity of

bacterial peptidoglycan derivatives.—

Вiochem. Вiophys. Res. Commun. 1974, v. 59. 11 4, р. 1317-1325.

Hirata A.À., Brandriss М.Ч. Passive hemagglutination procedures for

protein and polysaccharide antigens

using erythrocytes stabilized by

aldehydes. — J. Immunology, 1968, v. 100, - 3, р. 641-646.

Chedid L., Parant M., Parant F., Lefrancier P., Choay J., Lederer Е.

Enhancement of nonspecific immunity

to Klebsiella pneumoniae infection by а synthetic immunoabjuvant (N-acetylmuramyl-L-alany1-D-isoglutamine) apd

several analogs. — Proc. Nat. Acad.

Sci. U.S.À., 1977, v. 74, У 5, р.20892093.

Lerner R.G., Goldstein R. Cummings С. Endotoxin induced disseminated intravascular clotting: eviden„„SU„„1326197 А 3 (59 4 С 07 К 9/00 А 61 К 37/02

ce that it is mediated by neutrophil

production of tissue factor. — Tromb.

Res., 1977, v, 11, Ф 2, р. 253-261. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ N-АЦЕТИЛМУРАМИЛПЕПТИДОВ (57) Изобретение касается замещенных пептидов, в частности получения производных N-ацетилмурамилпептидов (MII) общей формулы снгоя ггпу. о н („„„1 К-"с(о)хнисн-с

L-серил, L-валил, L-аланил, которые обладают иммуностимулирующей активностью и могут быть использованы в биологии и медицине. Цель — создание более активных веществ указанного класса. Получение MII ведут иэ соединения формул

ОСН2

Ph — СН

Н,ОЯ (с1 иаи ф+НК

3 С(о1 где Ph — фенил; 7 — Н;

c(o) — бенэил; К вЂ” указано вышее. Затем каталитически гидрируют в присутствии 60%-ной.СН СООН (удаляется защитная бензилиденовая группа). Испытания МП показывают, что они обладают высокой иммуностимулирующей активностью в сочетании с низкой пирогенностью и черезвычайно низкой токсичностью. 5 табл.

1326197

Изобретение относится к способу получения новых биологически активных

N-ацетилмурамилпептидов общей формулы

СН20Н

H,ОН(с(u,йц, p)

Н0 сн,— сн нсосн

СО-Х-5Hâ - СК-С0081

СН,СН,СОННО, где Х - L"àëàHèë, L-серил, L-валил; 15

R — линейный или разветвленный

С„-С„-алкил, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения — получение новых 20 биологически активных N-ацетилмурамилпептидов, обладающих иммунорегулирующими свойствами в сочетании с низкой пирогенностью.

Пример 1. Метиловый эфир Nацетилмурамил-L — àëàíèë-D-глютамина (Т). а) Метиловый эфир N-трет-бутилоксикарбонил-0-глютамина (II).

К раствору 1,5 r (6,2 ммоль) Nтрет-бутилоксикарбонил-D-глютамина в ЗО

60 мл абсолютного метанола при 0 С прибавляют по каплям раствор диазометана в эфире до появления желтой окраски у реакционного раствора, перемешивают реакционную смесь 10 мин при

0 С и 10 мин при комнатной температуре. Ход реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках с силикагелем с использованием систем растворителей: 4О н-бутанол — уксусная кислота — вода (4:i:5), н-бутанол — пиридин — уксусная кислота — вода (30:20:6:24) и хлороформ — метанол (5: 1). После окончания реакции избыток диазометана 45 разлагают добавлением уксусной кислоты. Затем реакционную смесь упаривают досуха, остаток растворяют в минимальном количестве этилацетата и продукт осаждают из раствора добав- 50 лением петролейного эфира.

В итоге получают 1,42 г (89,7X соединения (II) с .т.пл. 86-90 С;(631 =

= +24,7 (С = 1; метанол).

Найдено, 7.: С 50,62; Н 7,75;

N 10,82.

Рассчитано, 7: С 50,76; Н 7,75;

N 10,76.

2 б) Метиловый эфир N-трет-бутилоксикарбонил-Ь-аланил-D-глютамина (ТТТ).

1,4 r (5,4 ммоль)соединения (II) обрабатывают 1 н.раствором соляной кислоты в ледяной уксусной кислоте.

Реакционную смесь выдерживают30 мин, упаривают досуха, остаток сушат в вакууме над КОН и растворяют в 25 мл

ДМФА. К полученному раствору прибавляют 0,6 мл (5,4 ммоль) N-метилморфолина и 1,86 г (6,5 ммоль) И-оксисукцинимидного эфира N-трет-бутилоксикарбонил-L-аланина. Реакционную смесь оставпяют на ночь и затем упаривают досуха. Остаток растворяют в смеси хлороформ — изопропанол — уксусная кислота (100:0,5;0,62) и хроматографируют на колонке (27х3 см), заполненной двуокисью кремния, с использованием в качестве элюента системы хлороформ — изопропанол — уксусная кислота (100:5:2}. Фракции, содержащие продукт, объединяют и упаривают досуха. Остаток кристаллизуют из смеси изопропанол — изопропиловый эфир.

В итоге получают 1,035 г соединения (ТТТ) с т.пл. 115-116 С; (el = — -9 (С=1; метанол).

Найдено, Ж: С 50,79; Н 7,40;

N 12,42.

С14нг,иьа

Расчитано, 7.: С 50,74; Н 7,60;

N 12,68, в) Хлоргидрат метилового эфира Lаланил-D-глутамина (IV).

332 мг (1 ммоль) соединения (III) обрабатывают 3 мл 1 н. соляной кислоты в ледяной уксусной кислоте. Реакционную смесь выдерживают 30 мин и упаривают досуха. Полученное в остатке масло сушат в вакууме над КОН.

v) Метиловый эфир 1-ol-0-бензил4,6;0-бензилиден-N-ацетилмурамил-Lаланил-D-глютамина (V).

471,5 г (1 ммоль) 1-d-О-бензил4,6;0-бензилиден-N-ацетилмурамиловой кислоты растворяют в 5 мл ДМФА, содержащего 0,11 мл (1 ммоль) N-метилморфолина. К полученному раствору прибавляют при -15 С 0>13 мл (! ммоль)

О изобутилхлорформиата. Реакционную смесь выдерживают 3-5 мин> прибавляют к ней охлажденный до -15 С раствор 268 мг (1 ммоль} соединения (VI) и 0,11 мл (1 ммоль) N-метилморфолина в 5 мл ДМФА. Реакционную смесь выдерживают в течение ночи при -150Ñ, при1326!

3 бавляют 1 мл 2,5 M раствора бикарбоната калия, выдерживают 30 мин при

0 С и прибавляют воду. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 1 M раствором бикарбоната калия и сушат

ВаКуу е над Р2 О .

В итоге получают 620 мг (90,57) соединения (V) с т.пл. 215 — 220 С; (d3га= +92,6 (С=1; ДИФА) . д) Иетиловый эфир N-ацетилмурамил-!О

L-аланил-D-глютамина (I).

587,6 мг (0,86 ммоль) соединения, (V) растворенного в 35 мл ледяной уксусной кислоты, подвергают гидрированию в течение 60 ч в присутствии f5 в качестве катализатора 450 мг 57.-ного палладия на активированном угле.

Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 0,1 И растворе ук- 20 сусной кислоты и хроматографируют на колонке (10х1 см), заполненной ионообменной смолой "Амберлит АГ

50W — X2", с использованием в качестве элюента 0,1 М раствора уксусной кислоты. Фракции, содержащие продукт, лиофилизуют и полученный продукт вновь хроматографируют на колонке, заполненной ионообменной смолой

"Амберлит АГ1 X-2". Фракции, содер- 30 жащие продукт, лиофилизуют, В итоге получают 290 мг продукта, который растворяют в смеси н-бутанол — уксусная кислота — вода (65:10:25) и хроматографируют на колонке, заполнен- 35 ной силикагелем, с использованием в качестве элюента системы н-бутанолуксусная кислота — вода (65: 10:25).

Фракции, содержащие продукт, объединяют и экстрагируют водой. Водную фазу отделяют и лиофилизуют.

В итоге получают 234,4 мг соедине я (I) c т.пл. 108-112 С3(ЫРо =

= +34,3 (С=1; ледяная уксусная кислота) . 45

Найдено, 7.: С 45,46; Н 6,76;

N 10,56.

С2о НЗ4 N<0« 1,25 Н10

Рассчитано, 7: С 45,50; Н 6,95;

N 10,59. 50

Пример 2. н-Бутиловый эфир

N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глютамина (71)

Я а) N-бензилоксикарбонил-L-аланилD-глютамина (VII)

2,4 г (16,4 ммоль),D-глютамина растворяют при нагревании в 35 мл воды.

К раствору прибавляют 2,3 мл (16,4 ммоль) триэтиламина и 4,62 г

97

4 (14,4 ммоль) N-оксисукцинимидного эфира N-бензилоксикарбонил-L-аланина в 70 мл безводного тетрагидрофурана.

Реакционную смесь выг,=рживают 48 ч при 4 С,прибавляют 0,5 мл (3,85 ммоль) диметиламинопропиламина, выдерживают реакционную смесь ч при комнатной темп.ратуре, разбавляют 65 мл воды и годкисляют 4 н.НС1.при 0 С до рН

2, -3,0. Затем тетрагидрофуран отгоняют в вакууме, а остаток выдерживают ночь при 4 С. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают минимальным количеством охлажденной воды и кристаллизуют из этанола.

В итоге получают 2,87 г (627) соединения (VII) с т.пл. 179-182 С; (— 13,3 (С=1; метанол), Найдено, 7.: С 54,18; Н 5,80;

N 11,77, 1С 2 3 4

Рассчитано, 7: С 54)69; Н 6,02;

N 11,96. б) н-Бутиловый эфир И-бензилоксикарбонил-L-аланил-D-глютамина (VIII).

350 мг (1 ммоль) соединения (VII) растворают в смеси 15 мл тетрагидрофурана и 5 мл воды. К раствору прибавляют водный 207-ный раствор CszCÎ (1 ммоль). Раствор упаривают досуха, остаток растворяют в ДИФА и вновь упаривают, остаток сушат над Р20 .

Эту процедуру повторяют несколько раз, Полученный в итоге сухой остаток растворяют в 30 мл ДИФА. К полученному раствору прибавляют 0,12 мл (1, 1 ммаль) 1-бром-н-бутана, выдерживают 20 ч, контролируя окончание реакции с помощью ТСХ на силикагеле в системе этилацетат — пиридин — уксусная кислота — вода (6:2;0,6:1), добавляют 0,06 мл (0,55 ммоль) 1бром-н-бутана, выдерживают 20 ч,упаривают до минимального объема и про,дукт осаждают водой.

В итоге получают 332 мг (81,57) соединения (VIII) с т.пл. 148-150 С.

Найдено, 7.: С 58,91; Н 7,12;

Я 10,26.

Cze Н„ 1,0, Рассчитано, 7: С 58,95;. Н 7,17;

N 10,31. в) н-Бутиловый эфир L-аланил-Dглютамина (IX).

330 мг (0,8 ммоль) соединения (7Ш); растворенного в 30 мл ледя- . ной уксусной кислоты, подвергают гидрированию в течение„ 4 ч в присутствии в качестве катализатора 330 мг

1326197

5Х íoãî палладия на активированном угле и 1 мл 1 н ° НС1. Окончание реакции контролируют с помощью TCX на силикагеле в системе этилацетат— пиридин — уксусная кислота — вода (6:2:0,6:1). После окончания реакции катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают, остаток сушат в вакууме над Рг О . В итоге получают ?54 мг (100X) соединения (1Х) в виде масла. f0

r) и-Бутиловый эфир 1-с -О-бензил4,6-0-бензилиден-N-ацетилмурамил-Lаланил-D-глютамина (Х).

Получают аналогично примеру 1 (стадия т), исходя из 0,9 ммоль 1- - 15

О-бензил-4,6-0-бензилиден-N-ацетилмурамиловой кислоты и 0,8 ммоль соединения (IX). В итоге получают соединение (Х) с выходом 81,2Х, т.пл. 220235; (a1 р= +82 (6 (С=1„ДМФЛ) ° 20

Найдено, 7: С 6 1,77; Н 7,03;

N 7,03.

С „Н 1,0„, Рассчитано, %: С 6 1,14; H 6,93;

N 7,71. 25 д) н-Бутиловый эфир N-ацетилмурамил-Е-аланил-D-глютамина (VI).

472 мг (0,6 ммоль) соединения (Х), растворенного в 30 мл ледяной уксусной кислоты, подвергают гидрированию 30 в течение 40 ч в присутствии в качестве катализатора 470 мг 57.-ного папладия на активированном угле. После окончания реакции, которая контролируется с помощью ТСХ на силикагеле в системе хлороформ — метанол (50:15), катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток растворяют в смеси хлороформ — метанол (50:15) и хроматографируют на колонке, запол- 40 ненной силикагелем-60 (33 г), с использованием в качестве элюента системы хлороформ — метанол (50: 15).

Фракции, содержащие продукт, объединяют и упаривают досуха. Остаток 45 растворяют в воде, раствор подвергают ультрофильтрации и затем лиофилизуют.

В итоге получают 157 мг (487) соединения (VI) c(d),= +34,8 (C=1, уксусная кислота).

Найдено, 7: С 48,26; Н 7,08;

N 9,74.

СggН ц И Ои 1/3 Н О

Рассчитано,7.: С 48,24; Н 7,50;

N 9,78.

Пример 3. н-Дециловый эфир

N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глютамина (ХХ) .

Проводят аналогично примеру 2. В итоге получают соединение (XI) с

jdf> = +30 С (C=-1; ледяная уксусная го кислота), т.пл. 180 С, Найдено, X. С 53,97; Н 8,06;.

N 8,47.

Сг Н г N Ог, 0,15 СНС1 .

Рассчитано, X: С 53,97; Н 8,08;

N 8,61. !

П р и и е р 4. н-Пропиловый эфир

N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глютамина (Х11).

Синтезируют аналогично примеру 2.

В итоге получают соединение (XII) с () = +32,3 (С=1; ледяная уксусная кислота).

Найдено, Х, С 44,5; Н 6,30;

N 8,40.

Сгг Н„И,О„„О,6 СНС1, СН,СООН

Рассчитано, 7: С 44,4; Н 6,40;

N 8,40.

Пример 5. н-Гексиловый эфир

N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глютамина (XIII).

Синтезируют аналогично примеру 2.

В итоге получают соединение (XIII)

c(dJ >= +29,5 (С=1; ледяная уксусная кислота) .

Найдено, X: С 49,4; Н 7,40; N 9, 10.

С Н 14 ИфОи 0 ЗСНС1

Рассчитано, 7: С 49,6; H ..7,30;

N 9,10..

Пример 6. Этиловый эфир Иацетилмурамил-Ь-аланил-D-глютамина (X1V).

Синтезируют аналогично примеру 2.

В итоге получают соединение (XIV) c (Ы3 1I= +34 (C=1; ледяная уксусная кислота).

Найдено, 7: С 46,4; Н 7,1; N 10,3. г1 з о и

Рассчитано, 7: С 46,4; Н 7,3;

N 10,2.

Пример 7. н-Пентиловый эфир

N-,àöåòèëìóðàìèë-L-аланил-D-. ãëþòàìèíà (XV).

Синтезируют аналогично примеру 2, В итоге получают соединение (XV) с (d2 > = +36,5 (С=1; ледяная уксусная кислота).

Найдено, X: С 49,3; Н 7,7;N 9,6.

Рассчитано, X: С 49,4; Н 7,6;

N 9,3.

Пример 8. н-Бутиловый эфир

N-ацетилмурамил-L-валил-D-глютамина (Х71) .

1326197

Таблица 1

Соединение

Повышение темо пературы, С

Доза, мг/кг

10

0,30

0,23

Титр антител

Соединение

XI

Вторичный отзыв

Первичный отзыв

0,07

XII

0,13

XIII

0,03

XIV

Контроль

МДП

1,64

3,57+1,78

8,34+1,34

8,43+1,52

8,72+1,23

0,03

55

3,64

0,23

XVI

4,21

0,23

XVII

3,85

Синтезируют аналогично примеру 2.

В итоге получают соединение (XVI) с () в= +47,6 (С=1; ледяная уксусная

1о кислота) .

Найдено, 7.: С 50 5; H 7 5; N 8,6.

С, Н в N О О, 25СН СООН Н О

Рассчитано, 7: С 50,52; Й 7,86;

N 8,57.

Пример 9. н-Бутиловый эфир

N-ацетилмурамил-Ь-серил-Э-глютамина (XVII).

Синтезируют аналогично примеру 2.

В итоге получают соединение (XVII) с (ЫР = +39,4 (С=1; ледяная уксусная кислота). 15

Найдено, 7.: С 48,8; Н 7,0; N 9,8.

С,„Н„И,О„

Рассчитано, Е: С 48,9; Н 7,14;

N 9,9.

Полученные N-ацетилмурамилпептиды 20 изучены в качестве иммунологических добавок.

Токсичность N-ацетилмурамилпептидов, полученных согласно .предлагаемому способу, изучена на кроликах при парентеральном введении, При этом. установлено,что токсические дозы изученных соединений значительно выше доз, при которых обнаруживается их активность. Токсические эффекты наблюдаются при дозах, равных или превышающих 5 мг/кг.

При определении пирогенной активности изучалось изменение температуры 35 тела у кроликов в течение 3 ч после введения N-ацетилмурамилпептидов, Полученные результаты представлены в табл. 1.

Из приведенных в табл. 1 данных можно сделать вывод о том, что в дозах-, при которых проявляется активность предлагаемых соединений, они не обладают способностью вызывать лихораФ дочные явления.

При определении активности в качестве иммунологических добавок в водной фазе изучено влияние,N-ацетилмурамилпептидов, получаемых согласно предла-, гаемому способу, на количество антиальбуминовых антител. Группам по 8 мышей швейцарской породы возрастом

2 мес вводят подкожно 0,5 мг антигена„ состоящего иэ бычьего сывороточного альбумина без или с добавкой изучаемых соединений в изотоническом солевом растворе в количестве 0,1 мг. Антиген без добавки изучаемых соединений служит контролем. Спустя 30 дн мышам вводят подкожно тот же антиген в дозе

0,1 мг. Одновременно для сравнения исследуют воздействие в качестве иммунологической добавки известного иммуностимулятора — 2-(2-ацетамидо-2-дезокси-3-0-D-глюкопиразонил)-D-пропионил-L-аланил-D-иэоглютамина (МДП) °

Количество антител определяют пассивной гемагглютинацией с использованием эритроцитов баранов, обработанных формалином и покрываемых изучаемыми антигейами. Исследования проводят после первой инъекции антигена и после повторной инъекции для определения первичного и вторичного иммунного отзыва.

Показатели количества антител выражают через логарифм с основанием

2 максимального разбавления сыворотки, агглютинирующей определенное количество красных кровяных телец крови баранов.

Полученные результаты представлены в табл. 2 °

Таблица 2

Титр антител

Соединение

Вторичный отзыв

Перв ичный отзыв

3,64

4,64

9, 1.0+1,66

Таблица 3

XII

9,52+0,50

7,71+1,67

Количест- . Диаметр

Состав эмуль2,75

4,64

XIII сии, содержащей антиген во антираздражения, мм

XIV

9,53+0,93

7,80+1,39 тел, мкг/мл

1,64

2,64

3,64

XVI

7,24

800

НАФ

XVII

8,01

5000

НЛФ+МДП

НЛФ+ I 6000

НАФ+ UI 2000

9 132619

Продолжение табл. 2

Полученные результаты показывают, что предлагаемые соединения, вводимые в солевом изотоническом растворе, вызывают заметное увеличение количества образующихся антител.

При определении активности в каче- 25 стве иммунологических добавок в масля. ной фазе, изучалось увеличение ;.îëè-чества специфических антител, вырабатываемых антигеном, после его введения в присутствии добавок исследуе- 0 мых соединений, вводимых в виде эмульсии вода в масле. Опыты проводят на морских свинках-самках весом 350 r (группы по 6 особей). Препараты вводят подкожно в подушечки обеих задних лапок, Овальбумин из расчета 1 мг

B Виде эмульсии 0,1 мл изотонического солевого раствора в масляной форме, состоящей из неполного адьюванта Фрейнда (НАФ). Исследуемые соединения вво- 10 дят в количестве 0,1 мг в виде добавии к эмульсии, содержащей НАФ. Для .сравнения проводят опыты с использованием в качестве добавки МДП. Через

18 дн после иммунизации исследуют возможные проявления заторможенной сверхчувствительности по отношению к антигеиу, ппя чего вводят подкожно в бок животного 0,01 мг овальбфмина, и через 48 ч наблюдается реакция в месте введения овальбумина, размер вызванного .раздражения измеряют в миллиметрах. Через 21 день после инъекции животным пускают кровь и измеряют в полученной сыворотке содержание анти- 55 тел,. специфических по отношению к овальбумину, в результате осаждения комплекса антитело — антиген в зоне равновесия. Количество белкового азота, содержащегося в осадке, определяют по методу Фолина.

Средние значения содержания антител приведены в табл. 3. Эти величины обозначают количество азота в белке, осаждаемом антигеном, в микрограммах в 1 мл сыворотки.

Из полученных результатов следует, что изученные соединения, вводимые в ниде маслообразной эмульсии, позволяют значительно, увеличить количество антител, образующихся в ответ йа введение антигена, а также вызывают появление заторможенной сверхчувствительности по отношению к тому же антигену, причем оба указанных воздействия по крайней мере равны, в отличие от эффектов, наблюдаемых при использовании в качестве добавки МДП.

Исследование противоинфекционной активности по отношению к Klebsiella проводят по известной методике. Klebsiellà pneumoniae, вводимая в дозе

1-2"10 внутримышечно мышам, вызывает смерть большей части, если не всех животных, в течение недели после введения. Спустя 8 дн. выживаемость животных значительно увеличивается. Проводят наблюдение за степенью выживаемости у групп мьппей, зараженных в приведенных условиях и обработанных описываемыми Н-ацетилмурамилпептидами.

Для проведения опытов используются мыши гибридной породы (C57B1)6xAKR/Ã1. поставляемые институтом Пастера, где они получены от породы, поставляемой

С.N.R.S. в Орлеане. Инфекционную культуру Klebsiella pneumoniae штамм капсуларного типа 2, биотипа d получают из 16-часовой культуры в среде для получения пневмококков (ll - 53515, институт Пастера). Доза заражения

2 -10 Klebsiella, которая вводится внутримышечно. Исследуемые соединения

1326197!

Tëблица5 вводятся внутривенно в 0,2 мл эпирогенного физиологического раствора.

Контрольным животным вводится только физиологический раствор. Исследуемые соединения вводят животным через 24 ч после заражения. В результате проведенных исследований установлено, что соединения VI u XI проявляют противоинфекционную активность, что следует из более высокого процента выживших !0 животных по сравнению с контрольной группой.

Данные по противоинфекционной активности соединения VI представлены в табл. 4. l5

Время инкубации, ч

Контроль

ЛПС I

0 131

2 129

3 122

4 119

5 - 113

129

125 129

118 1 0

109 22

1 10 1 14

104 108

118

88

7,7

Таблица 4

ИнПроцент выживших животных

Соеди- Число некие мышей декс

3 день 5 день 10 день щиты, 7

Способ получения N-ацетилмурамилпептидов общей формулы

СН2ОК

Исследование влияния на коагуляцию

30 крови проводят по известной методике.

Все количество крови, взятой для опыта, делится на две части, одна из которых центрифугируется для получения плазмы без тромбоцитов (ПБТ).

1 мл крови инкубируется в пластмассовой капсуле в присутствии 100 мкг исследуемого соединения. Кроме того, приготавливают капсулы, содержащие

0,1 мл ПБТ, к которым добавляют через40 каждый час в течение 5 ч по 0,1 мл инкубационной смеси, после чего по

0,1 мл 0,025 М раствора хлористого кальция. Измеряют время коагуляции и определяют активность изученных соединений по отношению к коагуляции в виде зависимости сокращения времени коагуляции по отношению к контрольному образцу, в котором используется физиологический раствор. Полученные результаты сравниваются с результатами, полученными с липополисахаридом (ЛПС) — веществом, значительно способствующим коагуляции, взятым в качестве эталона, 55 си се нсосн3

COOY где Ph — фенил;

R> — бензил;

Y — водород, О. кондеисируют с дипептидом общеи формулы

Контроль 24 29 12,5 12,5

VI 24 92 75 75 63

Полученные результаты представле-. ны в табл. 5.

Время коагуляции, с

В результате проведенных исследований установлено, что предлагаемые соединения в отличие от ЛПС не ускоряют коагуляцию крови.

Формула изобретения

Н0

НОН(с(спи р1

Щ-сн w.сосн

СОХ.-ЪН-CH — COOR

1

СН2СН2СОХ Н где Х вЂ” Ь-аланил, L-серил, L-валил;

R — линейный или разветвленный

С -С -алкил

1 ь 1 отличающийся тем,что, защищенное производное мурамилавой кислоты общей формулы гь-сн о

Н,OR>(a. uIIu ф н-х-5Н-сн-соотг, ! ж2 Н2СОЯН

1326197

13 групп путем каталитического гидрирования в присутствии уксусной кислоты. где Х и R имеют указанные значения, 1 с последующим отщеплением защитных

Составитель О. Галкин

Редактор И.Николайчук Техред В.Кадар Корректор Е. Po

Заказ 3130/59 Тираж 347 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и отхрытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ получения n-ацетилмурамилпептидов Способ получения n-ацетилмурамилпептидов Способ получения n-ацетилмурамилпептидов Способ получения n-ацетилмурамилпептидов Способ получения n-ацетилмурамилпептидов Способ получения n-ацетилмурамилпептидов Способ получения n-ацетилмурамилпептидов Способ получения n-ацетилмурамилпептидов 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к производным пептидов, в частности к нагриевым солям -производных мурамилпептидов общей формулы 1

Изобретение относится к производным пептидов, в частности к нагриевым солям -производных мурамилпептидов общей формулы 1

Изобретение относится к новым биологически активным сединениям, а именно к фуллереновому производному гликопептида GlcNAc-(1 _ 4)-MurNAc-Ala-D-iGln[Lys- - CO(CH2)5-NHC60-H] формулы I, приведенной в формуле изобретения, обладающему адъювантной активностью

Изобретение относится к препаративной и технологической биохимии и касается получения биологически активного химического соединения - белкового продукта, используемого как в клеточной биологии, так и в практической медицине и ветеринарии
Наверх