Способ определения @ -экзотоксина в инсектицидных биопрепаратах

Авторы патента:

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Изобретение относится к способам анализа инсектицидных препаратов. Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа Отделяют / -экз отоксин от нуклеотидных примесей в системе растворителей пропанол - вода - аммиак. Пятна с.хроматограммы растворяют в воде и вещества идентифицируюто Их количество определяют по максимальным амплитудам соответствующих полос аналогичных спектров /3 -экзотоксина или нуклеотидоВо Способ можно использовать для санитарно-гигиенического контроля состояния окружающей среды и оцен-. ки качества инсектицидн гх препаратов при длительном хранении. 00 ел ;о Nj

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) SU (11) 1 (51)4 С 01 N 33/50

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABT0PCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3943189/28-14 (22) 12,08. 85 (46) 15,12,87. Бюл. Р 46 (71) Всесоюзный научно-исспедовательский институт прикладной микробиологии (72) Е.И.Ефимцев и А.Г.Чигалейчик (53) 612,015 (088.8) (56) Bond R. P. Metal. Biochem. 3., 1969, 114, р, 474-485. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Р -ЭКЗОТОКСИНА В ИНСЕКТИЦИДНЫХ БИОПРЕПАРАТАХ (57) Изобретение относится к способам анализа инсектицидных препаратов.

Цель изобретения вЂ” упрощение н повышение чувствительности способа. Отделяют Р-экзотоксин от нуклеотидных примесей в системе растворителей пропанол вЂ” вода вЂ” аммиак, Пятна с;хроматограммы растворяют в воде и вещества идентифицируют. Их количество определяют по максимальным амплитудам соответствующих полос аналогичных спектров Р -экзотоксина или нуклеотидов. Способ можно использовать для санитарно-гигиенического контроля состояния окружающей среды и оцен-, ки качества инсектицидных препаратов при длительном хранении, мы и эталонных растворов, количество определяют по максимальным амплитудам соответствующих полос аналогичных спектров Р --экзотоксина или нуклеотидов, Идентификацию пятна на принадлежность Р -экзотоксину, например, определяют спектрофотометрированием элюата с него с сопоставлением соотношений интенсивностей в точках спектра поглощения с длинами волн 300, 264, 254, 232 нм и эталонного (высокоочищенного) образца, имеющего следующие соотношения интенсивностей:

300 нм/254нм = 0,18; 267 нм/254 нм=.

=0,91; 232 нм/254 нм = 0,48, Количественное определение содержания Р --экзотоксина или нуклеотидных примесей осуществляют по уравнению Ламберта-Вера: где С вЂ” искомая концентрация;

D вЂ” измеряемая оптическая плотность;

Е вЂ” удельный коэффициент экстинции., Е для / -экзотоксина при длине волны 254 нМ равен 80 л/г см. Время необходимое для очистки и определенйя концентрации /3 вЂ” экзотоксина или нуклеотидных примесей составляет 3035 мин и включает общее время центрифугирования 10 мин, хроматографирования 15-20 мин и спектрофотометрии

2-3 мин.

Спектральная аппаратура для измерения элюата с пятен хроматограмм должна обладать чувствительностью не ниже 0,0010.

В стандартной минимальной пробе для разгонки хроматограмм. берут

0,2 мкл Р -экзотоксина (или нуклеотида) с концентрацией 1 мг/мл. При элюции с хроматограммы 0,2 мкл /3вЂ” экзотоксина с концентрацией 1 мг/мл происходит разбавление Р -экзотокси-на в 1 мп НС1, Таким образом, конечная концентрация /3 -экзотоксина составляет 0,2 мкг/мл, что соответствует 0;03 ед, оптической плотности, На приборе СФ-26 с цифровым вольтметром постоянного тока типа

Щ 1413 эта величина при.ошибке 2,5Х составляет 40 ед,, что соответствует

7,5 ° 10 Bg D HJIH чувствительности.

7,5 10 мкг/мп.

1 1359 744

Изобретение относится к способам анализа инсектицидных биопрепаратов и может быть использовано для.контроля содержания Р -экзотоксина и нуклеотидных примесей в процессе ферментации, а также в получаемых биопрепаратах, выборе новых перспективных продуцентов Р -экзотоксина и совершенствовании биотехнологи- 10 ческих приемов производства средств защиты растений для оценки качества инсектицидных препаратов в результате длительного хранения, а также для санитарно-гигиенического контро- 15 ля состояния окружающей среды.

-4

Целью изобретения является упрощение и повьш ение чувствительности способа.

Поставленная цель достигается 20 ,путем отбора проб, выделения препара та Р -экзотоксина методом осаждения солями металлов, отделения /3 -экзотоксина от нуклеотидных примесей хроматографией на пластинах в системе растворителей пропанол вЂ” вода вЂ” аммиак в соотношении 15:5:2 с последующим фотометрированием, после хроматографирования пятна с хроматограммы растворяют в воде при рН 3,0

6,6,затем вещества идентифицируют по интенсивностям на принадлежность экзотоксину или другим нуклеотидам в точках, соответствующих максимумам производных спектра поглощения, отражения или флуоресценции, а количество определяют по максимальным амплитудам соответствующих полос аналогичных спектров -экзотоксина или нуклеотидов при чувствительнос- 40 ти спектральных методов не менее

7,5.10 мкг/ип.

Пример. Навеску 250 мг биопрепарата для определения содержания Р экзотоксина и нуклеотидных,примесей 45 растворяют в 2,5 мл .0,1 н. уксусной кйслоте,. осадок отфильтровывают, к раствору добавляют соль ацетата бария или кальция (0,2 н,-0,1 мл) °

Преципитат отделяют от раствора цент- б0. рифугированием и осадок растворяют в

0,1 н. НС1 и Н SO и хроматографируют. в течение 15-20 мин, После хроматографирования пятна с хроматограммы растворяют в воде при рН 3,0-6,6, затем идентифицируют растворы на принадлежность в Р -экзотоксину или со" путствующим нуклеотидам путем сопоставления спектров пятен хроматограмСоставитель А.Агуреев

Техред Л.Сердюкова Корректор В.Бутяга

Редактор Т,Парфенова

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, И-35, Раушская наб,, д.4/5

Заказ 6151/48

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãîðîä, ул,Проектная,4

1359 744

Чувствительность предлагаемого дов, растворение осадка с поспедуюспособа определения Р -экзотоксина щнм хроматографическим разделением позволяет определить его при содер- и спектрофотометрическим измерением

1 жанни 0,02 мкг/мл и более (по срав- отличающийся тем, что, нению с известным .способом вЂ” 0,1 мкг) с целью упрощения и повышения чувстс ошибкой З . вительности, хроматографию осуществляют на пластинах в системе раствоФ о р м у л а и з о б р е т е н и я рителей пропанол вЂ” вода - аммиак в

Способ определения р-экзотокси- 1ð соотношении 13 5:2, элюцию проводят на в инсектицидных биопрепаратах, водой рН 3,0-6,6, а измерения осу- включающий осаждение смеси нуклеоти- ществляют при 254 или 267 нм.

Способ определения @ -экзотоксина в инсектицидных биопрепаратах

Изобретение относится к медицине, точнее к акушерству и гинекологии

Способ прогнозирования осложненного течения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // 1357846

Изобретение относится к гастроэнтерологии

Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови // 1354115

Способ определения содержания стирола в крови // 1327003

Способ количественного определения радиоактивных метаболитов стероидов // 1315903

Изобретение относится к химии и биохимии природных соединений,предназначено для количественного определения радиоактивных органических со-

Способ диагностики ишемической болезни сердца // 1296937

Изобретение относится к области медицины, предназначено для кардиологии и терапии

Устройство для забора крови у мелких лабораторных животных // 1296117

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для забора крови у мелких лабораторных животных

Способ маркирования белка @ ферментом // 1290166

Изобретение относится к иммунохимии , а именно к методам получения маркированного ферментной меткой белка А золотистого стафилококка, который может быть использован в твердофазных иммуноферментных методах анализа для клинической и лабораторной практики в медицине, ветеринарии

Способ определения повреждения паренхимы печени // 1287007

Изобретение относится к меди-

2-(5-нитротиазолил-2-азо)фенолсульфокислота в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидном геле // 1286598

Способ определения галактозы в сыворотке крови // 2101705

Изобретение относится к биохимии и ветеринарии и касается способа определения гексоз, например галактозы, в сыворотке крови для ранней диагностики нарушений минерального обмена

Способ определения мочевины и креатинина в биологических жидкостях // 2101706

Изобретение относится к медицине и касается видов патологии или состояний организма, связанных с нарушениями азотистого обмена, особенно при различных видах почечной патологии, обширных хирургических ранах, ожогах

Способ прогнозирования течения ишемической болезни сердца // 2102756

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии

Способ оценки состояния больного // 2103692

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса

Способ прогнозирования продолжительности жизни онкологических больных четвертой стадии заболевания после диагностических хирургических вмешательств // 2104536

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано при проведении больным с неблагоприятным прогнозом адъювантных методов терапии

Способ диагностики сахарного диабета // 2104537

Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, и может быть использовано для проведения дифференицальной диагностики инсулинзависимого и инсулиннезависимого диабета, состояния их компенсации

Способ прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени // 2104538

Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и предназначено для прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными поражениями органа

Способ оценки микросомальной системы печени при действии ксенобиотиков алкилирующего типа // 2104539

Изобретение относится к области исследования или анализа материалов особыми способами, а именно к способам исследования крови при действии ксенобиотиков, и может быть использовано для оценки микросомальной системы печени после воздействия малых доз иприта и люизита при реальных путях поступления ОВ (отравляющих веществ) в организм, а также при решении задач по уничтожению ХО (химического оружия) в районах военно-химических объектов, в частности по обследованию здоровья населения и обслуживающего персонала в местах по хранению и уничтожению ХО

Прибор для мониторинга параметров взвешенных частиц // 2106627

Изобретение относится к оптико-электронной промышленности и может быть использовано для комплексного исследования параметров взвеси частиц микронных и субмикронных размеров (10-8 - 10-4 м): распределения частиц по группам с определенными размерами, химического состава частиц, скоростей изменения этих характеристик

Способ лечения ишемической болезни сердца // 2107910

Изобретение относится к медицине, в частности, к кардиологии, и может быть использовано для лечения любых клинических вариантов ишемической болезни сердца