Способ получения 6-дезамино-6-гризеоловой кислоты

 

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения 6-дезамино-6--гризеоловой кислоты, обладающей способностью ингкбировать действие фосфодиэстеразы циклического аденозин-монофосфата. Цель - создание нового более активного и малотоксичного вещества .указанного класса. Синтез ведут реакцией NaNOj с гризеоловой кислотой в кислой среде при температуре от О С до комнатной Б течение ,.о т 16-50 ч. 54%, брутто ф-ла С, H.j N.j 0g 1/ Н О. Новое вещество практически нетоксично и может в лучшей степени, чем те.офеллин, снижать циркуляторные церебральные растройства, применяться для лечения осложнений после апоплексии головного мозга и в качестве активаторов метаболизма в мозгу для лечен я старческого слабоумия, I табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦ АЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУЬЛИК

И ПАТЕНТ У

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОЬРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫтИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3961256/23-04 (62) 3808501/23-04 (22) 03.10.85 (23) 26.10.84 (31) 58-202362 (32) 28.10.83 (33) JP (46) 23. 03.89. Бюл. Л 11 (71) Санкио Компани Лимитед (JP) (72) Масакатсу Канеко, Мисако Кимура, Есинобу Мурофуси, Митсуо Ямазаки, Но 6 уе с и Ива та и Фумио Нака гава (JP) (53) 547.964,4.07(088.8) (56) Вейганд-Хильгетаг, Методы эксперимента в органической химии.-М.:

Химия, 1968, с. 319. (54) СПОСОБ ПОЛУЧН1ИЯ 6-ДЕЗАМИИО-6-ГРИЗБОЛОБОй КИСЛОТЫ (57 ) Изобретение ка са ется гетероцик1

Изобретение относится к способу получения б-дезамино-б-гризеоловой кислоты — нового биологически активного соединения, которое может найти применение в медицине. . Цель изобретения — способ получения нового биологически активного соединения, практически нетоксичного и обладающего более высокой активностью в отношении способности ингиби- ровать действие фосфодиэстеразы циклического аденозинмонофосфата, Пример !. 6=Дезамино-6-оксигризеоловая кислота.

5,81 г гризеоловой кислоты растворяют при нагревании в 807-ном (мас./об.) водном растворе уксусной

Qgl nn

SU„„21 АЗ (51)4 С 07 D 473/30, 493/04 лических веществ, в частности получения 6-дезамино-6-гризеоловой кислоты, обладающей сгособностью ингибировать действие фосфодиэстеразы циклического аденозин-монофосфата, Цель — создание нового более активного и малотоксич" ного вещества указанного класса, Синтез ведут реакцией NaN0 с гризеоловой кислотой в кислой среде при темо пературе от 0 С до комнатной в течение от 16-50 ч. Быход 543, брутто ф-ла С< Н; И Оз ° 1/ Н О. Новое вещество практически нетоксично и может в лучшей степени, чем теофеллин, снижать циркуляторные церебральные растройства, применяться для лечения осложнений после апоплексии головного мозга и в качестве активаторов мета- . болизма в мозгу для лечения старческогоо сла боумия . 1 та бл. кислоты, после чего раствор охлаждают до комнатной температуры. Затем добавляют 960 r нитрита натрия. Боздух в сосуде, содержащем укаэанный раствор, заменяют азотом, сосуд плотно закупоривают и оставляют стоять в течение 16 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении получая остаток, к которому добавляют э танол, и затем отгоняют, этот процесс повторяют до полного исчезновения запаха уксусной кислоты. Остаток растворяют в 50 мл воды, рН раствора доводят. до 1,0 концентрированной соляной кислоты при охлаждении льдом. Раствор оставляют на 16 ч в холодильнике, а затем осадок собирают фильтрацией и

1 684 .l

Испытуемо е Т5 9 мкмОль соединение сАМР PDE cGHP РВЕ.1

Теофеллнн

Гриз еоловая кисло та

0,32

360, 0

О. 13

196, О

0,63

О, lб промывают небольшим количеством воды.

Осадок затем перекристаллизовывают из водного ацетона, что дает 1,66 г целевого соединения. При конденсиро—

5 вании маточной жидкости получают

2,20 г неочищенных кристаллов. Эти неочищенные кристаллы затем перекристаллизовывают из водного ацетона, чта дает дополнительно 1,2 r целевого со- 10 единения (выход 54%).

Спектр ультрафиолетового поглощения (H O) 7,„<.„„, HM (F ): 247 (1 1 800)

270 (3700) .

Спектр HMP (гексадейтерированный диметилсульфоксид), или д.; 4,50 (1Н, синглет); 4, 57 (1Н, дублет, Х = 6, О Гц); 5, 12 (1H, дублет, I

= 3,0 Гц); 5,88 (1H дублет дублетов, I = 3 0 и 6 0 Гц); 6 50 (1Н, 20 синглет); 8,17 (1Н, синглет); 8,38 (1H, синглет).

Найдено, %: С 43,29; Н 3,26;

11 14,42.

С, Н „ N@0) 1/2 П 0 25

Вычислено. %s С 43,191 Н 3 451

И 14,39.

Пример 2 В соответствии с примером 1, используя вместо уксусной фосфорную кислоту, осуществ- 311 ляют процесс при 40 С в течение 1О ч и получают указанное в примере 1 соединение.

Пример 3. По методике примера 1 осуществляют процесс при О С в течение 50 ч, получают целевое соединение.

Проведены биологические испытания 6-дезамино-6-гризеоловой кислоты о

Токсичность, Подвергают испытанию гриэеоловую кислоту и 6-дезамино-6-гризеоловую кислоту. Подопытные животные — самцы крыс штамма Фишер (группы по пять крыс для каждого опыта).

Испытуемые соединения назначались в виде циничных суточных доэ 500 или 100 мг/кг на протяжении четырех дней испытания.

При дозе 50 мг/кг предлагаемое соединение показало смертность О/5 в конце испытания (т.е. из 5 крыс в . каждой подопытной группе ни одна не умерла), при дозе 100 мг/кг смертность, вызванная гризеоловой кислотой, была 3/5 (О/5 в первые два дня и 3/5 после 3 дней), при дозе

200 мг/кг — 4/5а Показатели смертности при дозе l 00 и 200 мг/кг были

О/5 к концу испытания, т.е ° смертность отсутствовала. Эти результаты показывают, что предлагаемое соединение практически нетаксично.

Фосфодиэстеразная (PDE) ингибитарная активность.

Соединение по изобретению испытывают вместе с теофиллином, взятым для сравнения, Испытание осуществляют при использовании метода Пихардил Чанга, В качестве источника cANP PDE использовался неочищенный энзиматический раствор, взятый из мозга крыс.

В качестве субстрата использовался меченый С cANP, который пр п енялся в 0,2 М буферном растворе трис-соляной кислоты (рН 8,0) в количестве, достаточном для получения конечной концентрации 0,14 мкМ (трис представляет собой трис-(оксиметил) аминометан) . Раствор субстрата сме шивался с соответствующим количеством испытуемого соединения, растворенного в 2-5 мкл диметилсульфоксида, с 20 мкл раствора змеиного яда и

40 мкл неочищенного раствора энзима.

Добавлялось достаточное количество трис-солянокислатного буфера для достижения общего объема 100 мкл. Смесь о реагировала при 30 С в течение 20мин.

В конце данного периода времени реакционная смесь обрабатывалась смолой

Амберлит (торговая марка) ХГР-59, и определялся уровень остаточной радиоактивности аденозина в продукте, Эксперимент осуществлялся при ряде уровней концентрации каждого активного соединения, и по этим данным вычислялись величины 50%-ного ингибирования (Ig )Эксперимент повторялся эа исключением того, что вместе сАМР в качестве субстрата применялся циклический гуанозинмонофосфат (сСМР). Также вычислялась величина I против сМР PDE:

Величина ингибирования действия фосфодиэстеразы циклического аденозинмонофосфата дана в таблице.

iчб8ч 2i

11ия дей с тв ия 1 ос 1од;1 э 1 å ра эь1 О1к:: 11 ческаго зде11ози: монофосфат».

Известным соединением, используемым для сравнения, является теофеллин, который ингибирует как сМ1Р РВЕ, так и сЯР РВЕ и применяется для данной цели как терапевтическое средство, Наименее эффективное из испытаниь1х соеди11е11и11 по изобретению имеет величину Т, „которая примерно на порядок ниже, чем соответствующая величина для теофеллина, в то время как наиболее ".ôô"êòèâíoå из трех соединений имеет величину I .. примепно фо

Л на 3-А порядка ниже, что указывает на то, что показатели активности соединений по изобретению в качестве ингибиторсв РВЕ высокие.

Предлагаемое соединение может использоваться в качестве тевапевтиО р ..1 ула и з с б р,. т: и

Способ по "i -.å 1,.; 6-дезамино-1.—

-гризеоловой кислс-ы форм cëü!

10 от и чают,ийс я тем.что г1 из соловую кисло ту формульi ческих агентов против различных циркуляторпых цсребральььы расстройств, таких как осложнения после апоплексии головного мозга и осложнения или остаточные явления инфа рк та головногс мозга, и в качестве активаторов метаболизма в мозгу, например, для лечения старческого слабоумия ичи травматического инфаркта мозга. Соединение может вводиться орально или неорально (например, подкожно или внутрильш1е -;но путем инъекций1).

Проведе"ные испытания показали, что полу гаемая описанным способом

6-цезамино- 6-гризеоловая кислота подвергают взяимодействи .. с н11т с Ом на трия р. кисло тн=1х услогиях и и тем о пературе От 0 С до комнатной в . ечен е 1&-50 практически неток "ичное соединение, при этом Оно обладает более высокой способностью в Отношении ингибироваРедактор В. Петраш

Корректор Б, Романенко

Техред Д.Сердюкова

Заказ 1218/5Ü

Подписное

ВИЙИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент", г=ужгород, ул. Гагарина,101