Способ получения производных силибинина

 

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к способу получения производных силибинина формулы О ,СНг-0-СО-А 1-СООМ ОСНз о 0-СО-А1Н-СООМ где Alk - алкиленовый остаток с 1-4 атомами С. и М- Н или атом щелочного металла, которые используются в медицине . Получение целевого соединения ведут взаимодействием 1 мае.ч. силибинина в 1-2 мае.ч. пиридина с 1- 3 мае.ч. соответствующего ангидрида дикарбоновой кислоты {перемешивание) при 40-50 С последующим добавлением этанола до образования гомогенно( смеси. Затем при интенсивном перемешивании постепенно добавляют воду, ,. при этом имеющиеся сложные эфиры гидролизуются до ароматически связанных ОН-групп и после окончания гидролиза реакционную массу разбавляют этилацетатом, промьгоают подкисленной до рН 1,5-2,4 водой, насьпценной этилацетатом. Полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатьшают этанолом , выделяют соединения формулы

Союз СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН списочник изобретения

"СО A)k-C00g (?)

0Н 0

-А1К- ÎÎÈ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3985401/23-04 (22) 21.11.85

31) P 3442639

32) 22 ° 11.84 (33) DE (46) 07.11.88.Бюл. Р 41 (71) Др.Мадаус унд Ко (DE) (72) Райнхард Браатц, Клаус Герлер, Гюнтер Хальбах, Хартвиг Зойке и Карлхайнц Шмидт (DE) (53) 547.841.07 (088.8) (56) Патент ФРГ N 1923082, кл.12 q 24, опублик. 1974.

Выложенная заявка ФРГ N 3225688, кл. С 07 D 407/02, опублик,02.02.84.

Вейганд-Хильгентаг, Методы экспе»:.: римента в органической химии, Химия. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

СИЛИБИНИНА (57) Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к способу получения производных силибинина формулы

„„SU „„1436875 А 3

1511 4 С 07 D 407/02 // А 6) К 31/335 где Alk — алкиленовый остаток с 1-4 атомами С.и М- Н или атом щелочного металла, которые используются в медицине. Получение целевого соединения ведут взаимодействием 1 мас.ч. силибинина в 1-2 мас.ч. пиридина с 13 мас.ч. соответствующего ангидрида дикарбоновой кислоты (перемешивание) о при 40-50 С последующим добавлением этанола до образования гомогенного, смеси. Затем прн интенсивном перемешивании постепенно добавляют воду, при этом имеющиеся сложные эфиры гидролизуются до ароматически связанных

ОН-групп и после окончания гидролиза реакционную массу разбавляют этилацетатом, промывают подкисленной до рН 1,5-2,4 водой, насыщенной этилацетатом. Полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатывают этанолом, выделяют соединения формулы (I),ãäå М вЂ” Н, и/или действием спиртового раствора гидроокиси щелочного металла переводят в соль. 1 табл.

1436875

Изобретение относится к способу получения новых производных силибинина, которые обладают фармакологической активностью и эффективны при лечении цирроза печени и токсических и метаболических поражений печени, а также оказывают фармакологическое действие при лечении ожоговых ранений и при отравлении грибами. 10

Цель изобретения — получение но "a вых соединений с ценными биологическими активными свойствами.

Силибин, ранее известный как

Silymarin 1,являющийся ценным лекар- 15 ственным препаратом для лечения заболевания печени, состоит из.двух изомеров: силибинина и изосилибина.

При терапевтическом применении силибина возникают трудности, связан- 20 ные с тем, что он практически не растворяется в воде, и поэтому на основе его нельзя приготовить силибинсодержащие растворы для инъекций или препараты, для которых необходимым условием является определенная растворимость в воде.

Описаны производные силибина, обладающие некоторой растворимостью в воде. Однако в этом случае имеет мес- 30 то очень сложная смесь полуэфирав ян.— тарной кислоты. Эта смесь является потому такой сложной, что у силибина.имеется пять гидроксильных групп, которые могут этерифицироваться е КроМе тО)5

ro, силибин является смесью двух указанных изомеров положения, а используемая для этерификации янтарная кислота является дикарбоновой кислотой, которая может образовывать как монотак и диэфиры, Для фармацевтических . целей продукт, состоящий из большого числа самых различных неидентифицированиых соединений, является непригодным, 45

Данный способ позволяет получить подходящие для фармацевтических целей водорастворимые производные силибинина, которые можно было бы точно идентифицировать как индивидуаль - 0 ные химйческие соединения.;

СилибининЬвые производные определенных алкановых и алкиленовых дикарбоновых кислот удовлетворяют этим требованиям. 55

Пример 1, Получение силибинина, не содержащего изосилибинин.

Суспензию 500 г с содержанием силимарина около 70Х при соотношении изомеров силибин:силидианин:силикристин 3:1:1, причем силибин содержит около 1/3 иэосилибинина в 2 кг метанола, что соответствует 2,53 л, нагревают при перемешивании в течение 15 мин до кипения ° Иэ полученного таким образом раствора спустя это время уже может выпадать в осадок некоторое количество силибинина. После этого отгоняют в вакууме 0,751,25 кг (0,96-1,58 л) метанола и остаток оставляют стоять при комнатной температуре в течение )0-28 дней.

Выпадающий в осадок силибинин отфильтровывают и дважды промывают холодным метанолом порциями по 50 мл.

После высушивания при 40 С в вакууме полученный сырой силибинин подвергают дальнейшей очистке следующим образом.

60 r сырого силибинина растворяют при нагревании в 3 л технического уксусноэтилового эфира, после чего смешивают раствор с 20 r активированного угля и кипятят смесь при перемешивании в течение 2 ч с обратным холодильником. Затем ее фильтруют до получения прозрачного раствора, котоо рый упаривают при 50 С и пониженном давлении до примерно 250 мл. Концентрат перемешивают в течение 15 мин с помошью прибора ультратурракса И при перемешивании добавляют к нему 25 мл метанола, после чего смесь оставляют стоять на ночь при комнатной температуре. Перед отфильтрованием на нутче выпадающего при этом осадка силиби. нина смесь еще раз перемешивают в течение 5 мин с помощью ультратурракса. Полученный на нутче осадок дважлы промывают уксусноэтиловым эфиром порциями по 50 мл.и высушивают в течение ночи в вакуумном сушильном о шкафу при 40 С. Затем полученный продукт измельчают и продолжают сушить в вышеуказанных условиях в течение еще 48 ч.

Пример 2. Получение силибинин-С-2,З-дигидросукцината.

50 г силибинина растворяют при о

45 С в 70 мл пиридина, добавляют к раствору 50 r ангидрида янтарной кислоты, перемешивают смесь в течение примерно 8 ч при 45 С, добавляют к ней 30 мл этанола и продолжают перемешивание до образования гомогенной смеси. Затем при интенсивном перемешивании добавляют к ней для омыления

1436875 фениловых эфиров в течение примерно

30 мин 60 мл воды. После перемешивания в течение примерно часа при а

30 С фениловые эфиры количественно гидролизуются. Полноту гидролиза контролируют с помощью высокопроизводи-; тельной жидкостной хроматографии.

Гидролиз прекращают, быстро добавляя к смеси 1,7 л уксусноэтилового эфира.

Для отделения избытка янтарной кислоты и пиридина разбавленный уксусноэтиловым эфиром реакционный раствор дважды подвергают экстракции водой порциями по 5 л, насыщенной уксусноэтиловым эфиром и имеющей рН

1,85 (подкисление до этого рН осуществляется с помощью разбавленного водного раствора соляной кислоты).

Зкбтракция осуществляется противотоком. При этом насыщенную уксусноэтиловым эфиром подкисленную промывную воду подают с помощью насоса в циркуляционном контуре навстречу по отношению к разбавленному реакционному. раствору и поддерживают путем добавления разбавленной соляной кислоты рН 1,85 до тех пор, пока это значение его после пропускания уксусноэтилового эфира не остается постоянным.

Затем уксусноэтиловую фазу для извлечение из нее избытка соляной,. кислоты дв ажды подв ергают экстр акции противотоком водой порциями по 3,4 л, насыщенной уксусноэтиловым эфиром.

Как только рН промывной воды становится больше 4,5, органическую фазу . количественно отделяют, упаривают при о

40-50 С в вакууме до 1/12 первоначального объема (0,2 л) и разбавляют в 125 мл зтанола.

Целевое соединение получают путем переосаждения из смеси этанола и воо ды и высушивания при 50 С в вакумме в течение 15 ч.

Для получения пробы для анализа целевое соединение трижды переосаждают из смеси этанола и воды и вью сушивают при 50 С в вакууме в течение 15 ч.

На FD-масс-спектре имеется пик, соответствующий ожидаемой молекуляр ной массе 682.

На ИК-спектре в области СО-валентной частоты имеются две перекрывающи" еся линии, причем одна из них, как это имеет место в случае силибинина относится к карбонильной функциональной группе пиронового кольца при длине волны 1635 см . Вторая линия име5 ет длину волны 1730 см и о носится к обоим эфирным карбонильным Функциональным группам. (Н-ЯИР-спектр подтверждает ° что в ходе реакции произошла двукратная эте1р рификация. Так, полученное путем интегрирования соотношение ароматических протонов и протонов метилена ос" татка янтарной кислоты (м.д. в районе 5,9-7,1) равна 8;8 ° Отношение

15 этих протонов метиленовой группы (м.д, 2,6) к протонам метила метокси-группы (м.д. 3,8) равно 8:3, та" ким образом, согласуется с вьш:еприведенным значением.

20 Химические сдвиги, обнаруженные в

13 процессе С-исследований также свидетельствуют об этерификации обеих спиртовых ОН-групп, так как химические сдвиги сильнее всего изменяются у атома С1 и соседних атомах углерора Cl — C14 а также у а-.ом

Рассчитано,7: С 58,07; Н 4,43;

О 3?,50.

З Ьо 16

3Р Найдейо,X: С 58,05; Н 4,5?;

О 37,311.

Пример 3. Получение динатриевой соли силибинин-С-2 -,3-дигидросукцината.

К полученному в соответствии с примером 2 этанольному раствору добавляют по каплям при перемешиваО нии и внешнем охлаждении до 5-9 С

6Х-ный этанольный раствор едкого нат4р ра в количестве, соответствующему определенному аналитически содержанию твердого вещества в указанном растворе, перемешивают суспензию в течение еще часа при комнатной тем45 пературе, отсасывают выпадающий осадок бежевого цвета, суспендируют его дважды (каждый раз в течение 510 мин) с помощью турракса в 150 мл этанола и снова отсасывают. Для уда5О ления остатков уксусноэтилового эфира продукт затем суспендируют в течение 14 ч при комнатной температуре в 280 мл этанола, снова отсасывают, промывают 70 мл этанола и высушивао

55 ют в течение 15 ч при 40-45 С в вакуумном сушильном шкафу. После этого предварительно высушенный продукт измельчают, проссеивакт до размера зерна менее 0,2 мм и сушат в течение

1436875

0 Со CH2- COOH

ОСН3

0Н 0- Н -СН; СООР ()Н 0 еще 48 ч при 40-45 С в вакууме. В результате получают 52 г целевого соединения (выход 693), Полученное целевое соединение не имеет определенной температурь плавления. Оно начинает спекаться при темо пературе около 80 С, а при температу0 ре около lOO С плавится с образованием лузырей. 10

УФ-спектр в метаноле: h«« =

288 нм; .f = 1,73 ° 10

50 г силибинина при 45 С растворяют в lOO мл пиридина, добавляют . 150 r ангидрида янтарной кислоты, смесь перемешивают примерно 8 ч 25 при 45 С, добавляют 40 мл этанола и перемешивают до тек пор, пока не образуется гамогенная смесь Р Затем.при интенсивном перемешивании для омыления сложных фениловых эфиров в течение примерно 30 мин добавляют 60 мл, воды. Спустя примерно 2 ч перемешиваO ния при 30 С сложные фениловые эфиры количественна гидролизуются. Полнату гидролиза определяют с помощью !

ТСХ высокого давления. Гидрализ прекращают быстрым добавлением к полученной реакционной смеси 1,7 л этилацетата.

Дальнейшую обработку осуществляют ®О как описано в примере 2.

Физико-химические свойства этого соединения идентичны соединениям примера 2.

Соединения формулы (I), в частносIE ти динатриевая соль силибинин-С-2,3дигидросукцината, оказывают явно выраженное фармакологическое действие при лечении ожоговых ранений. Кроме того, несмотря на то, что в результате описанной обработки эти соединения являются производными силибинина, они полностью сохраняют фармакологическую активность силибинина, являющегося известным средством для лечения заболеваний печени. Осабен55 но эффективны они при лечении цирроза.печени и токсических и метаболитических поражений печени.

Молекулярный вес целевого соединения равен 726,56. Она представляет собой микракристаллический порошок светло-бежевого цвета без специфического запаха и с солоноватым вкусом.

Оно легко растворимо в воде и плохо растворяется в этаноле и ацетоне.

В диэтилавом эфире и хлороформе оно практически нерастваримо.

H p и м е р 4. Получение силибинин-С-2,3-дигидросукцината

Соединения формулы (Т) обладают, кроме того, необыкновенно высокой активностью при лечении отравлений грибами, в особенности очень опасного отравления бледной поганкой (Amanita

phalloides). С их помощью можно также с успехом лечить отравления галогенированными органическими растворителями, такими как четыреххлористый углерод, трихлорэтилен, хлороформ и т.п, В случае профилактического применения соединения формулы (I) предупреждают перечисленные заболевания.

Лекарственные препараты, содержащие указанные соединения, в большинстве случаев применяются систематически, например, в виде пилюль, капсул, растворов, в композиции с обычными носителями и, при желании, с обычными вспомогательными добавками. Днев-ная доза для взрослого человека составляет примерно 50-500 мг в зависимости от состояния пациента и тяжести заболевания.

Опыты с динатриевой солью силибинин-С-2,3-дигидросукцината (силисук-на) .

Появляющиеся при ожогах симптомы вызываются, в частности, интоксикацией организма продуктами термического некроза тканей. То, что за эта ответственны аутоинтоксикативные процессы после тяжелых ожогов кожи, было доказано многочисленными способами. Особенно убедительными являются опыты по перекрестной трансплантации обожженной и необожженной

1436875 кожи здоровым животным и соответственно животным с ожогами. При этом установлено, что здоровые животные с пересаженной им обожженной кожейt гибли, тогда как на животных с ожогами пересаженная здоровая кожа не оказывала никакого вредного действия.

При ожогах кожи выделяются в свобод-. ном виде или вновь образуются целый ряд различных химических соединений, Несмотря на их большое число, удалось установить структуру некоторых их этих соединений..

В частности, удалось показать, что !5 образующиеся при ожогах кожи соединения аналогичны соединениям, образующимся при переокислении липидов. Имеет место также аналогия в отношении токсического действия, 20 этих соединений. Особенно поразительным является факт образования обладающих токсическими свойствами насыщенных и ненасыщенных альдегидов с различной длиной цепи вследствие пер- ?5 окисления липидов и термического поражения кожи. Поэтому можно предположить, что ожоги приводят к окислительному повреждению клеточных структур. 30

Поэтому были исследованы аутооксидативные изменения мембранных липидов, являющиеся следствием аутоинтоксикации после тяжелых ожогов.

Исследовались, в частности, изменения состава жирных кислот мембранных липидов. Кроме того, определялось, в какой степени предлагаемые производные силибина оказывают влияние на указанные изменения состава жирных 40 кислот мембранных липидов.

Изменения состава жирных кислот мембранных липидов в результате тяжелых ожогов.

Самцы крыс Nistar со средним весом 360 г,, разделенные на три группы, получали достаточное количество воды и сухого ко ма. До начала опытов комнатная температура равнялась о

22 С. После начала опытов животные содержались при 30 C.

-Ожоги кожи наносились с помощью медного штемпеля поверхностью 20 см

2 при постоянном давлении и температуО ре 250 С. Для того, чтобы предотвратить 55 термическое поражение расположенных глубже органов, кожу животных натягивали на охлаждаемый воздухом шпатель. Таким образом можно очень точно наносить ожоговые травмы, время извлечения от которых оказывается строго постоянным.

Перед началом проведения опытов животным давали наркоз (50 мг/ке нембутала). После нанесения ожога для предупреждения шока им внутрипарентерально вводили 20 мл раствора лактата Рингера.

Все животные были разделены на

5 групп: а) нормальная группа: животные, которым не наносили ожогов; б) контрольная группа Х: животные, которых лечили только силибинином (в течение 6 дней вводилось

75,5 мг силн-сук-на); в) контрольная группа II: мнимо оперированные животные; г) животные которым были нанесены ожоги: 25Х 250 С, 20 с, 0,5 ат; е) группа испытуемых животных: животные, которым в течение 6 дней интрапарентерально вводили 75,5 мг сили-сук-на, начиная sa день до нанесения ожогов.

Для выделения микросом животных после окончания проведения опытов обескровливали под наркозом. Затем у них извлекали печень, взвешивали. ее и сразу погружали в охлаждаемую льдом изолирующую среду (0,25 моль

- сахарозы, 1 ммоль ЭДТА, !О ммоль

Трис НС1, рН 7,2), Печень разрезали на кусочки и гомогенизировали в указанной среде. С помощью дифференциального центрифугирования микросомную фракцию гранулировали. Микросомы вновь суспендировали и подвергали центрифугированию, после чего готовили суспензию, 1 мл которой соответствовал 1 г ткани печени.

Липиды определяли по методу

J,Folch (простой метод выделения и очистки суммарного содержания липидов из животных тканей, модифицированному Bligh u Dyer (ускоренный метод экстракции и очистки суммарного количества липидов).

Экстрагированные микросомные липи-, ды омыляли едким натром. Свободные жирные кислоты этерифицировали путем добавки к смеси метанольного ра" створа BF . После отгонки метанола и удаления гидрофильных побочных продуктов количественно определяли эфиры жирных кислот.

14368

Как видно иэ таблицы l,ëå÷åíèå производным силибинина формы (I) в случае здоровых (контрольных) животных не приводит к существенным изменениям по сравнению с животными, не получав50 шими препарата. В случае же животньи, которым были нанесены ожоги, лечение приводит к полному прекращению снижения ненасыщенных жирных кислот.

Следовательно, ожоговые травмы приводят к изменению состава жирных кислот в микросомных липидах. Можно предположить, что это связано с окислительным поражением мембран, У животных, которым ожоги не наносились, не было обнаружено никаких заметньи изменений состава жирных кислот. Таким образом, наркоз и незначительное оперативное вмешательство не приводят к изменению микросомных липидов. Поэтому для дальнейшего сравнения данные по нормальной и контрольной группам животных 10 объединяли в одну контрольную группу.

Сравнение здоровых животных и животных, которым были нанесены ожоги, относительно состава микросомных 15 жирных кислот показало значительный .. сдвиг от ненасыщенньи к насыщенным -, жирным кислотам.

При распределении жирных кислот в микросомных липидах печени по из- 20 менениям, вызванным термически поражением, видно, что содержание пальмитиновой кислоты (С l 6) возрастает после нанесения ожогов с 25,1 до

34,4 от общего содержания жирных 25 кислот. В случае стеариновой кислоты (С18) содержание ее у животных, которым были нанесены ожоги,-составляет

46,8% по сравнению с 13,2 . у животных из контрольной группы. В случае 30 олеиновой кислоты (С18:1) наблюда лось незначительное снижение содержания. Содержание линолевой кисло-! ты (C18:2) после нанесения: ожо- гов снизилось до примерно 1/3 по сравнению с исходным количеством ° И в случае арахидоновой кис" лоты (С20:4) после нанесения ожогов было обнаружено только Зl ее по сравнению с исходным количеством. 40

Влияние сили-сук-на на содержание жирных кислот у здоровьи животных и животньи, которым наносились ожоги, показано в таблице.

75 1О

Это следуег, в частности, иэ резкого снижения содержания ненасыщенных жирных кислот с несколькими двойными связями.

Используемые производные силибинина формулы (I) могут ингибировать оксидативное разрушение клеток, и они таким образом,с успехом могут использоваться для нарушения механизма о. сидативного разрушения после тяжельи ожогов °

Аутотоксические реакции после тяжелых ожогов могут привести в частности, к оксидативному поражению клеток. Поэтому были поставлены опыты, в которых изучалось, какое действие оказывают стандартизированные термические травмы на индуцированный PHA бластогенез Т-лимфоцитов селезенки и периферийной крови крыс.

Изучалось также то действие, которое оказывает предлагаемые производные силибинина такого рода лимфоцитные функциональные поражения после тяжелых ожогов.

Действие стандартизированной термической травмы на индуцированный

РНА бластогенеэ Т-лимфоцитов селезенки и периферийной крови крыс.

На кожу спины крыс Wistar с помощью медного штемпеля наносили ожоги описанным способом ° В качестве . контрольной группы служили животные с мнимыми ожогами, с которыми проводили те же манипуляции, но без нанесения ожогов. Через 2,4,7 и 9 дней у животных с нанесенными ожогами, а также у контрольных животньи под эфирным наркозом извлекали селезенку и обескровливали йх.

Гепаринизированную кровь для выделения из нее лимфоцитов наносили слоями на раствор Ficoll-Hypaque (плотность 1,077). Затем осуществляли центрифугирование и полученные лимфоциты испытывали на жизненность с помощью трипана голубого. Для выделения лимфоцитов из селезенки последнюю измельчали, протирали через сито и с помощью лизисного раствора отделяли от сопутствующих эритроцитов по G-ay.

После этого в целях уменьшения содержания в суспензии одноядерных кле- ток в результате адгезии на стенках сосуда (5 ) клеточную смесь инкубировали в течение ЗО мин в сосуде

l в присутствии 5%-ной инактивирован1436875

12 ной термическим способом сыворотки эмбрионального теленка. Для культиви рования клетки помещали в плоскодонные пластины для микротитрования и добавляли к ним 20,-ную сыворотку эмбрионального теленка. Таким образом, путем измерения внедрения

- Н-тимидина (2 Ci,(ìèêðoìoëü) н DNA клеток определялся спонтанный блас- 10 тогенез.

В ходе предварительных опытов было установлено, что оптимальная митогенная стимуляция наблюдается при

РНА-концентрации (митоген-фитемаглютинин) 5 мкг/мл. В ходе этих опытов по оптимизации клеточной тестовой системы было также установлено, что максимальная стимуляция повторного синтеза DNA происходит через 72 ч. 20

Кроме того, было установлено, что оптимальная концентрация сыворотки эмбрионального теленка, при которой наблюдается наивысшая стимуляция, равна 20 .. 25

Спонтанный бластогенез определя9 ли путем измерения внедрения Н-тимидина в DNA клеток. Клетки отбирались через 18 ч после добавления Н-тимидина, причем -нулевая точка З0 для 18 ч совпадает с моментом максимальной стимуляции.

Для определения влияния предлагаемых производных силибинина группу крыс подвергали лечению производным силибинина, С этой целью животным раз в день впрыскивали 75,5 мг силисук-на. Лечение продолжалось, начиная с дня нанесения ожога и до дня извлечения органа (максимум до девя- 40 того дня) .

Для оценки результатов, полученных в опытах с контрольными животными, тем из них, которым не были нанесены ожоги, и подвергавшихся лечению 45 силн-сук-на, был рассчитан индекс < стимуляции.. Его численное значение. представляет собой частное от деления средних значений стимулированных и контрольных проб. Из полученного таким образом индекса стимуляции для каждого подопытного животного рассчитывался средний индекс стимуляции для группы животных.

Полученные результаты выражены через этот индекс Sl.

При изучении влияния использовавшегося силн-сук-на на бластогенез лимфоцитов видно, что в случае жинотных с нанесенными ожогами пониженная стимулируемость клеток янно увеличиналась в результате воздействия силибинина.

Уже на второй день у животных, ко" торым вводился сили-сук-на, наблюдалось в 10 раз более высокая чувствительность лимфоцитов крови по отношению к PHA. Ha четвертый день после нанесения травмы у животных,подвергав-." шихся лечению, величина индекса стимуляции для лимфоцитов крови равнялась

8, тогда как соответствующая величина для животных, не подвергавшихся лечению,. равнялась 1,5 °

В случае клеток иэ селезенки все индексы стимуляции у жинотных с нанесенными ожогами и не подвергавшихся лечению значительно меньше 1.

Введение животным силибинина приводит к существенному улучшению во все дни, причем максимум наблюдается на седьмой день после нанесения травмы.

Были проведены также сравнительные опыты, которые показали, что у здоровых животных сили-сук-на не приводит к каким-либо существенным изменениям стимулируемости при пндуцированном PHA бластогенезе T-лимфоцитов из селезенки и периферийной крови.

Таким образом, использовавшийся в соответствии с изобретением силибинин существенно стимулирует бластогенез лимфоцитов животных с нанесенными ожогами.

Кроме того, было установлено, что у животных, получавших лечение производными силибинина, общий катаболизм был меньше,так как животные после нанесенной термической травмы снова быстро прибавляли н весе.

Отравление грибами.

Отравления, вызываемые бледной поганкой относятся к тяжелейшим отравлениям, известным в медицине. Хотя отравления, вызываемые бледной поган- кой, составляют всего 10-30Х от всех отравлений грибами, отравление именно этим грибом вследствие его опасности уже издавна вызывает наибольший интерес медиков. В ранних публикациях приведены данные по смертельному исходу от этого отравления, который составляет 30-50 . Благодаря современной интенсивной медицине, по данным статистических исследований

)436875

FL0ERSHEIM и других на 205 пациентах, это число снизилось в среднем до 22,4Х.

Яд бледной поганки, аманитин, уже в количестве 7 мг может оказаться смертельным для взрослого человека.

Это количество содержится примерно в

50 г свежего гриба.

После ряда многообещающих опытов )p

:на животных активное вещество сили1 . сук-на было одобрено в качестве пре1 парата для лечения отравлений, вызы-! ваемых бледной поганкой.

28 пациентам, получившим отравле ния бледной поганкой, помимо обычных принимаемых в этом случае терапевтиiческих мер, давали дополнительно сили-сук-на. Из этих 28 пациентов

1 умер только один, который в целях 20 самоубийства принял большие количе, ства этого ядовитого гриба. Этот результат свидетельствует об огромном ,прогрессе в этой области терапии.

Г

Соединения формулы (I) в противо- 25 положность известным силимаринам

: (силимарины Х-.IV: в виде смеси или в виде индивидуальных соединений), обладают следующими преимуществами, Известные силимарины относительно плохо растворимы в воде и поэтогде Alk имеет указанные значения, о

40 при перемешивании при 40-50 С с .последующим добавлением этанола до образования гомогенной смеси, в которую при интенсивном перемешивании постепенно добавляют воду, при этом

45 имеющиеся сложные эфиры гидролизуются до ароматически связанных ОНгрупп, и после окончания гидролиза реакционную массу разбавляют этилацетатом, промывают подкисленной до рН 1,5-2,5 водой, насыщенной этилацетатом, полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатывают этанолом, выделяют соединения формулы (Х}, где M — водород, и/или дейст55 вием спиртового раствора гидроокисй щелочного металла переводят в соль. 3 (II) он

Н0 оно (III) где Alk — алкиленовый остаток с 1—

4 атомами углерода;

М вЂ” водород или щелочный металл, отличающийся тем, что

1 мас.ч. силибинина формулы растворяют в 1-2 мас.ч. пиридина и подвергают взаимодействию с

3 мас,ч. ангидрида дикарбоновой кислоты формулы му только е трудом ресорбируются. Поэтому невозможно очень быстро установить значения высокого уровня крови, как это необходимо для борьбы с острыми заболеваниями. Силимарины поэтому непригодны для борьбы с явлениями острой интоксикации, как грибные интоксикации или сводящиеся к ожогам интоксикации.

В противоположность этому, соединения формулы I значительно лучше растворимы в воде, чем силимарины.

Это означает, что они могут добавляться к водным препаратам для инъекций и вливаний, которые при их приеме (введении) тотчас ресорби— руются и дают высокие величины уровня в крови и поэтому особенно пригодны в особенности для борьбы с острыми заболеваниями, как грибные интоксикации и интоксикации после ожогов. Соединения формулы I относятся к категории малотоксичных LD для крыс боль" ше 2500 мг/кг. формула и з обретения

Способ получения производных силибинина общей формулы

1436875 16 (l

С) 6 С18 С18: 1 C18: 2 С20: 4, Животные

Здоровые (контрольная группа I) 8,9X т1,!

29,8Х

6,2

16,2Х

+4,9

9,6Х

+3,3

37, 2Х

4-12,3

25,4X

+6,0

С нанесенными ожогами

7,8Х 1,0

I1,4Х

«5,3

37,5Х

+8,6

18,0X

19,1

Составитель И,Дьяченко

Редактор А.Ворович Техред N.Дипык Корректор И.Муска

Заказ 5663/59 Тираж 370 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4