Способ оценки селекционного материала кукурузы на выявление гена опейк-2

 

Изобретение относится к селекционно-генетическим исследованиям и может быть использовано при массовой оценке селекционного материала кукурузы на наличие гена Опейк-2 на различных стадиях созревания зерна. Целью изобретения является упрощение процесса выявления гена Опейк-2. Для этого после обработки образца размолотого зерна экстрагентами, получения белковой фракции и очистки от механических примесей при последующем анализе ген Опейк-2 выявляют по повьшенной активности аскартатаминтрансферазы при длине волны 500-560 нм. Обработку образца проводят при температуре 0-4 С в течение 30-60 мин. 6 табл. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

1« ч

*;, « «

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4109274/31-13 (22) 10,06.86 (46) 15.03.88. Бюл. Ф 10 (71) Днепропетровский государственный университет им.300-летия воссоединения Украины с Россией (72) А.Н.Винниченко, Н.П.Коцюбинская, Л.В.Комиссарова и Ю.В.Донченко (53) 575.42 (088.8) (56) Евепа, Estimation of protein

quality and quautity in corn (Zea

mays Z) by assaying protein in

two solubility fractions. - J.Agric, Foodchem, 28, р.529-532; 1980. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СЕЛЕКЦИОННОГО МАТЕРИАЛА КУКУРУЗЫ HA ВЫЯВЛЕНИЕ ГЕНА

ОПЕЙК-2

„„SU„„1381160 (5п4 С !2 Q 1/48 А 01 Н 1/06 (57) Изобретение относится к селекционно-генетическим исследованиям и момет быть использовано при массовой оценке селекционного материала кукурузы на наличие гена Опейк-2 на различных стадиях созревания зерна.

Целью изобретения является упрощение процесса выявления гена Опейк-2.

Для этого после обработки образца размолотого зерна экстрагентами, получения белковой фракции и очистки от механических примесей при последующем анализе ген Опейк-2 выявляют по повьппенной активности аскартатаминтрансферазы при длине волны

500-560 нм. Обработку образца проводят при температуре 0-4 С в течение

30-60 мин. 6 табл.

1381160

Изобретение относится к селекционно-генетическим исследованиям сельскохозяйственных культур и может быть применено при массовой оценке селекционного материала на качество белка.

Целью изобретения является упрощение способа.

Упрощение способа обеспечивается тем, что после обработки образца размолотого зерна экстрагентами и получения белковой, фракции, очистки экстракта от механических примесей в последующем анализе ген Опейк-2 выявляют по повышенной активности аспартатаминотрансферазы при длине волны 500-560 нм, причем обработку образца проводят при 0-4 С в течение 30-60 мин, а в качестве экстрагента используют дистиллированную воду.

Пример I. Предложенным способом приводится анализ активности

АСТ-азы в зрелом зерне исходных

+++А2041 +++wf9; +++w64A; +++wl55 и мутантных о,о о, А204; о о,о q

ый9;о о,о, w64A; о о,о, w155 линий кукурузы в соспоставлении с другими биохимическими критериями, характеризующими качество зерна. У всех мутантов повышенное содержание лизина и незеи!

15

25

Пример 2 ° Проводится выявле" ние гена Опейк-2 по повышенной ак" тивности АСТ-азы в разные фазы созревания зерна у исходных (+++wf9, +++A204) и гомоэиготных мутантных о,о î wf9; о о î А204 линий кукурузы. Повышенная активность АСТ-азы отмечается в зерне мутантов по отношению к исходным генотипам во все строки онтогенетического развития, что позволяет в отличие от известных способов вести более раннюю диагностику селекционного материала, 50

55 новых белков, полнопенных по амино35 кислотному составу, коррелирует с повышенной акттивностью аспартатами1 нотрансфераэы. Поэтому в этом приме-ре активность АСТ-азы может являться критерием оценки биохимических изме- 40 нений, происходящих в зерне кукурузы под действием гена Опейк-2, а следовательно, и способом выявления наличия данного гена в генотипе.

Результаты представлены в табл. 1. начиная со стадии формирования sepна.

Результаты приведены в табл.2.

Пример 3. 1 г размолотого зерна кукурузы заливают 5 мл дистиллированной воды и проводят экстракцию альбуминов в первом варианте опыта в течение 15 мин, во втором

30 мин, в третьем 60 мин., в четвертом 80 мин при 4 С. Осадок во всех вариантах опыта определяют центрифугированием. В супернатанте определяют активность аспартатаминотрансферазы, Оптимальные пределы времени получения экстракта 30-60 мин. Снижение времени экстракции приводит к резкому падению активности аспартатаминотрансфераэы, а повышение удлиняет эксперимент беэ получения положительного эффекта.

Результаты опытов представлены в табл ° 3.

Пример 4. 1 г размолотого зерна кукурузы заливают 5 мл дистиллированной воды и проводят экстракцию альбуминов в течение 30 мин в о первом варианте опыта при 4 С, во . втором при 15 С, в третьем при 25 С.

Осадок во всех вариантах опыта определяют центрифугированием, в супернатанте определяют активность АСТазы.

Наиболее высокий уровень энэиматической активности наблюдался в экстракте, полученном при 4 С.

Результаты опыта приведены в табл,4.

Пример 5. 1 r размолотого зерна кукурузы заливают 5 мл дистиллированной воды и проводят экстракцию белка в течение 60 мин, при

4 С. В пробирки вносят по 1 мл субстрата АСТ и 0,2 мл кукурузного экс-. тракта, В первом варианте опыта пробы инкубируют 30 мин, во втором

60 мин, в третьем 90 мин при 37 С.

Оптимальное время инкубации пробы с субстратом 60 мин, так как в первом варианте опыта активность

АСТ-азы крайне низкая, а в третьем возрастает время опыта без достиже ния дополнительного положительного эффекта.

138! 160 ными.

Т а б л и ц а 1

Содержание лизина,X на протеин

Удельная активность АСТ-азы, ед.опт.плотности/мг белка

Отношение

Содержание неэеиновых белков,X на сухое вещество

Содержание зеин белков в 7 на сухое в -во

Линии кукурузы неэеиновых белков к + зеиновым

+++ о о,о, +++

+++ о о,о, +++ 02010K

+++ о о,о

I2,45 24,95 5,42 8,43 2,51 0,80 2,16 10,54 3,47 6,12

А204

l0:12 17,20

23,30 28,29

10,32 19,90

5,87 8,17 2,97 0,95 1,98 8,60 3,56 4,37

wf9

7е93 10э87 4в18 1э59 1в90 6э84 2 ° 24 4ю31

w64A

9,85 11,25 9,25 3,94 1,50 2,35 7,50 5,80

w155

Таблица2

18,70!

3,84

27,32

12,59

15,72

Формирование

Налив

29, 53

42,85

26,9

Молочная спелость

41; 80

41,83

31,99

51,00

Молочно-восковая

17,67

16,09

48,40

38,93

30,19 спелость

Восковая спе30,37!

6,60

10,73 лость

Зависимость активности АСТ-азы от времени инкубации представлены в табл.5.

Пример 6. г размолотого зерна кукурузы заливают 5 мл дистиллированной воды, проводят экстракцию белка в течение 1 ч при 4 С. В пробирки вносят по 1 мл субстрата

АСТ и 0,2 мл кукурузного экстракта.

После 60-минутной инкубации в пробы добавляют 1 мл 1 мМ 2,4-динитрофенилгидразина и через 10 мин 10 мл

0,4 М NaOH, Через 10 мин записывают спектр поглощения образовавшегося окрашенного комплекса в области

450-700 нм.

Обоснование граничных значений длины волны приведено в табл.6, Приведенные в табл.6 данные свидетельствуют о том, что наиболее значительные различия по активности аспартатаминотрансферазы между исходной и мутантной кукурузой наблюдается при измерениях величины оптической плотности в пределах 500560 нм. Эти пределы являются гранич!

О Формула изобретения

Способ оценки селекционного материала кукурузы на выявление гена

Опейк-2, предусматривающий обработку размолотого зерна зкстрагентами с получением белковой фракции, очистку от механических примесей и последующий анализ, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения способа, ген Опейк-2 выявляют по повышенной активности аспартатаминтрансферазы при длине волны 500560 нм, 1381! 60

Таблица3

Активность АСТ-азы, ед,опт.плотности /мг белка

Линия

Вариант опыта по примеру 3

) хп ) I II

А 204

6,46

11,75

l 2,45

lOt I2

12,57

I0 02 wf9

6,02

9,20

Таблица4

А 204

11,75

9,10

4,07

wf9

9,20

7,03

2,97

Таблица5

30

Время инкубации,мин

Активность АСТ-азы, ед.опт.плотности/мг белка

3,48

12,45 12,67

Т а б л и ц а 6

Активность АСТ-азы, ед.опт.плотности

/мг белка

Длина волны, нм аэность

oiq wf9

+++ ътй9

9,43

480

),l9

500

7,15

7,13

520

7,12

540

6,99

560

3,88

580

10,38

11 33

ll 91

12,76

16,19

10,62

17,53

I8,46

l9,03

19,75

20,07

Способ оценки селекционного материала кукурузы на выявление гена опейк-2 Способ оценки селекционного материала кукурузы на выявление гена опейк-2 Способ оценки селекционного материала кукурузы на выявление гена опейк-2 Способ оценки селекционного материала кукурузы на выявление гена опейк-2 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции растений

Изобретение относится к растениеводству и может быть применено для повышения его продуктивности путем изменения наследственных признаков одних растений под воздействием биологического излучения других растений

Изобретение относится к гербицидоустойчивым растениям кукурузы, ее семенам и потомству

Изобретение относится к области генетики, связанной с расширением спектра исходных форм селекции путем искусственного создания новых мутантных форм растений

Изобретение относится к хлопководству, а более конкретно к способам селекции культурных сортов хлопчатника, обладающих важным хозяйственно ценным свойством мутационной природы - раннего естественного листоопадения, опосредованной устойчивостью к белокрылкам (Bemisia tabaci, Trialeurodes vaporariorum) в сочетании со скороспелостью, высоким качеством хлопкового волокна снежно-белого цвета и экологически чистым (безъядовым) хлопковым волокном

Изобретение относится к генетике и селекции и может быть использовано для получения мутантов как исходного материала в селекции ячменя

Изобретение относится к области генетики и селекции и может быть использовано для индукции мутаций при создании исходного материала для селекции ячменя

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в области селекции, семеноводства, генетики и физиологии зерновых культур

Изобретение относится к биологии, а именно к генетике, и может быть использовано в сельскохозяйственном производстве, в производстве продуктов питания и в биотехнологии

Изобретение относится к селекционно-генетическим исследованиям и может быть использовано при массовой оценке селекционного материала кукурузы на наличие гена Опейк-2 на различных стадиях созревания зерна

Наверх