Способ выделения разветвленных - глюкоолиго- и полисахаридов

 

Изобретение относится к производным сахаридов, в частности к выделению разветвленных 1 → 3 , 1 → 6-β-D -глюкоолиго- и полисахаридов (ПС), которые являются биологически активными веществами. Для упрощения процесса выделения ПС используют другой сорбент и растворители. Процесс ведут хроматографированием смеси углеводов на политетрафторэтиленовом сорбенте с элюированием исходной смеси сначала водой, а затем водно-этанольной смесью при градиенте концентрации этанола до 15%. Процесс однократной хроматографии является более простым, чем известный способ многократного разделения на колонках с биогелем Р-2 и целлюлозой с промежуточным упариванием, обработкой соответствующих фракций боргидридом натрия и разделением. 1 табл.

Изобретение относится к химии углеводов, а именно к способам выделения биологически активных высокоразветвленных 1_→3; 1_→6-β-D-глюкоолиго- и полисахаридов. Целью изобретения является упрощение процесса. Изобретение иллюстрируется приведенными примерами. П р и м е р 1. 15 мл водного раствора, содержащего 150 мг смеси углеводов, полученных в результате частичного кислотного гидролиза ламинарина и содержащих 17% разветвленных 1_→3; 1_→6-β-D -глюкоолиго- и полисахаридов, остальное - глюкоза, ламинариолигосахариды, гентиобиоза и соли, наносят на колонку (1,8 х 16 см), наполненную сорбентом - политетрафторэтиленом (полихромом-1) (40 см³, емкость 40 мг разветвленных углеводов), предварительно обработанным 96%-ным этиловым спиртом. Исходную смесь углеводов элюируют сначала водой (50 мл) до отрицательной реакции на сахара фенол-сернокислотным методом, при этом полностью вымываются глюкоза, неразветвленные ламинариолигосахариды, гентиобиоза и соли, а разветвленные 1_→3; 1_→6-β-D-глюкоолиго- и полисахариды задерживаются сорбентом. Далее элюцию проводят последовательно 2,5%-ным (30 мл), 7,5%-ным (30 мл) и 15% -ным (15 мл) растворами этилового спирта в воде, которыми элюируется соответственно 6 (фракция I), 12 (фракция II) и 8 мг (фракция III) разветвленных 1_→3; 1_→6-β-D-глюкоолиго- и полисахаридов. При этом происходит разделение фракций разветвленных углеводов по молекулярным массам (см. таблицу). Элюция 15%-ным водным раствором этилового спирта приводит к полной десорбции разветвленных 1_→3; 1_→6-β-D-глюкоолиго- и полисахаридов с полихрома-1. Фракции I-III, полученные при элюировании указанными растворами этилового спирта в воде, упаривают или лиофильно высушивают. Для регенерирования сорбент полихром-1 промывают 50% -ным водным раствором этилового спирта, затем водой, после чего его можно использовать повторно. П р и м е р 2. Способ проводят аналогично примеру 1 за исключением того, что берут исходный раствор, содержащий 150 мг смеси углеводов в 150 мл воды. Выделенные фракции I, II и III содержат соответственно 8, 10 и 9 мг разветвленных 1_→3; 1_→6-β-D-глюкоолиго- и полисахаридов. П р и м е р 3. 1000 мг смеси углеводов, полученной при ферментативной трансформации ламинарина под действием эндо- 1_→3-β-D-глюканазы, наносят на колонку (3 х 52 см), наполненную сорбентом полихром-1 (емкость 600 мг разветвленных углеводов). Элюирование проводят аналогично примеру 1. Получают во фракциях I, II и III соответственно 14, 106 и 291 мг разветвленных 1_→3; 1_→6-β-D-глюкоолиго- и полисахаридов. Таким образом, предложенный способ отличается достаточной простотой, так как позволяет при однократной хроматографии на колонке с сорбентом полихром-1 выделить с достаточной полнотой разветвленные 1_→3; 1_→6-β-D-глюкоолиго- и полисахариды из водных растворов, содержащих глюкозу, соли и неразветвленные олигосахариды. В известном способе для выделения разветвленных углеводов использовано многократное разделение на колонках с биогелем Р-2 различных марок и целлюлозой с промежуточным упариванием и обработкой соответствующих фракций боргидридом натрия с последующим разделением на ВЭЖХ.

Формула изобретения

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ РАЗВЕТВЛЕННЫХ 1 __→ 3; 1 __→ 6 -β -D - ГЛЮКООЛИГО- И ПОЛИСАХАРИДОВ из смесей углеводов, их содержащих, путем хроматографии в присутствии сорбента с использованием воды и смеси воды с полярными органическими растворителями в качестве элюента, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве сорбента используют политетрафторэтилен, а исходную смесь элюируют сначала водой, а затем смесью воды с этиловым спиртом в качестве полярного органического растворителя при градиенте концентрации последнего до 15%.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 11-2002

Извещение опубликовано: 20.04.2002        

---