2-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензоилметилтио)-5- этоксибензимидазол, обладающий антигипоксической и антирадикальной активностью

 

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензоилметилтио)-5- этоксибензимидазола, обладающего антигипоксической и антирадикальной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание нового вещества указанного класса с широким спектром активностей. Синтез ведут из 2-бромметил-(4-гидрокси-3,5-ди-трет-бутилфенил)кетона и 5-этоксибензимидазолтиола-2 в присутствии триэтиламина в среде бензола при 55 - 60^oC. Выход 90%, т.пл. 151 - 152^oC, брутто-ф-ла C₂₅H₃₂O₃N₂S. Новое соединение не уступает по эффективности аналогу (5-ЭТОБ) по циркуляторной гипоксии, менее активно по асфической гипоксии, более активно, чем антиоксидант ионол, применяемый в больших дозах. Токсичность LD₅₀= 5000 мг/кг. 6 табл.

Изобретение относится к новому производному бензимидазола, а именно к 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензоилметилтио)-5- этоксибензимидазолу формулы обладающему антигипоксической и антирадикальной активностью. Цель изобретения получение нового производного бензимидазола, обладающего улучшенной антигипоксической активностью по сравнению со структурным аналогом, имеющим те же свойства, а также антирадикальной активностью. П р и м е р 1. 2-(3,5-Ди-трет-бутил-4-гидроксибензоилметилтио)-5-этоксибензимидазол (соединение 919). К раствору 1,63 г (0,005 моль) 2-бромметил-(4-гидрокси-3,5-ди-трет-бутилфенил)кетона в 10 мл бензола добавляют 0,97 г (0,005 моль) 5-этоксибензимидазолтиола-2 в 10 мл бензола и 0,5 г (0,005 моль) триэтиламина. Смесь нагревают в течение 30 мин при 55 60^oC и оставляют при комнатной температуре (20±3^oC) на 18 ч. Раствор отфильтровывают, растворитель отгоняют под вакуумом. К остатку добавляют 30 40 мл петролейного эфира и тщательного перемешивают. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают петролейным эфиром. Получают 2 г (90%) 2-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензоилметилтио)-5- этоксибензимидазола в виде белого кристаллического вещества с т.пл. 151 - 152^oC (из водного спирта). Строение полученного соединения подтверждено данными элементного анализа и ИК-спектрами. Найдено, C 67,7;H 7,4; N 6,3; S 7,0. C₂₅H₃₂O₃N₂S. Вычислено, C 68,0; H 7,3; N 6,3; S 7,3. В ИК-спектрах полученного вещества имеются полосы поглощения, ν, см^-1: 3290 (n ОН-группы), 1690 (n C=O-группы), 1640 (n C=N-группы), 1590 (n C=C-группы), 630 (n C-S-группы). Было изучено влияние синтезированного соединения на устойчивость животных к острой гипоксии и формирование радикалов кислорода. П р и м е р 2. Острая гипобарическая гипоксия (ОГБГ). Острая гипобарическая гипоксия моделировалась в проточной барокамере путем "поднятия" животных (мыши-самцы массой 18 22 г) на высоту 11 км, где регистрировалась длительность жизни резервное время (РВ) и доля высокоустойчивых к гипоксии животных (ДВУ) в выработке. Результаты экспериментов обрабатывались статистически. Эффективность соединения 919 выражалась в относительных единицах (%) и по изменению величины ДВУ (D ДВУ=ДВУ_п-ДВУ_к). Полученные данные приведены в табл. 1. П р и м е р 3. Острая гистотоксическая гипоксия (ОГТГ). Моделирование острой гистотоксической гипоксии осуществлялось с помощью внутрибрюшинного введения водного раствора нитропруссида натрия в дозах 20 - 25 мг/мг, которые вызывают 100%-ную гибель мышей на протяжении 15 25 мин после введения. В основе действия этого соединения, содержащего CN-группы, лежит снижение активности ферментов тканевого дыхания, приводящее к нарушению потребления кислорода тканями. Полученные данные обрабатываются статистически и приведены в табл. 2. П р и м е р 4. Острая гемическая гипоксия (ОГеГ). Острая гемическая гипоксия создавалась путем подкожного введения нитрата натрия (NaNO₂) в дозах 250 300 мг/кг, которое вызывало 100%-ную гибель мышей на протяжении 20 30 мин после введения нитрита натрия. Исследуемое соединение, препараты сравнения и растворТвин-80 вводились за 1 ч до моделирования гипоксии (аналогично при ОГБГ и ОГТГ). Полученные результаты обрабатывались статистически и приведены в табл. 3. Результаты проведения экспериментов показали, что исследуемое соединение на моделях системных гипоксий оказывает выраженный противогипоксический эффект, сравнимый с эффектом 5-ЭТОБ, но эффективная доза исследуемого соединения в 4 раза меньше, чем у препарата сравнения (20 и 80 соответственно). П р и м е р 5. Резистентность мозга к гипоксии. Крысам массой 200 220 г (беспородные самцы) под эфирным наркозом производили вживление в сенсомоторную область коры мозга нихромовых электродов. Затем животных обездвиживали дитилином и подключали к аппарату искусственного дыхания. Асфиксическую гипоксию вызывали путем прекращения дыхания на 90, 120, 150 и 180 с, с 10-минутными интервалами между гипоксическими воздействиями. Регистрировали ЭКОГ и ЭКГ. Соединения вводили внутрибрюшинно за 1 ч до начала опыта. Устойчивость мозга к гипоксическому воздействию оценивали по времени исчезновения ЭКОГ после начала аноксии, скорость появления ЭКОГ после включения аппарата искусственного дыхания и общей длительности электрического "молчания" коры мозга. Кроме того, регистрировали количество выживших животных и количество животных, у которых не исчезла ЭКОГ после периода первой аноксии. Полученные данные обрабатывались статистически и приведены в табл. 4. П р и м е р 6. Резистентность мозга к циркуляторной гипоксии. Крысам линии Вистар (самцам массой 180 200 г) производили двухстороннюю окклюзию общих сонных артерий. Соединения вводили внутрибрюшинно за 1 ч до операции в дозах, аналогичных при моделировании асфиксической гипоксии мозга (см. пример 5). Эффективность соединений оценивали по выживаемости животных через 24 ч после ишемии мозга. Показано, что окклюзия сонных артерий приводит к 90% -ной гибели контрольных крыс через сутки после операции. Профилактическое введение ионола несколько повышает устойчивость экспериментальных животных к циркуляторной гипоксии число выживших животных равно 20% (различия недостоверны). Введение соединения 5-ЭТОБ (80 мг/кг) и соединения 919 ( 20 мг/кг) приводит к увеличению числа выживших животных до 40% (различия достоверны по сравнению с контролем P <0,05).-5 моль люминала или 10^-5 моль люцегинина (сенсибилизатора системы ксантин-ксантиноксидаза), добавляли компоненты одной из радикалобразующих систем для запуска реакции. Регистрировали вспышку хемилюминесценции и определяли светосумму свечения для соответствующей системы в течение 1 мин и принимали ее за 100% Соединение 919 в различных концентрациях добавляли в солевую среду перед радикалобразующей системой и определяли параметры свечения, как описано выше. Полученные результаты выражали в к исходной величине, для каждой концентрации соединения 919 проводилась серия из нескольких измерений. П р и м е р 8. Влияние соединения 919 на генерацию свободных радикалов кислорода перитонеальными макрофагами. Суспензию перитонеальных макрофагов мышей (10⁶ клеток/мл культуры) активировали стандартным активатором поликатионом, в результате чего усиливался выброс радикалов кислорода из клеток, регистрируемый по величине максимальной интенсивности хемилюминесценции, которую в отсутствие соединения 919 принимали за 100% Соединение 919 в различных концентрациях добавляли за 3 мин до активатора и также регистрировали интенсивность свечения в максимуме, результаты выражали в относительных единицах. Полученные данные приведены ниже. Из приведенных данных следует, что соединение 919, является эффективным "перехватчиком" синглетного кислорода и ОН радикалов в концентрациях 10^-6 10^-4 М и практически не влияет на образование супероксид-анион радикала в диапазоне концентраций 10^-8 - 10^-4 М. В системе перитонеальных макрофагов соединение 919 в концентрациях 10^-3 10^-1 М ингибирует выброс или связывает радикалы, продуцируемые макрофагами. Влияние соединения 919 на фагоциты аналогично соединениям, проявляющим противовоспалительную, иммунодепрессивную и антимутагенную активность. П р и м е р 9. Определение токсичности соединения 919 для теплокровных животных. Острую токсичность соединения 919 определяли в условиях однократного перорального введения белым беспородным половозрелым крысам и мышам обоего пола массой 150 170 г и 18 20 г соответственно. Заявляемое соединение вводили в концентрациях 100 200 г/л в виде масляного раствора (масло растительное) в дозах 1000, 2000, 4000, 8000 мг на 1 кг массы тела животного. В каждой подопытной группе было 6 8 животных. Установлено, что введение в организм животных соединения 919 в указанных дозах не вызывает гибели животных. Наблюдение за которыми проводили в течение 6 сут. Следовательно, заявляемое соединение согласно ГОСТ 12.1.007-76 (Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности) относятся к малоопасным веществам, среднесмертельная доза которых при пероральном поступлении в организм теплокровных более 5000 мг/кг. Таким образом, заявляемое соединение при моделировании острой гипоксии разного генеза оказывает выраженный антигипоксический эффект в меньших дозах, чем его структурные аналоги, а также обладает антирадикальной активностью, малотоксично и представляет значительный интерес в качестве потенциального средства с антигипоксическими свойствами. ТТТ1 ТТТ2

Формула изобретения

2-(3,5-Ди-трет-бутил-4-гидроксибензоилметилтио)-5-этоксибензимидазол формулы обладающий антигипоксической и антирадикальной активностью.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 14-2002

Извещение опубликовано: 20.05.2002        

---