Способ хроматографического определения витамина а в смесях веществ

 

Изобретение относится к области аналитической химии и может применяться для определения витамина А в биологических веществах методом тонкослойной хроматографии. Цель изобретения - повышение воспроизводимости и сокращение времени анализа. Методом экстракции получают фракцию, содержащую витамин А. Экстракт фильтруют , упаривают и полученный остаток растворяют в хлороформе. Пробу раствора наносят на хроматографическую пластину и осуществляют разделение компонентов в потоке смеси хлороформгептан в объемном соотношении 92 - 98:8 - 2. Обнаружение выделенного витамина А осуществляют последовательной обработкой пластины треххлористым железом: парами иода, 2,2-дитеридила и парами аммиака. После проведения цветной реакции витамин А определяют по свидетелю, окрашенные участки элюируют с пластины и. осуществляют количественный анализ фотометрическим методом. -ч i (Л с со . PS

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

4126 А1 (l% SU ((!! 511 4 G 01 N 30/90

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ .

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4106773/23-25 (22 ) 01. 08. 86 (46) 15.02.88, Бюл. У 6 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) П.Ф.Сурай и И.А.Ионов (53) 543.544 (088.8) (56) Жирорастворимые витамины и методы их определения в биологических субстратах. Боровск, 1979, с. 35-47..

Дмитровский А.А., Крюков В.С.

Количественное определение витамина

А с применением тонкослойной хроматографии, 1975, 14.

Шаршунова M., Шварц В., Михайлец Ч. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии.

M., Мир, 1980, т.2, с,303, (54) СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА А В СМЕСЯХ

ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к области аналитической химии и может применяться для определения витамина А в биологических веществах методом тонкослойной хроматографии. Цель изобретения — повышение воспроизводимости и сокращение времени анализа.

Методом экстракции получают фракцию, содержащую витамин А. Экстракт фильтруют, упаривают и полученный остаток растворяют в хлороформе. Пробу раствора наносят на хроматографическую пластину и осуществляют разделение компонентов в потоке смеси хлороформгептан в объемном соотношении 92—

98:8 — 2. Обнаружение выделенного витамина А осуществляют последовательной обработкой пластины треххлористым железом: парами иода, 2,2-дитеридила и парами аммиака. После проведения цветной реакции витамин

А определяют по свидетелю, окрашенные участки элюируют с пластины и осуществляют количественный анализ фотометрическим методом, 1

137

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть применено для определения витамина

А в биологических веществах методом тонкослойной хроматографии.

Цель изобретения — повышение воспроизводимости сокращения времени анализа.

Способ осуществляется следующим образом, Методом экстракции получают фракцию, содержащую витамин А. Экстракт фильтруют,. упаривают и полученный остаток растворяют в хлороформе. Про. бу раствора наносят на хроматографическую пластину и осуществляют разделение компонентов в потоке смеси хлороформ-гептан в объемном соотношении

92-98:8-2. Обнаружение выделенного витамина А осуществляют последовательной обработкой пластины треххлористым железом, парами йода, 2,2-дипиридила и парами аммиака. После проведения цветной реакции витамин А определяют по свидетелю, окрашенные участки элюируют с пластины и осуществляют количественный анализ витамина А фотометрическим методом.

Пример 1. Определение витамина А в печени кур.

Навеску гомогенизированного образца печени (50-100 мг) вносят в колбочку для омыления, добавляют 20 мл этанола, 100 мг пирогаллола и 5 мл

60Х КОН. Далее присоединяют обратный хблодильник и проводят щелочное омыление на глицериновой бане при 90 С в течение 30 мин, периодически встряхивая колбочку. После омыления колбу быстро охлаждают, добавляют 20 мл воды и ее содержимое переносят в делительную воронку, куда предварительно вносят 50 мл гексана, энергично взбалтывают и оставляют до расслоения жидкостей на 5 — 10 мин, затем повторяют экстракцию еще дважды по 30 мл гексана. Гексановую вытяжку отмывают дистиллированной водой до нейтральной реакции по универсальной индикаторной бумаге, Затем фильтруют через воронку, заполненную обезвоженным сульфатом натрия, Фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в 0,2

0,4 мл хлороформа и количественно переносят на стартовую линию пластинки."Силуфол", Тонкослойную хроматографию осуществляют в камере, насыщенной пара4126

1r

55 ми подвижной фазы — смеси хлороформа и гептана (94:6). После того, как фронт растворителя достигнет верхнего края пластинки, ее извлекают из камеры, сле=ка подсушивают до исчезновения следов растворителя, а затем опрыскивают 0,2 -ным спиртовым раствором хлорного железа (III) высушивают в токе теплого воздуха и затем помещают на 5-10 с в камеру, насыщенную парами йода, При этом на пластинке появляется серовато-синее пятно витамина А, а она окрашивается в голубоватый цвет. После этого пластинку прогревают в токе теплого воздуха до полного исчезновения следов йода с пластинки, т.е. до полного ее обесцвечивания. Затем пластинку опрыскивают 0,57.-ным этанольным раствором 2,2-дипиридила. На пластинке появляется розово-красная полоса витамина А на белом фоне. После этого пластинку помещают на 5 с в камеру, насыщенную парами аммиака, это позволяет полностью обесцветить фон пластинки и закрепить розово-красную окраску, которая после такой фиксации не исчезает несколько дней.

Локализацию витамина А определяют по свидетелю и окрашенный участок силикагеля количественно переносят в пробирку с притертой пробкой. Затем в пробирку приливают 3 мл элюирующей смеси, состоящей из этанола, соляной и фосфорной кислот и дистиллированной воды в объемных соотношениях

6:3:1:2, энергично встряхивают в течение 20 с и отфильтровывают через обеззоленный фильтр (красная полоса).

Ополаскивают пробирку 1 мл элюирующей смеси, которую переносят на тот же фильтр. Полученный розово-красный фильтрат фотометрируют при 492 нм по сравнению с элюирующей смесью. Содержание витамина А определяют по калибровочному графику.

Пример 2. Определение витамина А в масляном концентрате.

100 мг масляного концентрата количественно растворяют в 2 мл хлороформа и переносят в мерную колбу на

100 мл, доводят до метки хлороформом.

На стартовую линию пластинки

"Силуфол" наносят 0,1 мл полученного раствора в виде полосы длиною 80 мм, рядом наносят точку стандартного раствора ретинилацетата (1 мкг).

1374126

А d ° Y!

Уг п Оуз

Составитель В. Толстых

Техред М.Ходанич Корректор В.Гирняк

Редактор О.Спесивых

Заказ 568/40 Тираж 847, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва,Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул.Проектная, 4

Все дальнейшие операции проводят по примеру 1, а растчет содержания витамина А в препарате проводят по формуле где Х вЂ” количество витамина А в препарате, HE/ìë;

А — количество витамина А, найденное по калибровочному графику, мкг;

d — плотность масла, г/мл;

Y — объем хлороформа, в кото1 ром растворена навеска препарата (100 мл);

Y — объем хлороформного растг вора препарата, нанесенного на пластинку (0,1 мл);

n — навеска препарата, г;

0,3 — коэффициент перерасчета в интернациональные единицы (ИЕ).

Пример 3. Определение витамина А в тривитамине.

200 мг тривитамина количественно растворяют в 2 мл хлороформа и переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки хлороформом. Дальней5 шие операции проводят по примеру 1, а расчет ведут согласно примеру 2.

Ф о в м у л а и з обретения

Способ хроматографического определения витамина А в смесях веществ, заключающийся в нанесении пробы смеси на тонкослойную хроматографическую пластину, разделении компонентов смеси потоком органического элюента и обработке пластины реактивами для обнаружения выделенного витамина А по цветной реакции, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости и сокращения времени анализа, разделение осуществляют смесью хлороформ-гептан в объемном соотношении 92-98 : 8-2, а при обнаружении витамина А пластину последовательно обрабатывают хлористым желе25 зом, парами йода, 2,2-дипиридилом и парами аммиака,