Способ диагностики миастении

 

Изобретение предназначено для неврологии. Цель изобретения - повышение точности диагностики. Дои после введения раствора прозерина берут пробы крови и добавляют суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных ацетилхолином. Смесь инкубируют. Затем определяют исходное содержание розеткообразукяцих лимфоцитов и сравнивают с изменением их уровня после введения прозерина« Способ позволяет диагностировать доклинические и субклинические формы нарушений нервно-мышечной передачи миастенического типа. 3 табл. со О5 со

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК..SU„„1 (51) 4 G 01 N 33/50

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ - ., ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4056539/28-14 (22) 11.03.86 (46) 30.12.87. Бюл. Р 48 (71) Пермский государственный, медицинский институт (72) А.А.Быкова, М.Ф.Гаришина и Т.А.К1шкова (53) 616.07 (088.8) (56) Руководство для врачей/Под ред. П.В.Мельничука, М., 1982, т.2, с.211-217. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИАСТЕНИИ (57) Изобретение предназначено для неврологии. Цель изобретения — повышение точности диагностики. До и после введения раствора прозерина берут пробы крови и добавляют суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных ацетилхолином. Смесь инкубируют.

Затем определяют исходное содержание розеткообразующих лимфоцитов и сравнивают с изменением их уровня после введения прозерина. Способ позволяет диагностировать доклинические и субклинические формы нарушений нервно-мышечной передачи миастенического типа.

3 табл.

63074 2

1 13

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике заболеваний, и может быть использовано для распознавания миастении.

Целью изобретения является повышение точности диагностики за счет оценки состояния иммунной системы больного с измененным балансом ацетилхолина по реакции сенснбилизированных к нему лимфоцитов крови, усиленно взаимодействующих с эритроцитами барана, нагруженными ацетилхолином, что проявляется их повышенным содержанием (Ах-POK) в крови (207 и более) и снижением их числа до нормальных цифр (107 и менее) через

30 мин после однократного подкожного введения больному 1 мл 0,05 -ного раствОра;прозерина (торможение

Ах-РОК).

Способ осуществляется следующим образом.

Забирают одну-две капли крови (0,05-0,1 мл) из пальца больного в центрифужную пробирку с 0,1-0,2 мл

57.-ного свежеприготовленного раствора цитрата для предупреждения свертывания крови. Вводят больному подкожно 1 мл 0,05%-ного раствора про.зерина. Через 30 мин повторно забирают кровь из пальца, как описано ранее. После тщательного встряхивания пробирки в нее добавляют для лизирования эритроцитов 0,8-0,9 мл дистил,лированной воды. Суспензию клеток центрифугируют 5-6 мин при 1500 об/мин, после чего надосадочную едкость отсасывают пипеткой, а осадок лимфоцитов ресуспендируют в 0,1-0,2 мл изотонического раствора хлорида натрия. К полученной взвеси лейкоцитов добавляют 0,1-0,2 мл 0,57.-ной взвеси эритроцитов, сенсибилизированных ацетилхолином и инкубируют смесь при 37 — 37,5 С в течение 5-6 мин, после чего центрифугируют при

1500 об/мин в течение 10-15 мин, Надосадочную жидкость удаляют с помощью пипетки, а осадок ресуспендируют в капле любой интактной сыворотки (бычьей, лошадиной, человеческой). Из полученной суспензии клеток делают мазок, который высушивают, фиксируют в метиловом (3-4 мин)или этиловом (20-25 мин) спирте и окрашивают по Романовскому-Гимза. Просматривают в мазке под микроскопом при

900-кратном увеличении 100 лимфоци5

ЗО

55 тов, отмечая среди них число (7.) лимфоцитов, фиксировавших на себе три и более эритроцита. Зная содержание лимфоцитов (7) в крови больного и общий лейкоцитоз, высчитывают абсо лютное содержание лимфоцитов, фиксировавших на себе ацетилхолиновые эритроциты, в 1 мкл крови. Обработку эритроцитов барана глютаровым альдегидом производят, соединяя 0 5 мл

57-ной взвеси тщательно отмытых свежих эритроцитов с 0,257-ным свежеприготовленным раствором глютарового альдегида в соотношении 1:1. Смесь выдерживают при 37 С в течение

15 мин, после чего эритроциты тщательно отмывают от альдегида эабуференным изотоническим раствором хлорида натрия (рН 7,2) и доводят этим же раствором до первоначального объема (57-ная взвесь). Для сенсибилизации зритроцитов готовят раствор ацетилхолина с концентрацией

200 нг/мл на забуференном физиологическом растворе (рН 6,4). 1 мл

57.-ной взвеси глютаризированных эритроцитов центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а к осадку эритроцитов приливают 1 мл раствора ацетилхолина. Смесь тщательйо встряхивают и выдерживают при 20-22 С

25-30 мин, после чего эритроциты дважды отмывают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 5 мин изотоническим раствором хлорида натрия (рН 7,2) и им же доводят взвесь до первоначального объема (57.).

Пример 1. Больная И., 25 лет, поступила в клинику нервных болезней с жалобами на общую сла бость, быструю утомляемость рук и ног, затруднение при глотании, попа дание пищи в нос, осиплость голоса при длительном разговоре. Из анамнеза известно, что заболела после физического переутомления, когда стала отмечать быструю, вначале непостояннув, а потом все более длительную утомляемость в йогах. Через 2 мес, возник приступ слабости в руках, а спустя еще месяц появились затруднения при жевании, поперхивания при еде ° Диагностирована генерализованная форма миастении средней тяжести, Проведено специфическое лечение (антихолинэстеразные препараты), и с улучшением больная выписана, Затем вновь поступила в клинику с ухудше63074

3 13 нием течения болезни, У больной отмечалось утомление при длительном жевании, слабость мышц нижнемимической мускулатуры, осиплость голоса, дисфагия, слабость мышц рук и ног.

Больная обследована. Анализ крови и мочи без патологии. На обзорной краниограмме патологии нет. Глазное дно не изменено. При исследовании электровозбудимости мышц обнаружено нарушение нервно-мьппечной передачи по миастеническому типу. Иммунологическим исследованием крови больной на содержание лимфоцитов, специфичных ацетилхолину, до и после введения прозерина установлено наличие характерного для миастении ответа.

При проведении пробы с использование

0 05 мл крови, взятой из пальца больной до и через 30 мин после введения прозерина, добавления к ней

0,1 мл 5Х-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином, и инкубации смеси при 37 С установлено исходное содержание розеткообразующих лимфоцитов, равное 43Х (1138 в 1 мкл крови), и резкое падение их числа до 13Х (165 в 1 мкл крови) после введения прозерина.

Пример 2, Больная С,, 24 лет, заболела после острого респираторного заболевания и эмоционального перенапряжения. Появилась диплопия в горизонтальной плоскости, однако она была непостоянной. После пребывания на юге двоение усилилось, опустилось левое веко ° Диагностирован базальный лептоменингит. Специфическое лечение эффекта не дало. Заподозрена опухоль мозга, по поводу чего произведена каротидная ангиография слева.

Диагноз опухолевого процесса не подтвердился. Затем заподозрена миастения гравис, произведена прозериновая проба, которая дала отрицательный результат. В течение года диагноз поставлен не был. Состояние ухудшилось и больная поступила в клинику. Классическая прозериновая проба отрицательна. При лабораторных и параклинических методах обследования патологии не выявлено. При проведении иммунологической пробы 0,1.мл крови больной, взятой до и через

30 мин после введения прозерина, соединили с 0,2 мл 5Х-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином, и инкубировали при

15 м

37,5 С. Исходное содержание розеткообразующих лимфоцитов, специфичных ацетилхолину, в крови больной было повышенным и составляло ЗОХ (504 в

1 мкл крови). После введения прозерина оно резко снизилось до 9Х (143 в 1 мкл крови), что характеризует ответ, типичный для миастении.

Осмотр больной установил наличие диплонии при взгляде вниз,экзофтальм, левосторонний птоэ, ограничение при движении глазных яблок кнаружи и кнутри, нарушение конвергенции. Поставлен диагноз. глазная форма миастении ° При дальнейшем наблюдении у больной появились слабость в руках и началась генерализация миастенического процесса.

Пример 3. Больной Г;, 33 лет, поступил в клинику нервных болезней с жалобами на постоянную резкую боль в поясничной области с иррадиацией в ногу по наружной поверхности бедер и голеней, онемение по наружному краю стоп. Боли усиливаются при движении, ходьбе, кашле. Болен в течение 5 лет, заболел после интенсивной физической нагрузки и переохлаждения. Последнее обострение возникло за 1,5 мес до поступления в клинику также после поднятия тяжести, Лечился амбулаторно, но улучшения не было.

При обследовании отмечены резкая сглаженность поясничного лордоза, сколиоз с наклоном туловища влево, напряжение мышц от поясничной области, больше слева, ограничение объема движений в поясничном отделе позвоночника, положительный симптом Ласега с двух сторон, больше слева, гиперстезия по наружной поверхности голеней.

Коленные рефлексы живые, равные, пра-, вый ахиллов — снижен, левый — не вызывается. При рентгенографии позвоночнйка отмечено сужение межпозвонковой щели между 4-м и 5-м поясничными позвонка. ми, выраженный поясничный сколиоз, аномалия первого крестцового позвонка.

Диагноз: остеохондроз поясничнокрестцового отдела позвоночника, корешковый болевой синдром вследствие компрессии грыжей диска пятого поясничного корешка слева и частично справа. У больного имеются поражения периферической нервной системы. Ре5 13630 зультаты иммунологической пробы: до введения прозерина 6% после введения 317.. Результаты пробы получены . при инкубации при t 37 С 0,05 мл крови, взятой иэ пальца больного до и через 30 мин после введения прозерина добавления к ней 0,1 мл 5%-ной .суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином. 10

У больного тип иммунного ответа на проверни не:характерен для миастенического нарушения нервно-мьппеч ной передачи.

Пример 4. П-ва, 30 лет, практически здорова. Проба проведена с использованием 0,1 мл крови, взятой из пальца до и через. 30 мин после введения прозерина, добавления к ней 0,2 мл 57-ной суспензии эри- рр троцитов барана, нагруженных ацетилхолином, и инкубации смеси при

37,5 С. Число лимфоцитов, прореагировавших с ацетилхолиновыми эритроцитами до введения прозерина, 10%, 25 через 30 мин после введения — 39%, т.е. наблюдался иммунный ответ, типичный для практически здоровых людей.

Способ испытан на 20 больных с различными формами миастении, из них у 15 — генерализованная форма, у 5— локальная (глазная). У всех обследуемых диагноз бып поставлен верно.

Данные иммунологической пробы у больных миастенией приведены в табл.1.

Данные иммунологической пробы у больных рассеянным склерозом и заболеванием периферической нервной системы приведены в табл.3. 4р

74 6

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что иммунная картина крови до и после введения прозерина различна у больных миастенией, рассеянным склерозом, заболеваниями периферической нервной системы и у практически здоровых лиц.

Таблица 1

Клинический диагноз

Результат пробы после введения прозерина,до введения прозерина

Генерализованная форма миастении

То же

32

Глазная форма миастении

Число лимфоцитов, взаимодействующих с ацетилхолиновыми эритроцитами, %

Ввиду высокой чувствительности предлагаемый способ дает BosMoKHocTb диагностировать доклинические и субклинические формы нарушений нервномьппечной передачи миастенического типа, ранней и объективной иммуно". диагностики миастении, так как он основан на регистрации ранних минимальных нарушений регуляции иммуннойсистемой баланса ацетилхолина, изменений его минимальных концен траций.

Формула из обретения

Способ диагностики миастении путем введения больному раствора проэернна с последующим исследованием эффекта его воздействия, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, пробу крови исследуют до и спустя полчаса после введения раствора прозерина, затем добавляют в пробу 0,1-0,2 мл

57-ной суспензии эритроцитов барана, нагруженных ацетилхолином, инкубируют смесь при 37-37,5 С с последующим подсчетом в мазке розеткообразующих лимфоцитов и при снижении их исходного числа с 247 и вьппе до 137. и ниже диагностируют миастению.

1363074

Продолжение табл.1

1 до введения после введения прозерина прозерина

24

То же

43

33

То же

35

Глазная форма миастении

То же

31

Глазная форма миастении

33

То же

38

8+0,47

32,1 i 1,13

П р и м е ч а н и е: + положительная проба;

R ii

+ — достоверность отличия с фоном Р (0,001.

Число лимфоцитов, взаимодействующих с ацетилхолиновыми эритроцитами, 7.

Результат пробы

Клинический диагноз

Генерализованная форма миастении

Глазная форма миастении

Генерализованная форма миастении

Генерализованная форма миастении

Генерализованная форма миастении

1363074

Таблица 2

Продолжение табл. 2

Число сенсибилизированных к

5 ацетилхолину лимфоцитов Е до введения прозерина (фон)

27

7 28

4 35

39

30,0+1,54

7,2 + 0,51

Достоверность отличия с фоном

Р<0,001.

Таблица 3 Число сенсибилизированных к ацетилхолину лимфоцитов, Ж

Результат пробы до введения про- через 30 мин зерина после введения прозерина

Рассеянный склероз 31

35

32

31

39

22,4+1,34

33,6+1,53"

Заболевания периферической нервной системы

10.

24

Число сенсибилизированных к ацетилхолину лимфоцитов 7. до введения через 30 мин прозерина после введения (ф н) прозерина

Результат. пробы через 30 мин после введения прозерина

Ре зультаты пробы

1363074

Продолжение табл.3

Число сенсибилизированных к ацетилхолину лимфоцитов, 7

Результат пробы до введения про- через 30 мин зерина после введения прозерина

21

26

32

29,0+1, 84

7,4+О, 51

П р и м е ч а н и е: "Ф "- проба положительная, т.к. свидетельствует об изменении баланса ацетилхолина,но не характерна для миастенического типа нарушений в нервно-мышечном аппарате; проба отрицательная

+ — достоверность отличий с фоном P <0,001.

Составитель Л.Шилина

Техред Л.Сердюкова

Редактор И.Рыбченко

Корректор В,Гирняк

Подписное

Заказ 6398/34

Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4