Способ определения в крови гликозилированных соединений, содержащих кетоаминовую связь
Изобретение может быть использовано для диагностики диабета и галактоземии. Цель изобретения - ускорение и повышение чувствительности способа. Смесь цельной крови и трихлоруксусной кислоты нагревают.После охлаждения к пробам добавляют 40%-ную трихлоруксусную кислоту и центрифугируют. К надосадку добавляют соляную и тиобарбитуровую кислоты . Смесь инкубируют и измеряют величину абсорбции. Кроме того, опре- . деляют величину абсорбции фона и рассчитьшают количество гликозилированного гемоглобина. i (Л ее О5 со ю
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (511 4 G О) N 33/48, 33/62
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ..
Н ABTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4035900/28-14 (22) 12,02.86 (46) 30.12,87. Бюл. Р 48 (71) Институт биологической и медицинской химии АМН СССР (72) В.К.Городецкий и Е.А.Карпова (53) 612.015 (088.8 ) (56) Gabbay К.Н. et а1. Diabetes, 1979, ч 28, Ф 4, р.337.
ÄÄSUÄÄ 1363072 А1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ В КРОВИ ГЛИКОЗИЛИРОВАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ, СОДЕРЖА1ЦИХ КЕТОАМИНОВУЮ СВЯЗЬ (57) Изобретение может быть использовано для диагностики диабета и галактоземии. Цель изобретения — ускорение и повышение чувствительности способа. Смесь цельной крови и трихлоруксусной кислоты нагревают. После охлаждения к пробам добавляют
40Х-ную трихлоруксусную кислоту н центрифугируют. К надосадку добавляют соляную и тиобарбитуровую кислоты. Смесь инкубируют и измеряют величину абсорбции. Кроме того, опре-, деляют величину абсорбции фона и рас9 считывают количество гликозилированного гемоглобина.
-1363072
Составитель Н.Гуляева
Техред Л. Серцюкова Корректор А. Зимокосов
Редактор И.Рыбченко
Заказ 6398/34 Тираж 776 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий.
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4
Изобретение относится к биохимии и медицине и может быть исполь" зовано в эндокринологии для диагностики и контроля за ходом лечения диабета и галактоземии.
Цель изобретения - ускорение и повышение чувствительности способа, Способ осуществляется следующим образом, 1О
К пробе цельной крови объемом
1 мл добавляют 0,2 M трихлоруксусную кислоту, выдерживают в течение 1
1,5 ч на водяной бане, затем добавляют равные объемы 0,02 И тиобарбиту- !5 ровой кислоты и концентрированной соляной кислоты, инкубируют на кипящей водяной бане в течение 6-7 мин, охлаждают пробы и измеряют интенсивность окраски на спектрофотометре 20 при 432-433 нм.
Пример. К O 1 мл цельной крови добавляют 0,9 мл дистиллированнои воды и 0,5 мл 0,2 М трихлоруксусной кислоты, Смесь нагревают 1 ч 25
15 мин на кипящей водяной бане, После охлаждения к пробам добавляют
0,5 мл 40%-ной трихлоруксусной кис:лоты для осаждения белков. Пробы ,центрифугируют 1Оминпрн 7000об/мин . 30
К 0 5 мл надосадка добавляют 0,5 мл концентрированной соляной кислоты и 0,5 мл 0,02 И тиобарбитуровой кислоты, Смесь инкубируют 6 мин на кипящей водяной бане, После инкубации из- Зб
Феряют величину абсорбции известного комплекса (A цо ко „) при 432,5 нм.
Так как в цельной крови присутствуют свободные сахара, необходимо определение величины абсорбции фона 40 (А „), Определение абсорбции фона проводят аналогично определению величины абсорбции цветного комплекса, исключая стадию нагревания на кипящей водяной бане в течение ч (A. цо. комп. фона ) Расчет К чества гликозилированного гемоглобина ведут по стандартной кривой "фруктозоглицин на основе полученных значений величин абсорбции.
А ц, комо. = Ою385; А фона .
Ов087; А = 01385 О ° 087 = Ое298 °
Количество гликозилированного гемоглобина 10_#_.
Изобретение обеспечивает ускорение и повышение чувствительности способа в 2 раза. аормулаизобретения
Способ определения в крови гликозилированных соединений, содержащих кетоаминовую связь, путем забора крови, добавления к пробе кислоты,проведения кислотного гидролиза нагреванием при 100 С, осаждения белков трихлоруксусной кислотой и их отделения, добавления тиобарбитуровой кислоты, инкубации и спектрофотометрирования, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, в,качестве кислоты при проведении кислотного гидролиза используют трихлоруксусную кислоту в концентрации 0,2 M нагревание проводят в течение 1,25+0.,25 ч, тиобарбитуровую кислоту берут в концентрации 0,02 И, дополнительно добавляют концентрированную соляную кислоту в соотношении гидролизованная проба - тиобарбитуровая кислота - соляная кислота 1 : 1 : 1, нагревают в течение 6,540 5 мин, а спектрофотометрирование проводят при длине волны 432,5 0,5 нм. !
