Способ количественного определения дезоксиниваленола в злаках и продуктах их переработки

 

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения в злаках и продуктах их переработки токсичных з агрязнений, в частности деЭоксиниваленола. Цель изобретения - улучшение селективности и повышение чувствительности анализа. FlaaecKy зерна или муки экстрагируют смесью ацетонитрил-вода в объемном соотношении 84:16, фильтруют, пробу фильтра подают в хроматографическую колонку и элюируют тем же растворителем. К полученному элюату добавляют изопропанол и упаривают в вакууме. Сухой остаток , растворенный в смеси ацетонитрил-хлороформ (4:1), наносят на тех пластину. Затем осуществляют двухмерное элюирование пробы в системе растворителей: эфир-метанол-вода-бензол в объемном соотношении 88- 92:2,5-3,5:0,4-0,8:2-4 и хлороформацетон-изопропанол-бензол в объемном соотношении 76-82:18-24:9-11:О,8- 1,2:2,5-3,5. Проявляют хроматограмму 15%-ным спиртовым раствором хлористого алюминия с последующим нагреванием пластины и УФ-облучением. Дезоксиниваленом идентифицируют по голубой флуоресценции и величине хроматографической подвижности, совпадающей с подвижностью стандарта. (/. С со О5 СО Г)

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИ4ЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 G 01 N 30/90 тт, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2 1) 4 1 1 1265/3 1-25 (22) 19.06.86 (46) 07.01,88. Бюл. № 1 (71) Институт питания АМН СССР (72) В.С.Соболев, P,О,Санчес и В.А.Тутельян (53) 543.544 (088.8) (56) J. Assoc. off Anal. Chem., 1984, v ° 67, № 1, р. 52-54.

J. Assoc. off Anal. Chem., 1984, v. 67, № 4, р,731-734.

J. Assoc. off. Anal. Chem., 1984, v. 67, ¹ 1, р. 40-43. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЗОКСИНИВАЛЕНОЛА В ЗЛАКАХ И

ПРОДУКТАХ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ (57) Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения в злаках и продуктах их переработки токсичных загрязнений, в частности дезоксиниваленола. Цель изобретения — улучшение селектинности и повышение чувствительности анализа, Навеску зерна

% 1 4 9 А1 или муки экстрагируют смесью ацетонитрил-вода в объемном соотношении

84:16, фильтруют, пробу фильтра подают в хроматографическую колонку и элюируют тем же растворителем. К полученному элюату добавляют изопропанол и упаривают в вакууме. Сухой остаток, растворенный в смеси ацетонитрил-хлороформ (4:1), наносят на

ТСХ пластину. Затем осуществляют двухмерное элюирование пробы в сис— теме растворителей: эфир-метанол-вода-бенэол в объемном соотношении 8892:2,5-3,5:0,4-0,8:2-4 и хлороформацетон-изопропанол-бензол в объемном соотношении 76-82:18-24:9-11:0,81,2:2,5-3,5. Проявляют хроматограмму

157-ным спиртовым раствором хлористого алюминия с последующим нагреванием пластины и УФ-оел пением. Деаонсини- C. валеном идентифицируют по голубой флуоресценции и величине хроматографической подвижности, совпадающей с подвижностью стандарта. Мий

1364979

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть испольY, ° m

С

Y 5000 зовано для определения в злаках и продуктах их переработки опасных загрязнителей, в частности один из его наиболее опасных и распространенных предстанителей этой группы — дезоксининаленол (ДОН), обладающий высокими токсическими свойствами.

Цель изобретения — увеличение селективности разделения и повышение чувствительности анализа.

Способ осуществляется следующим образом.

Измельченную навеску зерна или муки экстрагируют смесью ацетонитри:i — вода н объемном соотношении

84:16 при встряхивании н течение

30 мин, фильтруют. Аликноту фильтрата наносят на хроматографическую кононку с окисью алюминия и активиронаиным углем. Колонку промывают порцией смеси ацетонитрила с водой в указанном соотношении. Элюат удаляют в вакууме. После удаления основной массы растворителя к остатку добавляют изопропанол и упаривают в вакууме досуха. Сухой остаток растворяют в смеси хлороформ — ацетонитрил (4:1) и наносят на ТСХ пластину с силикагелем, На ту же пластину наносят стандарт ДОН. Элюируют пластинку в первом направлении в системе эфир — метанол — вода — бензол в соотношении 88-92:2,5-3,5:0,4 0,8:

:2-4. По достижении фронтом растворителя карандашной линии, проведенной в 10 см от старта, пластинку извлекают из хроматографической камеры, сушат на воздухе, а затем помещают в систему растворителей хлороформ — ацетон — изопропанол — вода— бенэол н соотношении 78-82:18-24:911:0,8-1,2:2,5-3,5. При достижении фронтом растворителя контрольной черты пластинку извлекают из камеры, сушат на воздухе и опрыскивают 157.-ным спиртовым раствором хлористого алюминия. После нат.ревания пластинки о при 100 С в течение 6 мин пластинку расcMäòðèâàþò н длинноволновом УФсвете. ДОН идентифицируют по голубой ф«уоресценции и величине хроматографической подвижности, совпадающей с подвижностью стандарта.

Концентрацию IIOH (мг/кг) в образit< рассчитывают по формуле

Остаток в колбе растворяют н

150 мкл смеси хлороформ — ацетонитрил в объемном соотношении 4:1 (раствор А) .

5 где Y, — объем раствора перед нанесением на ТСХ пластинку, мкл;

У вЂ” объем раствора, нанесенный на ТСХ пластинку, мкл;

m — количество (нг) ДОН в

Y (мкл) раствора, оцененное денситометрическим или визуальным сравнением со стандартом на ТСХ пластинке.

Пример 1. Анализ кукурузы на дезоксиниваленол по предлагаемому способу.

Отобранную пробу измельчают в те20 чение 1-2 мин на лабораторной мельнице или в кофемолке. Навеску 25 r измельченного зерна кукурузы помещают н плоскодонную коническую колбу на

250 мл, добавляют 125 мл смеси аце25 тонитрила с водой в объемном соотношении 21:4. Встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин.

Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерный цилиндр, отбирая 25 мл фильтрата.

В стеклянную хроматографическую колонку с внутренним диаметром 10 мм на дно помещают кусочек ваты, насыпают 0,75 r окиси алюминия и сверху слой активированного угля 0,75 r, 35 предварительного растертого в ступке. Над слоем угля помещают кусочек наты. Приливают в колонку 25 мл экстракта анапизируемой кукурузы, со40 ответствующие 5 г исходного образца.

Отбирают элюат и, не давая колонке просохнуть, добавляют еще 10 мл смеси ацетонитрил — вода в укаэанном соотношении. Объединенные элюаты фильт45 руют через бумажный складчатый фильтр в колбу на 50 мл, бумажный фильтр промывают 7 мл изопропилового спирта в ту же колбу. Фильтрат упаривают на ротационном испарителе до объема 5 мл. Добавляют 15 мл иэопропилоного спирта и повторно упаривают на ротационном испарителе досуха.Остаток в колбе после упаривания не должен содержать капель воды.

1364979

Дезоксиниваленол проявляется в виде пятен с синей флуоресценцией. На- 45 личие в экстракте пятен, соответствующих по цвету флуоресценции и хроматографической подвижности пятнам

ДОН, свидетельствует о наличии в анализируемом образце ДОН. Для количественного определения ДОН проводят флуороденситометрию пятен стандартов и пятна IIOH в экстракте или сравнивают интенсивногть флуоресценции разных количеств гтандарта ilOH с интен55 сивногтью его пятен в образце, приблизитс чьно с цеHHRBR количество дезокс инивалс нона (нг) B нанес енных на плагтилк, объс мах раствора Л.

Пластинку Силуфол размером

15Х15 гм размечают легкими карандашными линиями следующим образом. На расстоянии 1,5 см от сторон пластин5 ки проводят две взаимно перпендикулярные линии, каждая из которых параллельна ближайшей стороне пластинки. В точку пересечения этих линий (в правом нижнем углу) наносят с помощью микрошприца 15 мкл раствора А.

В правом верхнем и левом нижнем углах пластинки на расстоянии 1,5 см от сторон наносят 2, 3, 4 и 6, 8 мкл стандартного раствора ДОН (концентрацией 20 нг/мкл) соответственно.

Расстояние между пятнами стандартов

6-8 мм. Пластинку помещают в камеру для ТСХ со смесью растворителей эфир — метанол — вода — бензол в 20 объемном соотношении 90:3:0,5:3 и разливают ее в первом направлении до достижения фронтом растворителя карандашной линии, проведенной в 3-х см от верхнего края пластинки. Плас- 25 тинку извлекают из камеры и сушат на воздухе 5 мин. Затем развивают пластинку во втором, перпендикулярном, направлении в системе растворителей хлороформ — ацетон — иэопропанол вода — бензол в объемном соотношении

78:22:10:1:3.

После достижения фронтам растворителя контрольной линии, проведенной в 3-х см от верхнего края пластинки, ее извлекают из камеры и сушат на воздухе 5 мин. Пластинку опрыскивают

157-ным раствором 6-водного хлорис,того алюминия в этиловом спирте наго ревают в сушильном шкафу при 100 С в 40 течение 5 мин, затем рассматривают в длинноволновом (365 нм) УФ-свете.

Концентрацию ДОН (мг/кг) в образце рассчитывают по формуле

Y(° m

С

У 5000 где Yl — объем раствора А, мкл;

Y — объем раствора А, нанесенный на пластинку, мкл;

m — количество ДОН (нг) в объеме раствора А (мкл), оцененное денситометрическим сравнением со стандартом на ТСХ пластинке.

При рассматривании пластинки в

УФ-свете обнаруживается пятно с синей флуоресценцией, находящееся на пересечении перпендикуляров к направлениям развития хроматограммы, проведенных через центры пятен стандартов. Проведя денситометрическое определение интенсивности флуоресценции пятен ДОН, определяют, что пятно экстракта соответствует 110 нг

ДОН. Концентрация ДОН в кукурузе

С = 0,22 мг/кг.

Таким образом, в 1 кг данного образца кукурузы содержится 0,22 мг дезоксиниваленола.

Пример 2. Анализ пшеницы на дезоксиниваленол по предлагаемому способу.

Анализ проводят аналогично примеру 1. По данным флуороденситометрии пятно экстракта соответствует 432 нг

ДОН, Концентрация ДОН в пшенице С

0,92 мг/кг.

Таким образом, в 1 кг образца пшеницы содержится 0,92 мг ДОН.

Пример 3. Анализ кукурузы на дезоксиниваленол по предлагаемому способу, К образцу кукурузы добавляют ilOH на уровне 0,25 мг/кг и осуществляют анализ аналогично примеру 1. Хроматографическую пластинку с нанесенными пятнами стандарта и экстракта элюируют в двух направлениях в одной, и той же системе растворителей эфир метанол — вода — бензол в объемном соогношении 90:3:0,5:3. После обра— ботки пластинки хлористым алюминием и нагревания определяют содержание

ДОН методом флуороденситометрии. Пятно токсина частично перекрынаетгя с пятном одного из компонентов экгтрак1364979

Формула изобретения

Составитель В,Толстых

Техред Л.Сердюкова Корректор И.Эрдеии

Редактор Н.Гунько

Заказ 6591/37 Тираж 847. Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 та, флуоресцирующего синим цветом и похожим на пятно ДОН, иэ-за чего его количественная оценка затруднена.

На десинтограмме площади пиков токси5 на и примеси перекрываются приблизительно на 303, Таким образом, при использовании одной и той же системы растворителей в двухмерной ТСХ возможно получение ложноположительного вывода о наличии

ДОН в образце иэ-за близких хроматографических параметров ДОН в примеси, содержащейся в экстракте.

Пример 4. Анализ кукурузы 15 на дезоксиниваленол по предлагаемому способу, Анализ осуществляют аналогично примеру 5. Хроматографическую пластинку элюируют в двух направлениях 20 в одной и той же системе растворителей хлороформ — ацетон — иэопропанол — вода — бенэол в объемном соотношении 78:22:10:1:3. Дальнейшую обработку проводят аналогично примеру 1 и определяют содержание ДОН с помощью флуороденситометрии. Пятно ДОН, содержащегося в экстракте, перекрывается с пятном одного иэ компонентов экстракта, флуоресцирующего си- 30 ним .цветом и похожим на пятно ДОН, из-за чего его идентификация и количественное определение затруднены.

На денситограмме площади пиков токсина и примеси прекрываются более, чем на 60Å, Таким образом, при использовании одной из предлагаемых систем растворителей в двух взаимно перпендикулярных направлениях возможно получение ложноположительного результата наличия ДОН в исследуемом образце иэ-за близких хроматографических параметров ДОН и флуоресцирующей примеси, содержащейся в экстракте.

Способ количественного определения деэоксиниваленола в злаках и продуктах их переработки, включающий экстракцию образца, очистку его колоночной хроматографией, нанесение пробы образца на тонкослойную пластину с силикагелем, элюирование пробы в системе органических растворителей, идентификацию и количественное определение деэоксиниваленола по флуоресценции после обработки пластины проявляющим агентом, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью улучшения селективности разделения и повышения чувствительности анализа, осуществляют двухмерное элюирование пробы в системе растворителей: эфнр— метанол — вода — бенэол в объемном соотношении 88-92:2,5-3,5:0,4-0,8:2 и хлороформ " ацетон — изопропанолвода — бенэол в объемном соотношении

76-82: 18-24:9-11:0,8-1,2:2,5-3,5.

Способ количественного определения дезоксиниваленола в злаках и продуктах их переработки Способ количественного определения дезоксиниваленола в злаках и продуктах их переработки Способ количественного определения дезоксиниваленола в злаках и продуктах их переработки Способ количественного определения дезоксиниваленола в злаках и продуктах их переработки 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения примесей в препаратах арсеназо Ш методом тонкослойной хроматографии

Изобретение относится к анали-v тической химии, а именно к способам определения удельной поверхности металла хроматографическими методами , и может быть использовано для повышения точности определения характеристик катализаторов

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению суммарного содержания нефтепродуктов в природной воде и сточных водах

Изобретение относится к аналитической химии и может быть исполь зовано для анализа смесей органических соединений, преимущественно сахаров и компонентов нуклеиновых кислот

Изобретение относится к парафазной хроматографии и может быть использовано в аналитическом контроле технологических процессов, для анализа загрязнения воздуха в химической , нефтехимической, полиграфической , деревообрабатываюшей и других отраслях промьшшенности, а также в медицине, биологии и др

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к хроматографическому определению о-нитробензойной кислоты (о-НБК)

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано при хроматографическом анализе полимеров для определения молекулярных масс олигоизобутиленов

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения свинца

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к определению диизоцианатов (ДЦ) и может использоваться для контроля за содержанием 2,4-, 2,6-толуилени 4,4 -дифенилметандиизоцианатов в воздухе или воде

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к хроматографическому определению м нитробензойной кислоты (м-НБК)

Изобретение относится к определению остаточных количеств гербицида в продуктах животного происхождения

Изобретение относится к области химического анализа и может быть использовано для определения концентраций о-хлорфенола и 2,6-дихлорфенола в воздухе при санитарно-гигиенических исследованиях на содержание хлорфенолов

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в металлургии, химической индустрии, экологии, медицине, пищевой промышленности

Изобретение относится к аналитической химии и может найти применение в аналитических лабораториях
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и дерматологии

Изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть рекомендовано для идентификации гидроксисульфокислот (2-нафтол-6-сульфокислоты, 1-нафтол-3,8-дисульфокислоты, 2-нафтол-6,8-дисульфокислоты, 1-амино-2-нафтол-4-сульфокислоты, 1-амино-8-нафтол-3,6-дисульфокислоты, 5-аминосульфосалициловой) при анализе сточных вод производства азокрасителей

Изобретение относится к области химического анализа и может быть использовано для определения качественного состава органических веществ в объектах на основе органической матрицы: в осадках избыточного активного ила промышленных и коммунальных биологических очистных сооружений, в донных отложениях водных объектов, в органоминеральных удобрениях и почвах при экологических и санитарно-химических исследованиях

Изобретение относится к биологии, токсикологической и ветеринарной химии, а именно к способам определения N-(бензимидазолил-2)-O-метилкарбамата в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и ветеринарных лабораторий

Изобретение относится к области исследования материалов химическими способами, а именно путем хроматографии, и может найти применение при оценке качества антоциановых красителей, полученных безкислотным способом из растительного сырья, в фармацевтической, ликероводочной и других отраслях пищевой промышленности
Наверх