Штамм еnтеrоvirus suis для диагностики энтеровирусного гастроэнерита свиней

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэн- ,терита свиней. Целью изобретения является штамм энтеровируса свиней, обладающий повышенной репродуктивной активностью в культуре клеток почки поросенка, безвредный и ареактогенный для лабораторных животных, Штамм K-22Enterovirus suis-Xl I вызывает сероконверсию у кроликов, в гипериммунных кроличьих сыворотках вируснейтрализующие антитела обнаруживают в титре 1:128-1:512. Штамм не вызывает отклонений от физиологической нормы у интравенозно и интрамускулярно инокулированных кроликов. i (Л САЭ tc 00 О9 4

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„Я0„„1328374 А 1 (51)4 С 12 N 7/00, А 61 К 39/225

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ВИГО"Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3894! 73/30-13 (22) 05.05.85 (46) 07.08,87. Бюл. M 29 (71) Украинский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии (72) В. Ф, Романенко, О, Г, Прусс, Н, В. Бабич и Л. В. Купневская (53) 576. 8.094. 29 .576,858(088; 8) (56) Труды Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов. М,, 1975, т, XXII, с. 93-96, Alexander Т. I., Betts А, Е °

Further studies on porcine entегоviruscs isolated at Cambridge, l!.

Sегоlogical grouping-Research in

Veterinary Science, 1967, 8, 3, 333-337 ° (54) ШТАММ ENTегоVIRUS SUIS ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЭНТЕРОВИРУСНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТА СВИНЕЙ (57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэн,терита свиней, Целью изобретения яв ляется штамм энтеровируса свиней, обладающий повышенной репродуктив ной активностью в культуре клеток почки поросенка, безвредный и ареактогенный для лабораторных животных, Штамм К-22 Entегоvirus suis-XI! вызывает сероконверсию у кролйков, в гипериммунных кроличьих сыворотках вируснейтрализующие антитела обнаруживают в титре 1:128-1:5!2, Штамм не вызывает отклонений от физиологической нормы у интравенозно и интрамускулярно инокулированных кроликов, I

55

1 1

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии я представляет, собой штамм нового серотипа энтеровирусов свиней, используемый для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней, Цель изобретения — штамм энтеровируса свиней, обладающий повышенной репродуктивной активностью в культуре клеток почки поросенка, безвредный и ареактогенный для лабораторных животных (кроликов).

Штамм депонирован в коллекции

ВГНКИ ветпрепаратов МСХ СССР под

У 288/5, назван К-22 Entегоvirus suis-XII и имеет следующие признаки, Морфология. Сферическая форма, типичная для энтеровирусов свиней, имеет икосаэдральную симметрию, размер вириона 26-28 нм.

Антигеняая структура. В реакции перекрестной нейтрализации штамм серологически отличается от референтных штаммов известных серотипов энтеровирусов свиней, Биологические свойства. Штамм

К-22 Entегоvirus suis-XII обладает репродуктивной активностью на культуре первично-трипсинизированных клеток почек эмбриона свиньи и перевиваемых клеток линии СПЭВ и накапливается в них до 10 ТЦД /мл в течение .24 ч при 37+0,5 С, Обладает бляшкообразующими свойствами на первично-трипсинизированных клетках почек эмбриона свиньи и перевиваемых клетках линии СПЭВ. Образует однородные бляшки размером 0,5-1,0 мм.

Физико-химические свойства. Является РНК-содержащим, репродукция ви" руса в культуре клеток не подавляется присутствием в поддерживающей среде 100 мкг/мл 5-бром-2-дезоксиуридина H 0,1-1,0 мкг/мл актиномицина Д, устойчив к .воздействию хлороформа, эфира и трипсина, Не ингибируется средами со значениями рН 2,0-11,0.

Понижает титры яа 1,5-2,5 lg ТЦЦ после прогревания при 50 С в течение

30-60 мин, Термоустойчив при прогревании при 50 С в течение 60 мин в присутствии 1 M NgCl

Иммуногенность. Вызывает сероконверсию у кроликов; в гипериммунных кроличьих сыворотках вирусней тралиэующяе антитела обнаруживают в титре 1:128-1:512. !

Безвредность, Не вызывает отклонений от физиологической нормы у инт328374 2 равенозно и интрамускулярно инокулированных кроликов.

П р я м е р 1. Использование штамма К-22 энтеровируса свиней в качестве антигена для обнаружения и идентификации антител в сыворотках крови больных и переболевших животных.

Обнаружение и идентификацию антител проводят в реакции нейтрализации (РН) на культуре клеток. Для. постановки PH готовят двукратные passeдения сывороток в объеме 0 5 мл и к каждому разведению сыворотки добавляют по 0,5 мл антигена с содержанием вируса в 0,1 мл 100 ТЦД, Вирус-сывороточную смесь выдержйвают 1 ч в термостате при 37 С, после чего смесь каждого разведения по 0,2 мл вносят в 2-4 пробирки с монослоем культуры клеток, в которых предварительно ростовая среда заменена на 0,8 мл поддерживающей. Учет результатов титрования антител проводят на 4,и 7 сут.

Титром антител считают наибольшее разведение сыворотки, которое нейтрализует 100 ТПД, вируса в 507 ннокулированных вирус-сывороточной смесью пробирках, Результат считается положительным при нарастании титра антител в парных сыворотках в четыре и более раэ или при обнаружении титров антител 1:32 и выше в 50 и более про35 центах сывороток крови однократно обследованных животных.

Пример 2. Обнаружение антигена (вируса) в мазках-отпечатках иэ патологического материала методом прямой иммунофлуоресценции (ИФ). Дпя исследования методом иммунофлуоресценции на обезжиренных предметных стеклах готовят мазки-отпечатки из

45 свежего или свежезамороженного материала. Препараты высушивают, фиксируют в ацетоне, наносят на них флуоресцирующий иммуноглобулин, помещают во влажную камеру, затем промыва50 ют фосфатно-буферным раствором, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе, Приготовленные препараты исследуют люминесцентным микроскопом. Положительным результатом исследования считают специфическое ярко-зеленое свечение цитоплаэмы клеток на фоне мозговой ткани, которая светится серовато-зеленоватым цветом.

Положительным результатом считают специфическое ярко-зеленое свечение цитоплазмы клеток в виде фокусов из

3-4 пораженных клеток.

Штамм Entегоvirus suis 288/5 (ВГНКИ) для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита,свиней.

Составитель Г. Марченко

Редактор С. Патрушева Техред А. Кравчук Корректор Л,Патай

Заказ 3453/29 Тираж 499 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 з 1328374 4

Пример 3 ° Идентификация вы- Пример 4. Идентификация виделенного вируса в культуре клеток, руса в культуре клеток методом имТипирование вируса проводят в мунофлуоресценции. реакции нейтрализации на культуре Выращенную на покровных стеклах клеток с помощью иммунной сыворотки культуру клеток заражают выделенным к вирусу штамм К-22, входящего в сос- вирусом и инкубируют в термостате до тав набора диагностикумов. Иммунная появления ЦПД. После наступления сыворотка используется в дозе 20 ней- ЦПД стекла извлекают, промывают фостралиэующих доз. Вирус для типирова- )p фатно-буферным раствором, подсушивания используют в дозе 1000 ТЦД ° Для,ют и фиксируют ацетоном, Затем на типирования 0,5 мл вируса с содержа- препараты наносят фпуоресцирующий кием его в 0,1 мл 1000 ТЦД смешивают иммуноглобулин к штамму К-22, выдерс 0,5 мл иммунной сыворотки с содер- живают 30 мин при 37 С обильно прожанием в 0,1 мл ее 20 нейтрализующих мивают фосфатно-буферным раствором, доз. После выдерживания вирус-сыворо- ополаскивают дистиллированной водой о точной смеси в течение 1,5 ч при 37 С и подсушивают. Микроскопию проводят по 0,2 мп ее вносят в четыре про- на люминесцентном микроскопе. бирки с культурой клеток, ростовая среда в которых предварительно заменена на 0,8 мл поддерживающей и ставят в термостат на инкубацию при

37 С, Учет результатов проводят на

4 и 7 сут.

Результат типирования считают по" >< Ф о р м у л а и s о б р е т е н и я ложительным, если в 50Х инокулированных вирус-сывороточной смесью пробирок сыворотка нейтрализовала вирус (ЦПД не отмечено).