Способ получения производных гризеоловой кислоты

 

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению производных гризеоловой кислоты формулы 1 Изобретение относится к способу получения новых производных гризеоловой кислоты - биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине. Цель изобретения - новый способ получен ия новых производных гризеоловой кислоты, обладающих ингибиторным действием в отношении сАМР РДЕ и более низкой токсичностью. где R - Н, или алкил , бензгидрил, Z - галоген которые могут найти применение в медицине. Цель - получение новых соединений новым способом . Ползшёние их ведут взарпчодействием гризеоловой кислоты с галогеном в водно-щелочном растворе rrpja рН 12-13. При необходимости полученный продукт подвергают этерификаций этерифицирующим агентом, таким как 1-метил-З-п-толилтриазен или дифеншздиазометан, предпочтительно в инертном растворителе - тетрагидрофуране или водном ацетоне, при комнатной температуре в течение 1-24 ч. 2 табл. Пример 1. 4 , 7 -Ангидро-5 - - -хлор-4 -(-оксигризеоловая кислота. 50 мг гризеоловой кислоты растворяют в 2 н. водной гидроокиси натрия , и раствор охлаяздают льдом. Добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлора при охлаждении льдом и перемешивании на протяжении 3 ч. В конце данного периода времени растворитель отгоняют и ocj aTOK доводят |ДО значения рН 12-13 с помощью наСО 4: а: 00 4 Ю to ы

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н flATEHTV (21) 3962054/23-04 (62) 3808501/23-04 (22) 03.10.85 (23) 26.10.84 (31) 58-202362 (32) 28,10.83 (33) Л (46) 23.03.89. Бюл. У 11 !

RO0C

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (71) Санкио Компани Лимитед (!Р) (72) Иасакатсу Канеко, Иисако Кимура, Есинобу Мурофуси, Иитсуо Ямазаки, Нобуеси.Ивата и Фумио Накагава (Л ) (53) 547.857.07 (088.8) (56) Европейский патент 9 029329 А, кл. С, 12 р 1/06, опублик. 1981. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

ГРИЗЕОЛОВОИ КИСЛОТЫ (57) Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению производных гризеоловой кислоты формулы

Изобретение относится к способу получения новых производных гризеоловой кислоты — биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения — новый способ получения новых производных гриэеоловой кислоты, обладающих ингибиторным действием в отношении сАИР РДЕ и более низкой токсичностью.,„Я0 ÄÄ 1468422 А 3 (5D 4 C 07 D 473/30, 493/04, А 61 К 31/52

О где к — Н, или алкил С -С, бензгидрил, Z — галоген, которые могут найти применение в медицине. Цель — получение новых соединений новым способом. Получение их ведут взаимодействием гризеоловой кислоты с галогеном в воцно-щелочном растворе при рН 12-13. При необходимости полученный продукт подвергают этерификации этерифицирующим агентом, таким как

1-метил-3-п-толилтриазен или дифенилдиазометан, предпочтительно в инертном растворителе — тетрагидрофуране или водном ацетоне, при комнатной температуре в течение 1-24 ч.

2 табл.

Пример 1. 4,7! -Ангидро-5 - ! — (-.хлор-4 -М-оксигризеоловая кислота.

50 мг гризеоловой кислоты растворяют в 2 н. водной гидроокиси натрия, и раствор охлаждают льдом. Добавляют 50 мл насыщенного водного раствора хлора при охлаждении льдом и перемешивании на протяжении 3 ч.

В конце данного периода времени растворитель отгоняют и остаток доводят

iso значения рН 12-13 с помощью на1468422

ЗО сьпценного водного раствора бикарбоната натрия, а затем лиофилизируют.

Остаток растворяют в воде, и раствор доводят до значения рН 1 с помощью

1 н. соляной кислоты.

Предлагаемый раствор подвергают колоночной хроматографии в обратной фазе с использованием колонки R<-8, элюируемой смесью 2% мас/объем ацетонитрила, 0,3% мас/объем водной уксусной кислоты и 97,7% воды; элюат лиофилизируют, давая 10 мг целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглощения (вода) Я.,„„, нм (): 258 (14600).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (1:1 по объему смесь Д О и гексадейтерированного днметилсульфоксида) d млн.дол.; 4 56 (1Н, дублет, 20 .(= 6,9 Гц), 4,71 (1Н, синглет), 4,98 (1Н, синглет), 5,62 (1Н, дублет, J = 6,9 Гц), 6,60 (1Н, синглет), 8, 14 (1Н, синглет), 8,30 (1H синглет). 25

Пример 2. 4,7 -Ангидро-5—

/ ((-«{-бром-4 -{-оксигризеоловая кислота.

2,27 г гризеоловой кислоты растворяют в 60 мл 2 н. водной гидроокиси натрия и при охлаждении льдом по каплям на протяжении 5 мин добавляют 112 мл насыщенного водного раствора брома. Смесь перемешивают

30 мин и в конце данного периода времени рН доводят до 12-13, избыток брома разлагают добавлением 25 мл

5 И водного раствора кислого сульфата натрия. Смесь доводят до значения рН 2,3 с помощью концентрированной соляной кислоты и оставляют стоять в течение ночи в холодильнике. Кристаллы, выпавшие в осадок, отфильтровывают, получают 1,6 г целевого соединения в виде желтых игл.

Спектр ультрафиолетового поглощения (вода) Я„,щ„ нм (E ): 257,5 (15500).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметилсульфоксид) Ю млн.дол.: 4,73 {1H дублет, J = 6,6 Гц), 4,93 (1Н, синглет), 5,27 (1Н, синлет), 5,98 (1Н, дублет, J = 6,6 Гц), 6,72 (1H, синглет), 8,21 {1Н, синглет), 8,39 (1H, синг.лет} . (Пример 3. 4.,7 -Ангидро-5

- {-иод-4 - {-оксигризеоловая кислота. !

10 г гризеоловой кислоты растворяют в 264 мл 2 н. водной гидроокиси натрия и при охлаждении льдом по каплям добавляют раствор, содержащий

0,5 моль иода в метаноле. После добавления примерно 2/3 раствора иода. начинают выпадать в осадок кристаллы, рН доводят до 12-13. Спустя 3,5 ч добавляют 700 мл цоды, а затем

27,5 r кислого сульфита натрия, и раствор доводят до значения рН 2,3 с помощью насьпценного водного раствора бикарбоната натрия. Реакционную смесь оставляют на ночь при 5 С.

Кристаллы, выпавшие в осадок, отфильтровывают, промывают водой, а затем гексаном, сушат, получают

13,0 г целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглощения (вода),„, нм (g ); 258 (12300) .

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметилсульфоксид) d млн.дол.: 4,77 (1H, дублет, 3 = 6,9 Гц), 4,96 {1Н, синглет), 5,11 (1Н, синглет), 6,07 (1Н, дублет, 3 = 6,9 Гц), 6,73 (1Н, синглет), 8,23 (1Н, синглет), 8,40 (iH, синглет).

Пример 4. Дибензиларил

4,7 -ангидро-5 -{-бром-4- -оксигри-!

I ( зеолат. рН суспензии 3,3 r 4,7 -ангидро-! (-5 - -бром-4 - -оксигризеоловой кислоты (полученной, как описано в примере 2) в 100 мл ацетона и 20 мл воды доводят до -1, а затем добавляют раствор дифенилдиазометана в ацетоне.

Смесь перемешивают при комнатной температуре. Ацетон отгоняют и остаток растворяют в этилацетате и насыщенном водном растворе бикарбоната натрия. Органическую фазу отделяют, промывают водой, и сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют. Остаток растворяют в небольшом количестве ацетона, и раствор добавляют к гексану при перемешивании, получают порошок. Порошок отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси бензол/метанол. Выход

3,75 г целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглощения (метанол) д(нм (с ): 256,8 (16000).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (1:1 по объему смесь Д О и гексадейтерированного диметилсульфоксида} д млн.дол.: 4,83 (1Н, дублет, J = 6,6 Гц), 5,66 (1Н, синглет), 5,79 (1Н, синглет), 6,26 (1Н, дуб5 1 лет, 7 = 6,6 Гц), 6,84 (1Н, синглет)

8,24 (1Н, синглет), 8,41 (1Н, синглет) .

Пример 5., Дибензгидрил

I / / /

4,7 -ангидро-4 -(-окси-5 -(-иодгризеолат.

Повторяют в основном те же процедуры, что описаны в примере 4, но с использованием 505 мг 4,7/-ангидро-! /

-4 -(-гидро-5 - -иодгризеоловой кислоты.

Получают 805 мг целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглощения (метанол) Л д,д„нм (E ): 257 (16500).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (1:1 по объему смесь Д О и гекса2 дейтерированного диметилсульфоксида)

d ìëH.äîë.: 4, 79 (1Н, дублет, J = — б, б Гц), 5 50 (1Н, синглет), 5 59 (1Н, синглет), 6, 24 (1Н, дублет, J = 6,6 Гц), 6,77 (1Н, синглет), 8,24 (1Н, синглет), 8,34 (1Н, синглет) .

Пример 6. Диметил 4,7.—

-ангидро-5 -1-бром- 4 -"-оксигриэео( лат.

3,1 r 1-метил-3-н-толилтриазен, а затем 10 мл воды добавляют к суспензии 1 r 4,7 -ангидро-5 - -бром/ / /

-4 - -оксигризеоловой кислоты (полу/ ченной, как описано в примере 2) в

40 мл тетрагидрофурана. Суспензия растворяется примерно через 10 мин.

Спустя 3 ч добавляют 1,1 г п-толуолсульфокислоты и процесс идет при комнатной температуре в течение 4 ч.

Реакционную смесь затем оставляют о на ночь при 5 С. Растворитель отгоняют и остаток растворяют в этилацетате и воде. Органическую фазу отделяют, промывают водой и сушат над безводным сульфатом магния. Раствори" тель отгоняют. Полученные. кристаллы отфильтровывают. Выход 0,46 r целевого соединения.

Маточную жидкость концентрируют, растворяют в небольшом количестве ацетона и выливают в гексан при перемешивании. Получают 0,24 r соединения в форме порошка.

Спектр ультрафиолетового поглощения (метанол)Я „д нм (g ): 257 (14200).

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметилсульфоксид) E млн.дол.: 4,83 (1Н, 468422 6 дублет, J = 6,6 Гц), 5,28 (1H, синглет), 5,49 (1Н, синглет), 6, 15 (1Н, дублет, 1 = 6,6 Гц), 6,79 (1Н, синглет), 8,21 (.1Н, синглет), 8,39 (1Н, синглет) .

Пример 7. Диметил 4,7 ((-ангидро-4 -x -окси-5 - -иодгризеолат.

Повторяют процедуру, описанную в примере 6, но с использованием

2,0 г 4,7 -ангидро-4 - -окси-5 -e(/ / /

-иодгризеоловой кислоты (полученной, как описано в примере 3). Получают

1,1 r целевого соединения.

Спектр ультрафиолетового поглощения (метанол) „,„нм (Я): 256,2

/(15000) .

Спектр ядерно-магнитного резонанса (гексадейтерированный диметил20 сульфоксид) д млн.дол.: 4,80 (1Н, дублет, / = 6,6 Гц), 5,23 (1Н, синглет), 5,26 (1Н, синглет), 6,20 (1Н, дублет, J = 6,6 Гц), 6,79 (1Н, синглет), 8,24 (1Н, синглет), 8,40 (tH, синглет). Пример 8. 4,7 -Ангидро-5

/ / / ,- -бром-4 -(-гидроксигидризеоловая кислота.

2,27 г гризеоловой кислоты раство30 ряют в 10 мл 2 н. водной гидроокиси натрия и при охлаждении льдом по каплям добавляют 112 мл насыщенного водного раствора брома в течение

20 мин. В течение реакции рН реакциЗ5 онного раствора поддерживают в пределах 12-13 добавлением 2 н. гидроокиси натрия.

Далее используют дальнейшую процедуру примера 2, получают названное

4р соединение.

Пример 9. Диметил 4,7 -ан/ / гидро-5 -к-бром-4 -4-гидроксигризеоловая кислота.

К суспенэии 1 г 4,7 -ангидро-5 (/

45 - (-бром-4 - (-гидрокси гризеоловой

/ кислоты в 40 мл тетрагидрофурана добавляют 1,55 г 3-метил-1-п-толилтриазена и затем добавляют 10 мл воды. Полученную смесь перемешивают

6О до образования чистого (прозрачного) раствора в течение около 10 минСпустя 3 ч добавляют 0,63 г п-толуолсульфоновой кислоты и смесь перемешивают. По прошествии 2 ч добав55 ляют 1,55 r 3-метил-1-п-толилтриазена и 0,2 г п-толуолсульфоновой кислоты и перемешивают в течение 2 ч.

Затем раствор отгоняют, остаток разбавляют 20 мл этилацетата и 20 мл

l468422 воды, этилацетатный слой отделяют, промывают водой. Водный слой экстрагируют 10 мл этилацетата.

Объединенный этилацетатный слой сушат над MgSO, фильтруют и отгоняют растворитель. Осадок фильтруют и получают 0,81 г названного соединения. Маточный раствор подвергают перегонке, остаток разбавляют в 2 мл ацетона, образовавшийся раствор выливают в 300 мл гексана, полученный при -.ом осадок отделяют фильтрацией, получая 0,24 r названного сое ди не ния . 15

Проведены биологические испытания соединений по изобретению.

Фосфодиэстеразная (РДЕ) ингибиторная активность.

Испытание осуществляют при ис- 20 пользовании в основном метода Пичарда и Чанга. В качестве источника сАМР РДЕ используют неочищенный энэиматический раствор, взятый из мозга крыс. 25

В качестве субстрата используют

14 меченый 6 сАМР. Его применяют в

0,2 М буферном растворе трис-соляной кислоты (рН 8,0 в количестве, достаточном для получения конечной кон- 30 центрации 0,14 мкМ). "Трис" представляет собой трис-оксиметил-аминометан. Раствор субстрата смешивают с соответствующим количеством испытываемого соединения, растворенного в

2-5 мкл диметилсульфоксида и с 20 мкл раствора змеиного яда и 40 мкл неочищенного раствора энзима. Добавляют достаточное количество трис-солянокислотного буфера для достижения общего объема 100 мкл. Смеси дают о возможность реагировать при 30 С в течение 20 мин. В конце данного периода времени реакционную смесь обрабатывают смолой Амберлит (торговая марка) IRP-58 и определяют уровень

45 остаточной радиоактивности аденозина в продукте. Эксперимент осуществляют при ряде уровней концентрации каждого активного соединения и но этим данным вычисляют величины 507ного ингибирования (Ig

Эксперимент повторяют за исключением того, что вместо cANP в качестве субстрата применяют циклический гуанозин-монофосфат (cGNP). Также вычисляют величину I против cGNP

РДЕ.

Известным соединением, используемым для сравнения, является теофиллин, который ингибирует как cANP РДЕ, так и cGMP РДЕ и применяется для данной цели как терапевтическое средство. Наименее эффективное из испытанных соединений данного изобретения имеет величину Х, которая примерно на порядок кратности ниже, чем соответствунлцая величина для теофиллина, в то время как наиболее эффективное из тех соединений изобретения, которые были испытаны, имеет величину I цпримерно на 3-4 порядка кратности ниже, что указывает на то, что показатели активности соединений изобретения в качестве ингибиторов

РДЕ необычайно высокие. Значения I < (микромоли} сАМР РДЕ для соединений изобретения от 0,09 до 35, известное

360,0, cGNP РДЕ для соединений изобретения от 0,05 до .90, известное

196,0. Для гриэеоловой кислоты эти величины (УД,) равны: 160 мкМ против сАМР и 630 мкМ против cGNP.

Улучшение вязкости крови.

Подопытными животными были самцы крыс Mistar; их разбивают на группы по пять крыс в каждой. Крысы анестеI зируют пентобарбиталом и одновременно вводят им орально испытываемое соединение в дозе, указаннои в табл. 1 в виде суспензии в карбоксиметилцеллюлозе. Быстро производят надрез на шее и из яремной вены собирают пробы крови 0,5 мл. Вязкость данной пробы определяют с помощью ротационного вискозиметра.

Через 30 мин после орального введения общую сонную артерию перевязывают бипатерально. Через 1 ч после этого (т.е..спустя 90 мин после . орального введения), из яремной вены собирают еще одну пробу крови 0,5 мл и ее вязкость определяют таким же образом.

Вычисляют показатели вязкости крови каждого подопытного животного и ее стандартные отклонения для каждой из четырех скоростей или степеней сдвига (37,5, 75, 150 и 3?5 с ) ротационного вискозиметра. Значения для каждой группы перед перевязкой и после перевязки (т.е. изменение на протяжении периода 60 мин) анализируют по методу статистического т-испытания. Результаты приведены в табл. 1: для каждой скорости сдвига, 22 0 неорально (например, подкожно или внутримьппечно путем инъекций).

Определение токсичности соединений по изобретению и гризеоловой кислоты проводилось на крысах-самцах штамма

Фишер. Крыс разбивают на группы по пять штук в каждой.

Испытываемые соединения вводят крысам в виде единичных суточных доэ: 50, 100 или 200 мг/кг на протяжении 4 дн. испытаний.

Для соединения по изобретению показатели смертности при дозах 50, 100 и 200 мг/кг — О/5 к концу испытания, т.е. смертность отсутствовала (из 5 крыс в каждой подопытной группе ни одна не умерла).

Смертность, вызванная гризеоловой кислотой в дозе 100 шт/кг, была 3/5, в дозе 200 мг/кг - 4/5.

Таким образом, соединения по изобретению могут быть отнесены к практически нетоксичным.

Проведенные испытания показали, что соединения по изобретению практически нетоксичны, обладают более высокой ингибиторной активностью в отношении cANP РДЕ и сСМР PPE в сравнении с гризеоловой кислотой и теофиллина.

Кроме того, описываемый процесс получения соединений по изобретению представляет собой уникальную внутримолекулярную дополнительную перегруппировку при реакции гидроксильной

/ группы в 4 -положении гризеоловой кислоты с двойной связью между 4 и

5 положениями.

14684

Способ получения производных гриэеоловой кислоты общей формулы когда не отмечалось значительного повышения кровяного давления (P <

< 0,05) между значениями перед перевязкой и после перевязки печатается единственный знак плюс (+) . Так, например, если не быпо значительной разницы в вязкости между показателями до перевязки и после перевязки при любой из четырех скоростей сдвига, результаты будут ++++. Параллельно с этими экспериментами осуществлялся идентичный эксперимент за исключением того, что подопытным животным вводят раствор одной карбоксиметилцеллюлоэы без активного соединения, результаты данной подопытной группы показали значительное увеличение вязкости крови нри каждой из четырех скоростей сдвига.

Как видно из табл. 1, з начительное улучшение (т.е. стабилизация) вязкости крови достигалось в случае соединения 5 при всех уровнях доз.

Испытание с сотрясением мозга.

Испытываемое соединение, суспендированное в водном растворе карбоксиметилцеллюлозы, вводят мышам интраперитонально. Спустя 30 мин„ на голову каждой мьнпи падала капля весом 16 г с высоты 50 см и для каждой мыши измерялось время, необходимое на восстановление ее защитного рефлекса и самопроизвольной двигатель.ной активности.

В качестве контроля осуществлялся сходный эксперимент с использованием раствора карбоксиметилцеллюлозы без какого-либо активного соединения.

Реэультатыприведеныв табл. 2 в Формула из о б р е т е н ия виде среднего времени (в секундах) плюс — минус статистическая ошибка.

В контрольной группе было 20 мышей, и 17 мьпней было в группе, которой испытываемое соединение не вводилось.

45 2

Соединения по изобретению могут использоваться соответственно в качестве терапевтических агентов против различных циркуляторных цереб.ральных расстройств, таких как осложнения после апоплексии головного мозга и осложнения или остаточные явления инфаркта головного мозга, и в качестве активаторов метаболизма в мозгу, например, для лечения старческого слабоумия нли травматического инфаркта мозга. Соединения изобретения могут вводиться орально или

R00C

55 где R — водород или С -С -алкил б Э бенз гидрил,"

Z — - галоген, отличающийся тем, что соединение формулы!

468422

l2 где Z имеет указанные значения, и, при необходимости, полученный продукт подвергают этерификации этерифицирующим агентом, таким как 1- .

-метил-3-и-толилтриазен или дифенилдиазометан, предпочтительно в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран или воДный ацетон, при комнатной температуре в течение

1-24 ч.

0Н подвергают взаимодействию с галогеном в водно-щелочном растворе при рН 12-13 с получением соединения формулы М 1

Таблица 1

Доза, мг/кг

Испытуемое соединение

10 30 50 100

Дибенэгидрил-4,7 -ан((f гидро-5 - -бром-4(- (-оксигризеолат

Таблица 2

Доза, мг/кг ремя на восстановление, с

Испытуемое соединение тный рефле мопроизвольная двительная активность

18549+51 4 1

71,4+29,3

Отсутствует контроль ((4

Дибензгидрил 4,7 гидро-5(- -бром-4 -о((-оксигризеолат

72,8+15,7 (Р < 0,05) 20,9+2,9

Составитель В. Волкова

Техред Л. Сердюкова Корректор Л.Пилипенко Редактор Е.Папп

Заказ 1220/59 Тираж 352 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб. ° д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

Способ получения производных гризеоловой кислоты Способ получения производных гризеоловой кислоты Способ получения производных гризеоловой кислоты Способ получения производных гризеоловой кислоты Способ получения производных гризеоловой кислоты Способ получения производных гризеоловой кислоты 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине , а именно к неврологии, и может быть использовано при лечении больных с церебральной сосудистой патологией, осложненной .табакокурением
Наверх