Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе
Изобретение относится к способам определения содержания алифатических альдегидов в растворах и может быть применено в сельском хозяйстве, медицине, аналитической химии, биохимии. Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения содержания алифатических альдегидов в растворе. Способ заключается в том, что клетки альдегидзависимых мутантов люминесцирующих бактерий PHOTOBACTERIUM FISCHERI или BENECKEA HARVEYI инкубируют в водном растворе хлористого натрия с глицерином и Тритоном Х-100, затем добавляют раствор алифатических альдегидов и регистрируют интенсивность биолюминесценции смеси, по которой судят о содержании альдегидов. Чувствительность предлагаемого способа составляет 1:10<SP POS="POST">-13</SP> - 1:10<SP POS="POST">-5</SP> мас.% алифатических альдегидов. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (5)1 4 С 12 Q 1/66 (Ь
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГННТ СССР (21) 4224688/3)-13 (22) 06,04.87 (46) 15.04.89. Бюл. 14 (71) МГУ им. М,В,Ломоносова (72) В.А.Маргания, Ю.А,Малков и В.С.Данилов (53) 663.)(088.8) (56} Попова Л.Ю.-и Шендеров А.Н.
Классификация мутантов с измененной интенсивностью свечения по чувствительности к экзогенному альдегиду.
Генетика, 1979, т. 15, ¹- 9, с. 15551560.
Е.A.Meighen, К.N.Slissor
and. G.G.Grant, Development of à biolumenesence assay a dehych phегоmones of insicts. I. Спет. егоlogy, 1982, v. 8, № 6, р. 911-921. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ
АЛИФАТИЧЕСКИХ АЛЬДЕГИДОВ В РАСТВОРЕ (57) Изобретение относится к спосо1
Изобретение относится к способам определения количества алифатических альдегидов в растворе и может быть применено в аналитической химии, биохимии, медицине и сельском хозяйстве.
Цель изобретения — повышение чувствительности способа.
Изобретение заключается в том, что берут культуру люминесцирующих бактерий Photobacterium fischeri или
Beneckea harveyi с содержанием клеток 10 — 10 в 1 мл.водного раствора
7 8 хлористого натрия 0,3-0,5 мас.%, обрабатывают клетки 5-70 10 мас.% нитрозогуанидина в течение 1030 мин; рассеивают бактерии на чашки
„„Я0„„1472509 А 1 бам определения содержания алифатических альдегидов в растворах и может быть применено в сельском хозяйстве, медицине, аналитической химии, биохимии. Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения содержания алифатических альдегидов в растворе ° Способ заключается в том, что клетки альдегидзависимых мутантов люминесцирующих бактерий Photobàctåri ïï Гicheri или
Beneckea Ьагчеу1 инкубируют в воцном растворе хлористого натрия с глицерином и Тритоном Х-100, затем добавляют раствор алифатических альдегидов и регистрируют интенсивность биолюминесценции смеси, по которой судят о содержании альдегидов. ЧувcòâHTåëüHoñòü предлагаемого способа составляет 1 ° 10 - 1 ° 10 мас.% алифатических альдегидов. 1 табл.
Петри с твердои средой состава, мас.%: пептон 1-1,5; агар 1,8-2; мясопептонный бульон 5-6; морская вода 3,6-3,8 на 1 л воды, после чего отбирают отдельные тусклые колонии, которые отвечают светоизлучением на добавку 10 -10 % тетрадеканаля и высеивают колонии на жидкую питательную среду состава, мас.%: натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,50,7; калий фосфорнокислый одноэамещенный 0,2-0,3; аммоний фосфорнокислый двузамещенный 0,04-0,06; магний сернокислый 0,009-0,011; пептон 1,0, дрожжевой экстракт 0,2, хлористый натрий 0,3, остальное вода; культивируют при 18-25 С в течение 8-16 ч, 1472509 затем осаждают бактерии центрифугированием, отделяют клетки и вносят их в водный раствор, содержащий, мас.X: хлористый натрий 0,3-0,5; глицерин
0,03-0 05- тритон Х-100 10 "-10, инкубируют суспензию клеток нри перемешивании при 20 †?3 С в течение
3-4 ч; разводят суспензию клеток водным. раствором хлористого натрия
0,15-0,35 мас.7. до оптической плотности 0,1-1, О; переносят О, 25-1,0 мл суспензии клеток в кювету люминометра; добавляют 0,01-0,05 мл исследуемого раствора и измеряют уровень 15 биолюминесценции в течение 5 с, по Ко торому судят о содержании алифатических альдегидов в растворе.
Предлагаемый способ имеет предел чувствительности определения альдегидов в 1000 — 10000 раз вьппе известного (2,1 10 -10 мас.%), с диапазоном измерения количества альдегида в пределах 8 порядков.
Материалы, представленные в таблице, иллюстрируют достижение цели.
Из таблицы видно, что чувствительность предлагаемого способа в 100010000 раз выше, спектр определения алифатических альдегидов шире и число используемых мутантов больше, Пример 1. Берут культуру люминесцирующих бактерий P. fischeri
6 с содержанием клеток 10 в 1 мл в
0,3 мас.X хлористого натрия; инкубируют 30 мин с 5 10 мас. нитрозо35 гуанидином« рассеивают на чашки Петри со. средой состава мас, : пептон 1; агар 2; мясопептонный бульон
6; морская вода 37,5; остальное вода; через 2 суток отбирают отдельные колонии несветящихся клеток, которые отвечают светоизлучением на добавку
10" X тетрадеканаля; переносят полученные клетки.в жидкую питательную среду состава, мас.%: натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,7; калий фосфорнокислый однозамещенный 0,2; аммоний фосфорнокислый двузамещеи-. ный 0,05; магний сернокислый 0,01; пелтон 1,0; дрожжевой экстракт 0,2; хлористый натрий 0,3 остальное вода; культивируют при 18 С в течение
16 ч; сепарируют клетки; инкубируют суспензию клеток при перемешивании при 23 С в течение 3 ч в водном растворе, содержащем, мас.Е: хлористьп натрий 0,3; глицерин 0 03; Тритон X-100 10 ; разводят суспензию клеток в 0,35 -ном водном растворе хлористого натрия до оптической плотности 1,0 при 540 нм; переносят
1,0 мл суспензии клеток в кювету люминометра; добавляют 0,01 мл раствора (Е)-11 -гексадеценаля и измеряют уровень биолюминесценции в течение
5 с. Получают нижний предел определения гексадеценаля, равный
1.10 мас.X.
Пример 2. Берут культуру люминесцирующих бактерий P. harveyi с содержанием клеток 10 в 1 мл в т водном растворе 0,3 мас. хлористого натрия; инкубируют с 10,10 мас,X нитрозогуанидина в течение 20 мин; далее рассеивают на чашки Петри, отбирают колонии альдегидзависимых клеток, культивируют 8 ч, сепарируют бактерии, как указано в примере 1; инкубируют клетки в водном растворе, содержащем, мас.7: хлористый натрий 0,4; глицерин 0,04; Тритон Х-1 00 10" в течение 3 ч при о
23 С; доводят клетки водным раствором 0,3 мас. хлористого натрия до оптической плотности 0,3 при 540 нм, переносят 0 5 мл суспензии клеток в кювету люминометра, добавляют
0,02 мл раствора с различным содержанием деканаля и измеряют уровень биолюминесценции в течение 5 ч, Из таблицы видно, что предел чувствительности способа на деканаль сос1> тавляет 1 10 мас.X диапазон измерения содержания альдегида до
1 10 мас.Х, т.е. 8 порядков изменения содержания альдегида.
Пример 3. Берут культуру люминесцирующих бактерий В. harveyi с содержанием клеток 10 в 1 мл и в водном растворе 0,5 мас.7. хлористого натрия, инкубируют с 70 "
-з
«10 мас. нитрозоуганидина в течение 10 мин; далее рассеивают на чашки Петри, отбирают альдегидзависимые клетки, культивируют 8 ч, сепарируют клетки, как указано в примере 1; инкубируют в водном растворе, содержащем, мас. %: хлористый натрий
0,4; глицерин 0,05; Тритон Х-100
10 в течение 4 ч при 10 С; доводят клетки водным раствором 0,15 мас. хлористого натрия до оптической плотности 0,1 при 540 нм, переносят
0,25 мл суспензии клеток в кювету люминофора, добавляют 0,05 мл водйоСпособ Чувстви- Опреде- Мутанты лютельность, ляемые минесцирующих мас.Х альдегиды бактерий
10 — 10
Изв естный
P. mand.apamensis
Тетрадеканаль
Предлагаемый.1
10 — 10
Тетрадеканаль В. harveyi
Деканаль В. harveyi (Е)-11-гексадеценаль Р. fischeri
10 — 10
10 — 10
5 14725 го раствора с различным содержанием тетрадеканаля и измеряют уровень биолюминесценции в течение 5 ч. Как видно из таблицы нижний предел чув1
5 ствительности способа составляет ф
1 10 мас.X тетрадеканаля.
Пример 4. Все операции проводят аналогично примеру 1, но клетки мутантов P. fischeri инкубируют 10 в водном растворе,. содержащем, мас.7.: хлористый натрий 0,2; глицерин 0,02;
Тритон Х-100 10 в течение 2 ч при о 19 С, все остальные компоненты и процедуры неизменны. Получают нижний 15 предел определения (Е)-11-гексадеце-5 наля, равный 1 10 7, т.е. низкую чувствительность.
Пример 5. Все операции проводят аналогично примеру 1, но клет- 20 ки мутантов В. harveyi инкубируют в водном растворе, содержащем, мас,X хлористый натрий 0,6; глицерин 0,06;
Тритон Х-100 10 в течение 5 ч при
24 С, Получают нижний предел определения тетрадеканаля, равный 1 ° 10 Е, т,е. низкую чувствительность.
Предлагаемый способ по сравнению с известным повьппает чувствительность определения содержания алифатических 30 альдегидов в растворе.
Формула изобретения
Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе, включающий инкубацию люминесцирующих 35 бактерий РЬо1оЪас1егйпп fischeri u
09 6
Beneckea harveyi в течение 10-30 мин на среде, содержащей нитрозогуанидин, хлористый натрий, пересев бактерий на твердую среду, содержащую пептон, агар-агар, мясопептонный бульон, морскую воду, отбор отдельных тусклых колоний, отвечающих светоизлучением на добавку тетрадеканаля, пересев на жидкую среду, содержащую натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый оцнозамещенный, аммоний фосфорноЪислый двузамещенный, магний сернокислый, пептон, дрожжевой экстракт, хлористый натрий и культивирование при
18 — 25 С в течение 8 — 16 ч, полученную суспензию клеток разводят водным раствором хлористого натрия в концентрации 0,15 — 0,35 мас.Е до оптической плотности 0,1 — 1,0, переносят 0,25 — 1,0 мл суспензии клеток в кювету JIIoMHHDMeTpB> добавляют
0,01 — 0,05 мл исследуемого раствора и оценку результатов проводят по уровню биолюминесценции, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью. повьппения чувствительности способа, отбор тусклых колоний ведут при концентрации тетрадеканаля 10
-6
10 мас.7., а после культивирования клеток проводят их истощение в водном растворе, содержащем, мас.Е:
Хлористый натрий 0,3-0,5
Тритон Х-100 10 -10"
Глицерин О, 03-0,05 в течение 3-4 ч при 20-23 С.
