Способ получения реагентов для определения наследственных антигенов групп крови животных

 

Изобретение относится к иммунобиологии и может быть использовано в биопромьшшенности при изготовлении реагентов, применяемых в скотоводстве для генетического маркирования и контроля происхождения племенных животных . Цепью изобретения является . увеличение выхода реагентов.-Иммунную сьшоротку, полученную от животных, содержащую антитела к нескольким антигенам в титре 1:1 или выше, абсорбируют раздельно по фракциям, соответственно их специфичности к антигенам, используя эритроциты свежевзятой крог ви, затем каждую абсорбированную фракцию элюируют при 59-60°С в течение 3-4 мин. 1 .табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СО1.1ИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

5755 А1

amSUan

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3761673/30-13 (22) 30.05.84 (46) 30.06 ° 88. Бюл. У 24 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт животноводства (72) П.Ф.Сороковой и Н.Г.Букаров (53) 612.11.12(088.8) (56) Тихонов В.Н. Использование групп крови при селекции животных. М.: Колос, 1967, с. 392. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАСЛЕДСТВЕННЫХ АНТИГЕНОВ

ГРУПП КРОВИ ЖИВОТНЫХ (57} Изобретение относится к иммунобиологии и может быть использовано (gg y А 01 K 67/02 а О1 И 33/50 в биопромышленности при изготовлении реагентов, применяемых в скотоводстве для генетического маркирбвания и контроля происхождения племенных животных. Целью изобретения является увеличение выхода реагентов. -Иммунную сыворотку, полученную от животных, содержащую антитела к нескольким антигенам в титре 1:1 или выше, абсорбируют раздельно по фракциям соответственно их специфичности к антигенам, используя эритроциты свежевзятой кро-. ви> затем каждую абсорбированную фракцию элюируют при 59-60 С в течение

3-4 мин. 1 .табл.

1405755

Изобретение относится к иммунобиологии и может быть использовано в биопромьппленности при изготовлении реагентов, применяемых в скотоводстве для генетического маркирования и

5 контроля происхождения племенных животных, Целью изобретения является увеличение выхода реагентов.

Для этого иммунную сыворотку, содержащую антитела к нескольким антигенам в титре 1:8 или вьппе, абсорбируют раздельно по фракциям соответственно их специфичности к антигенам, используя эритроциты свежевзятой крови, затем каждую абсорбированную фракцию элюи . руют 3-4 мин при 59-60 С в центрифуж-.. ных стаканах объемом 0 75-1,0 л и по.— лучают реагент. !р

Пример, Изоиммунная сыворотка, полученная от быка 285) в объеме 3 л, содержит антитела к антигенам Х, Х и W в титрах 1:8, 1:8 и 1:16 соответственно. При обработке сыворотки на центрифугах $-60 и К-70 используют свежую цитратную кровь забиваемых на ь мясокомбинатах быков с установленными до убоя антигенами групп крови.

Антитело к антигену Х абсорбируют 30 путем смешивания сыворотки с равным объемом отмытых эритроцитов животных, имеющим антиген Х при отсутствии антигенов I2 и W. Через 10 мин смесь центрифугируют в течение 10-12 мин, сыворотку отсасывают, осадок эритроцитов 5-кратно промывают физиологи=. ческим раствором.

К осадку эритроцитов после промы-, вания добавляют равный объем подогрео того до 54-56 С физиологического раствора хлористого натра. Компоненты смешивают, стаканы с суспензией переносят в водяную баню с температурой ,59-60 С. По достижении температуры внутри стаканов 59-60 С суспензию выдерживают в бане 3-4 мин, помешивая мешалкой, затем без промедления .центрифугируют 5-6 мин при 30004000 об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают и получают реагент к анти" гену Х в объеме 2,9 л.

Затем сыворотку абсорбируют эритроцитами животных, имеющих антиген

Ж при отсутствии антигенов I и Х .

После центрифугирования смеси сыворотку отсасывают и получают из нее реагент к антигену Хр (2,9 л). Фиксированные на эритроцитах антитела элюируют описанным приемом и попучают реагент к антигену W (2,9 л).

Б результате из сыворотки получают

3 реагента: Х 2 — абсорбцией, Х и

W — элюцией. Реагент их элюата пред— ставляет собой светлую или слегка розоватую в толстом слое опалесцирую щую жидкость, содержащую специфические антитела к тому антигену, с помощью которого они сорбированы. Ðåàгенты из элюатов испытывают на специфичность и активность в параллельных гемолитических тестах с эталонами на образцах крови разных пород скота.

Фрагмент гемолитического теста на образцах крови черно-пестрого скота представлен в таблице (гемолиз полный обозначен цифрой 4, частичныйцифрами 1-3, отсутствие гемолиза— точкой).

Как видно из таблицы, по специфичности и активности реагенты, изготовленные из элюатов, соответствуют эталонным реагентам.

Формула изобретения

Способ получения реагентов для определения наследственных антигенов групп крови животных, включающий получение от животных изоиммунных сывороток с последующим1выделением из них абсорбцией и элюцией реагентов, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода деленого продукта, абсорбцию проводят раздельно по фракциям соответственно их специфичности к антигенам, а элюцию каждой фракции осуществляют при 5950 С в течение 3-4 мин.

1405755

ВФ и/и

Образцы крови

Реакция гемолиза

Реагент Х

Реагент W

Наличие антигена

Элюат

Элюат

Эталон

Эталон разведенный разведенный не не разверазве1:4 1:8

1:2 1:4 1:8

1:2 денный денный

4 4

4 3

18

4 3 2

4 4 1

К, М 4

32

4 4

3 1

Составитель И.Тареева

Техред М.Дидык Корректор Г.Решетник

Редактор М,Келемеш

Заказ 3122/3

Тирам 519 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета .СССР по делам изобретений и.открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое .предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 х 4

Х2, М 4

4 4 1

4 4 2

4 4

4 4