Штамм клубеньковых бактерий rнizовiuм lеguмinоsаruм для производства бактериального удобрения под чечевицу
Изобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожая бобовых культур) и может быть использовано для производства удобрения нитрагина под чечевицу. Целью изобретения является получение нового более эффективного штамма клубеньковых бгистерий, 11овьш1ающего урожай зерна и содержание в нем белка. Штамм клубеньковых бактерий Rhizobium legu- rainosarum 724 выделен из клубеньков чечевицы сорта Петровская 4/105. Штамм клубеньковых бактерий чечевицы Rhizobium leguminosarxim(Lens) 724 депонирован и хранится в коллекции ВНИИСХМ под № 724. При инокуляции чечевицы штаммом Rhizobium legumino- sarum(Lens) 724 урожай зеленой массы повышается в сравнении с вариантом, инокулированным штаммом R.leguminoea- rum 250 а, на 0,4 г/ сосуд (30,8%) и содержание общего азота в растениях на 0,31% (вегетационный опыт), в сравнении с неинокулированной рязб-- биямн чечевицей урожай зерна в полевых опытах повьппается в среднем на 9,5 ц/га (79,8%) и содержание белка в зерне на 0,9%. 2 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU„„446132 A 1
Ш 4. С 05 F 11/08, С 12 N 1/20// (С 12 N 1/20, С 12 R 1:41) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21 ) 4144180/30-13 (22) 06.11 ° 86 (46) 23.12.88. Бюл. В 47 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии и Всесоюзный институт растениеводства (72) А.Т.Новикова, В.Л.Князева, Н.Г.Орьиценко, А.П.Кожемяков, Т,А.Волузнева и В.С.Архипов . (53) 576.8:631 84(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
У 489750, кл. С 05 F 11/08, 1976. (54) ШТАИМ КЛУБЕНЬКОВЫХ SAKTEPHA
RHIZ0BIUM LEGUMIN0SARUM ДПЯ ПРОИЗВОДСТВА БАКТЕРИАЛЬНОГО УДОБРЕНИЯ ПОД .
ЧЕЧЕВИЦУ. (57) Изобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожая бобовых культур и может быть использовано для производства удобрения нитрагина под чечевицу. Целью изобретения является получение нового более эффективного штамма клубеньковых бактерий, яовьапающего урожай зерна и содержание s нем белка. Штамм клубеньковых бактерий Rhizobium leguminosarum 724 выделен из клубеньков чечевицы сорта Петровская 4/105.
Штамм клубеньковых бактерий чечевицы
Rhizobium leguminosarum(Lens) 724 депонирован и хранится в коллекции
ВНИИСХИ под У 724. При инокуляции чечевицы штаммом Rhizobium leguminosarum(Lens) 724 урожай зеленой массы повышается в сравнении с вариантом, инокулированным штаммом R.leguminosarum 250 а, на 0,4 r/ сосуд (30,8X) с и содержание общего азота в растение ях на 0,31Х. (вегетационный опыт), в сравнении с неинокулированной ривб»биями чечевицей урожай зерна в полевых опытах повышается в среднем на
9,5 ц/ra (79,8X) и содержание белка в зерне на 0,9Х. 2 табл.
1446132
Изобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожая бобовых культур и может быть использовано для производства бактери5 ального удобрения нитрагина под чечевицу.
Целью изобретения является получение нового более эффективного штам- ма клубеньковых бактерий, повышающе- 10
ro урожай зерна чечевицы и содержание в нем белка.
Штамм клубеньковых бактерий Rh.
leguminosarum(Lens) 724 выделен из клубеньков чечевицы сорта Петровская . 4/105, произраставшей на обыкновенном черноземе. . Идентифицирован по определителю
Берги.
Штамм клубеньковых бактерий Rh, leguminosarum(Lens) 724 депонирован и хранится в коллекции ВНИИСХМ под
)) 724.
Культурально-морфологические свойства штамма Rh.leg.(Lens) ВНИИСХМ
9 724.
Расчет на следующих питательных средах.
Гороховый агар, г/л . горох 100,0; сахароза 20,0; агар-агар 20,0; рН среды 6,8-7,0. Колонии на гороховом агаре появляются на третьи сутки, однотипные, круглые, беловатые, сильновыпуклые, 2-2,5 мм в диаметре.
Бактерии имеют форму палочек, в молодом возрасте подвижные. Величина клеток 2-суточной культуры на гороховом агаре 1,2-2,5» 0,6-0,9 мк.
Перитрихи. Бактероиды имеют булаВовидную форму Штрих на гороховом 40 агаре — обильный, беловатый, слабовыпуклый, слизистый.
Люпиновый агар: г/л: К НРО4 0,5;
КН РО4 0,5; MgSO 7H O О, ; ИаС1
0,2; CaS04 0,1; (NH<) Штрих обильный, беловатый, слабовыпуклый, слизистый, стекающий. Колонии появляются на третьи сутки, одно- 50 типные, круглые, беловатые, выпуклые, 2 5-3,0 мм в диаметре. Маннитно-дрожжевой агар, г/л: маннит )0,0; К НРО 0,4; агар-агар !5,0, рН среды 6,8-7,0. 5S Штрих обильный, бесцветный плос-. кий, слизистый, сильно стекающий. Колонии появляются на третьи сутки, однотипные круглые, беловатые, выпук! 0 2,0 0,1 О, 025 О, 025 0,02 О,1 лые, растекающиеся, 3-3,5 мм в диаметре. Физиолого-биохимические признаки штамма Rh.låguminosàrum(Lens)724. Молоко с лакмусом не пептонизирует, подщелачивает с образованием слизистого кольца на поверхности. Желатину не разжижает. Аэроб. Оптимум температуры 26-28 С. Отношение к углеводам. Растет на средах с углеводами, подкисляя среду. Хорошо развивается на средах с глюкозой, галактозой, рамнозой, кснлозой, менее активно — на средах с мальтозой, сахарозой, лактозой. Клетчатку и крахмал не.усваивает. Отношение к источникам азота. Хорошо растет на средах с азотнокислым натрием, аммонийными солями, тирозином, на МПА не растет. Признаки штамма устойчивы. Штамм не патогенен. Пересевается один раз в 6 мес и хранится на гороховом агаре при 4-5 С. Методика приготовления препарата для проведения инокуляции чечевицы в полевых и вегетационных опытах. Приготовление жидкой посевной культуры. Жидкую культуру выращивают в качалочных колбах и в 5 литровых бутылях в течение 2 сут на среде следующего состава, Я: Гороховый отвар 10,0 Сахар (пищевой) 1,0 (Ын„) So„ 0,05 КН РО 0,05 К НРО ЗН О 0,05 м8804 7н О 0,02 СаСО> 0,1 Водопроводная вода До 100 рН (после стерилизации) 6,8-7,0 Стерилизация при 1,0 ати 30 мин. Титр 5-8 млрд/мл. Посевную культуру используют для приготовления жидкой рабочей культуры в 5-литровых бутылях или ферментаторах на среде следующего состава: Х: Кукурузный экстракт Меласса (NH44 S0< KH,РO, К НРО! ЗН О SgS0Ä 7Н,О СаСО Водопроводная вода До 100,0 14461 рН (после стерилизации) 6,8-7,0 Бутыли и ферментатары засевают посевной культурой клубеньковых бактерий в количестве 5Х. Бутыли встряхивают на качалке в течение 40-48 ч. В ферментаторах бактерии выращивают 18-36 ч при аэрации 0,7-1,5 об/мин под избыточным давлением 0,3-0,5 ати, температуре 28-30 С. Титр не менее о 5,0 млрд/мл. После микробиологического контроля культуральную жидкость из бутылей или ферментаторов (инокулюм) используют для смешивания с торфом, Подготовка торфа. Размолотый низинный торф, нейтрализованный мелом до рН 6,8-7,2 с влажностью 30-40Х в полиэтиленовых пакетах до 200-400 г стерилизуют гамма-облучением при дозе 2,5 Мрад. Стерильный торф в пакетах инокулируют инъекцией смеси:культуральная жидкость + меласса (6Х) из расчета исходного титра бактерий в 25 торфе 0,3-0,5 млрд/г торфа и влажности 45-60Х. Затем пакеты загружают в специальные смесители, при вращении которых перемешивается их содержимое. 30 Культуру в торфе подращивают, выдерживая пакеты 3-5 суток при 15— 20 С, затем пакеты хранятся при 38 С в темном сухом помещении отдельно от ядохимикатов. 35 Характеристика готового продукта. Ризоторфин для чечевицы на предлагаемом штамме представляет по внешнему виду увлажненную сыпучую массу темного цвета без запаха, нераство- 40 римую в воде. Влажность готового препарата 50-55Х. Ризоторфин содержит 4-6 млрд, клубеньковых бактерий на 1 г торфа. Срок годности препарата 6 мес со дня изготовления. Расход 45 препарата 200 г на гектарную норму семян, Инокуляцию семян чечевицы в вегетационных опытах проводят суспензией чистой культуры бактерий, смытой с 5р агара, в полевых опытах - торфяным препаратом — ризоторфином, Препарат на осноВе штамма Rhizobium leguminosarum(Lens)724 для инокуляции чечевицы используют следующим образом. Пример 1. Вегетационные опыты проводят в сосудах с 6 кг дерновоподзолистой почвы с внесением солей 32 4 па прописи Прянишникова, без азата, Повторность опытов 4-кратная. Инокулируют семена штаммами чечевицы сорта Пензенская 14. Результаты вегетацианных опытов приведены в табл.1. Как показывают данные табл.1, бактерии штамма 724 активно фиксируют атмосферный азот в симбиозе с чечевицей, в результате чего урожай зеленой массы растений, бактеризованных этим штаммом, на 53-107Х вьппе, чем у растений без инокуляции, при одновременном увеличении общего азота на 0,34-0,70Х. В итоге общее накопление азота у инокулированных растений в 2,3-2,6 раза вьппе, чем у не" инокулированных. В сравнении с известным штаммом ризобий 250а штамм 724 увеличивает урожай зеленой массы растений на 0,4 г/сосуд (30,8Х) и содержание общего азота в чечевице на 0,31Х. Пример 2. Полевые опыты проводят на черноземе обыкновенном. Площадь делянки 25 м . Повторность 2 опытов 4-кратная. Препарат для проведения инокуляции чечевицы двух сортов Пензенская 14 и Петровская 4/105. ! Результаты полевых опытов приведе ны в табл.2. Как видно из табл.2, штамм R.,leguminosarum(Lens)724 проявил себя эффективным симбнотическим азотфиксатором в полевых условиях, Урожай зерна чечевицы при инокуляции этим штаммом повышается в среднем на 9,5 ц/га или на 79,8Х, содержание белка в зерне на 0,9Х. Таким образом, при инокуляции чечевицы штаммом R.leguminosarum(Lens) 724 урожай зеленой массы повышается в сравнении с инокуляцией штаммом 250а на 0,4 г/сасуд (30,SX) и содержание общего азота в растении на 0,31Х, в сравнении с неинокулированнай чечевицей, урожай зерна повышается в среднем на 9,5 ц/га (79,8X) и содержание белка в зерне на 0 9Х. Формула и з о б р е т е н и я Штамм клубеньковых бактерий Rhizo-, bium leguminosarum(Lens) ВНИИСХМ . Р 724 для производства бактериального удобрения под чечевицу. 1446132 Таблица ! Статистическая обработка Прибавка урожая Вариант ииойЯМЦЗЩ г/сосуд Р, Х НСР у г/сосуд 1 Беэ инокуляЦИИ 1,34 34,8 4,3 0,4 2,6 58,8 2,04 81,6 4,0 1,4 Штамм 724 2 Вез инокуляции 3,5 0,3 l,26 l,3 107,7 1,60 76;9 1,29 2,7 1,4 Штаим 724 1,0 2,3 Штамм 250а Ю В Опыт Вариант инокуляции Таблица 2 Урожай зерна, ц/га Прибавка урожая зерна Содержание бел Статистическая ка в зерне, Х обработка ц/га 7 Ж НСР ц/га Всего 1 Без инокуляции 14,0 23,9 6 1 5,4 Штамм 724 25,6 11,6 82,9 0,7 2 Беэ инокуляции 9,6 4,7 3,2 22,4 йтаим 724 17,2 7,5 1,0 77,3 23,2 11,9 21,4 9,5 79,8 0,9 Составитель А.Kypazoa Техред М.Ходанич Корректор В.Гирняк Редактор К.Гунько,Заказ 6205/29 Тираж 425 Подписное ВНЯКПИ Государственного коиитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР, 113035, Москва, N-35, Раущская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 Без инокуля1цин Штамм 724 Урожай зеленой мас сы, г/сосуд Содержание общего азота в растениях и акопение эота а соуд, мг Прибавка от инокуляции
