Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в

 

Изобретение относится к производным сахаров ,в частности, к получению 1-N-(W-амино-α-оксиалканоил)канамицина А или В формулы @ где R - ОН или NH<SB POS="POST">2</SB>

N - 0-2, широко применяемых антибиотиков. Цель - увеличение выхода целевых продуктов и интенсификация процесса. Получение целевых продуктов ведут из полисилилированного канамицина А или В, содержащего от 4 до 8 триметилсилильных блокирующих групп, или полисилилированного канамицина, содержащего карбобензилоксикарбонильную группу при 6Ъ-аминогруппе и от 3 до 7 триметилсилильных групп и ацилирующего производного кислоты формулы 1 C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">5</SB>CH<SB POS="POST">2</SB>OC(O)-NH-CH<SB POS="POST">2</SB>-(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">N</SB>-CH(OH-COOH), где N имеет указанные значения, ее N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира или N-оксисукцинимидного эфира, или смешанного ангидрида кислоты формулы 1 и триметилуксусной либо изобутилкарбоновой кислоты. Ацилирование ведут в среде органического растворителя, содержащего 0-5% воды, после чего блокирующие триметилсилильные группы удаляют гидрогенизацией. 7 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 11 2 2

HO

0 нн

NH

С=О

I сн 1.-(-)

СН2)11

Ь,. 112

H2I1

ИН

-6и -.и

1 (сиг4, 1 сн

_#_Hg где R — ОН или NH2;

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯМ

ПРИ П.(НТ СССР (21) 2611254/23-04 (22) 28. 04. 78 (31) 791806 (32) 28.04.77 . (33) US (46) 15.05.89. Бюл . 1(18 (71) Бристоль-Мейерэ Компани (ЦБ) (72) Мартин Джон Крон, Джон Джерард

Кейл,. Дженг Е1ионг Лин, Мариано Весчио

Раггери и Дерек Волкер (ПБ) (53) 547 455.07(088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 1190988, кл. С 07 Н 15/22, 1975. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-И- (Q — NGfHO-Ы-ОКСИАЛКАНОИЛ)КАНАМИЦИНА А ИЛИ В .(57) Изобретение относится к производным сахаров, в частности к получению 1-N (Я-амино-Ы-оксиалканоил)канамицина А или В фор-лы

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения 1-NHO (511 4 С 07 Н 1.5/224 А 61 К 31/71 где Р— ОН или NH п = 0-2, широко применяемых антибиотиков. Цель — увеличение выхода целевых продуктов и интенсификация процесса. Получение целевых продуктов ведут из полисилилированного канамицина А или В,содержащего от 4 до 8 триметилсилильных блокирующих групп, или полисилилированного канамицина, содержащего карбобензилоксикарбонильпую группу при

6 -аминогруппе и от 3 до 7 триметилсилильных групп и ацилирующего производного кислоты формулы I

С,Н СН ОС(О)-NH ÑH -(СН,) -СН(OH-СООН), где и имеет указанные значения., ее

N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбокси-. имидного эфира или N îêñèñóêöèíèìèäного эфира или смешанного ангидрида кислоты фор-лы I и триметилуксусной либо изобутилкарбоновой кислоты, Ацилирование ведут в среде органического растворителя, содержащего 0-57. воды, после чего блокирующие триметилсилильные группы удаляют гидрогенизацией.

7 табл, — ((й-амино-Ы-оксиалканоил) канамицина

- А или В общей формулы

1480774

n — целое число от 0 до 2 широко применяемых антибиотиков.

Цель изобретения — увеличение выхода целевых продуктов и интенсификации процесса за счет использования в процессе полисилилированных канамицинов А или В, применения в качестве ацилирующего производного кислоты общей формулы 1О

СбН СИ ОС-БИ-СН -(СН п- СН-СООН

О ОН

HONS

SAE (или

HHBA-ONS) DCU

HCDS

BSA

Дикалит где h имеет укаэанные выше значения, ee N-oxcncyxry ntmt roro эфира или

N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира, или смешанного ангидрида кислоты формулы (II) и триметилуксусной либо.изобутилкарбоновой кислоты, причем ацилированпе в среде 20 органического растворителя, содержащего от О до 5% воды. . Изобретение иллюстрируется следующими примера а .

При описании примеров использованы 25 следующие сокращения:

HONB N-Окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимид

NAE N-окси-5-норбернен(или ВНВА- -2,3-дикарбоксиимид- 30

-ОНВ) ный активированный эфир ВНВА

N-Оксисукцинимид

N-Оксисукцинимидный активированный эфир

BHBA

DCC Дициклогексилкарбодиимид

Дициклогексилмочевина ексаметилдисилазан 40

Бис(триметилсплил)ацетамид

NSA Триметилсилилацетамид

TFA Трифторацетил 45 трет-ВОС трет-Бутилоксикарбонил

Торговая марка диатомной земли

Лмберлит CG50 Торговая марка хрома- 50 тографического сорта слабокислой катионпообменной смолы карбоксиполиметакрилатного типа

55 р --Бондапак Марка для ряда высокоэффективных жидкостных хроматографических колонок.

Пример 1. Получение 1-N — (I.— — {-) - -амино- — оксибутирил) канамицина

А, (амикацина) селективным ацилирова> нием поли(триметилсилил) 6 -N-карбобензилоксиканамицина Л в безводном диэтилкетоне.

15 г 24,24 ммоль 6 — N-карбобензил1 оксиканамицина Л суспендируют в 90 мл сухого ацетонитрила и нагревают с обратным холодильником в атмосфере азота. В течение 30 мин медленно добавляют 17,5 r (108,48 ммоль) гексаметилдисилазана и полученный раствор кипятят в течение 24 ч. После отгонки рао створителя в вакууме (40 С) и полной сушки в вакууме {10 мм рт.ст.) получают 27,9 г белого аморфного твердого вещества (90,71% в пересчете на 6 -Мкарбобензилоксиканамицин Л (силил), .

Это твердое вещество растворяют в а

150 мл сухого диэтилкетона при 23 С.

11,05 г (26,67 ммоль) N-окси-5- орборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира (NAE) -(-) †(-бензилоксикарбониламин- -оксимасляной кислоты растворяют в о

100 мл сухого диэтилкетона при 23 С

l и медленно при перемешивании добавляют в течение 0,5 ч. Раствор перео мешивают при 23 С 78 ч ° Желтый прозрачный раствор (рН 7,0) разбавляют

100 мл воды. рН смеси доводят до 2,3 (3 н.НС1) и сильно перемешивают при

23 С 15 мин. Водную фазу отделяют, органическую фазу экстрагируют 50 мл воды при рН 8. Соединенные водные фракции промывают 50 мл этилацетата.

Раствор загружают в сосуд Парра на

500 мл вместе с 5 r 5%-ного палладия на угле (катализатор Энгельгарда) и восстанавливают при 50 фунт/кв,дюйм (3,5 атм) водорода при 23 С в течение 2 ч. Смесь фильтруют через слой

Дикалита, который затем промывают еще

30 мл воды. Бесцветный фильтрат упаривают в вакууме (40-45 С) до объема

50 мл. Раствор загружают в ионнообФ менную колопку CG-50 (1ЯНд) 5 х 100 см.

После промывки 1000 мл воды непрореагировавший канамицин А, 3-(?.-(-)- -амина-g-оксибутирил) канамицин А (ВВ-К29) и амикацин элюируют 0,5 н. гидроокисью аммония, Полиацильное вещество выделяют 3 и. раствором гидроокиси аммония. За ходом элюирования следят биоанализом, тонкослойной хроматографией и по оптическому вращению.

5 1480

В табл. 1 приведены данные об объеме и оптическом вращении каждой фракции элюата, а также масса и процент выхода твердого вещества, выде- ленного из каждой фракции при выпаривании досуха.

Отработанный диэтилкетон по данным высокопроизводительной жидкостной хроматографии содержит дополнительно

3-57 амикацина.

6,2 г сырого амикацина растворяют в 20 мл воды и разбавляют 20 мл метанола и для кристаллизации добавляют

20 мл изопропанола. Получают 6,0 г (45,87.) кристаллического амикацина, !

Пример 2. Получение 1-N-(Т;

-(-) - -амино-о!-окснбутирил) канамици —. на А, (амикацина) селективным ацилиро. ванием поли(триметилсилил) 6 -N-карбобензилоксиканамицина В в безводном ацетоне.

103 r 0,081 моль поли(триметилси-! лил) 6.-N-карбобензилоксиканамицина

А, полученного как в примере 1 (в пе-! ресчете на 6 -N-карбобензилоксиканамицин (силил)q), растворяют в 100 "fJI сухого ацетона при 23 С. 35,24 r (0,085 моль) N-окси-5-норборнен-2,3дикарбоксиимидного эфира L (-)-11-бен- ЗО зилоксикарбониламин-оС -оксимасляной кислоты (NAE) растворяют в 180 мл суо хого ацетона при 23 С и медленно при сильном перемешивании добавляют к раствору поли(триметилсилил) 6 -N-карбо- 35

I бензилоксиканамицина А в течение

15 мин. Раствор перемешивают при 23 С

20 ч в атмосфере азота. Светло-желтый прозрачный раствор (pH 7,2) разбавляют !00 мл воды, рН смеси доводят до. 4о

2,5 (3 н ° НС1) и перемешивают 15 мин о при 23 С. Ацетон отгоняют в вакууме а при 35 С. Раствор загружают в сосуд

Парра вместе с 10 г 57.-ного палладия на угле (катализатор Энгельгарда) и восстанавливают при 40 фунт/кв,дюйм (2,8 атм) 2 ч при 23 С.Смесьфильтруют через слой диатомной земли, который затем промывают еще 50 мл воды.

После упаривания до 1/3 объема раствор (рН 6,9-7,2) загружают в ионнообмепную колонку CG 50 (NH ) 6 х 110 . ;м

4 и элюируют с градиентом от Н О до

0,6 н. гидроокиси аммония для выделения амикацина. За ходом элюирования следят с помощью автоматического по-. ляриметра. Комбинации делают на основе данных тонкослойной хроматографии.

Соединенные амикациновые фракции упа774 ривают до 25-ЗОБ твердых. } аствор разбавляют равньи объемом метанола, I затем двумя объемами изопропанола для инициирования кристаллизации. Выделяют 18,2 r (407) кристаллического амикацина. Выделение 127 канамицина

А, 407 ВВ-К29 и 5i полиацил рованного канампцина дало материальный баланс

977.

Пример 3. Получение 1-N †; — (-)- -амино — Ы.-оксибутирил) канамицина А (амикацина) селективным ацилированием поли (трцметилсилил) канамицина А, с применением блокирования

in заец.

А. Поли(триметилсилил) канамицин А.

18 r (37,25 ммоль) свободного ос— нования канамицпна А суспендируют в

200 мл сухого ацетонитрила и нагревают с обратной перегонкой. В течение

30 мин добавляют 29,8 г (184,6 ммоль) гексаметилдисилазона, смесь перемешивают с обратной перегонкой 78 ч и получают светло-желтый прозрачный раствор. После отгонки растворителя в вакууме остается 43 r (94K) аморфного твердого вещества (в пересчете на канамицин А (силил)„,), Б. 1-N-(L-(-)- -амино-о -оксибуририл1канамицин А.

5,56 r (20,43 ммоль) и-(бензилоксикарбонилокси)бензойной кислоты суспендируют в 50 мл сухого ацетонитрила при 23 С. Добавляют при хорошем перемешивании 8,4 г (41,37 ммоль) N,О-бистриметилсилилацетамида, Раствор выдерживают в течение 30 мин при 28 С, затем добавляют в течение 3 ч при сильном перемешивании к раствору .

21,5 r (17,83 ммоль) поли(триметилсилил)канамицина А (в пересчете на соединение (силил)„,) в 75 мл сухого ацетонитрила при 23 С. Смесь перемешивают 4 ч, растворитель отгоняют о в вакууме (40 С) и маслянистый остаток растворяют в 50 мл сухого ацетона при 23 С.

К указанному выше раствору в течение 5 мин добавляют 8,55 r (20,63 ммоль) N-окси-5-норборнен-2,3дикарбоксиимидного эфира Е-(-)-g-бензилоксикарбониламин-oL-îêñèìàñëÿной кислоты (NAE) в 30 мл ацетона. о

Смесь выдерживают при 23 С в течение

78 ч. Раствор разбавляют 100 мл воды и Рн снижается с 7,0 до 2,5 (6 н.

НС1). Смесь помещают в сосуд Парра вместе с 3 г 57.-ного палладия на угле

1480774 (катализатор Энгельгарда) и восстанавливают при 40 фунт/кв.дюйм (2,8 атм) водорода в течение 2 ч при

23 С. Смесь фильтруют через слой ди5 атомной земли, который затем промывают 20 мл воды. В объединенных фильтрате и промывках (168 мл) определяют активность микробиологическим анализом против Е. со1г. и устанавливают, 10 что в них содержится около 1 6400 мкг/мл (выход 197.) амикацина.

Пример 4. Получение 1-N-(Ь— — (-)- -амин-<&-оксибутирил) канамицигга

А (амикацина) селективным ацилированием поли(триметилсилил) канамицина А.

A. Поли(триметилсилил)канамицин A.

Суспенэию 10.г (20,6 ммоль) канамицина A в 100 мл сухого ацетонитрила и 26 мл (119 мыоль) l,l,l,3,3,3-гекса-. метилдисилазана нагревают с обратным холодильником в течение 72 ч. Получают прозрачный светло-желтый раствор.

Этбт раствор упаривают досуха в вакууме при 30-40 С, Получают 21,3 r по- 25 ли(триметилсилил)канамицина А в виде светло-коричневого аморфного порошка (выход 857. в пересчете на канамицин А (силил),О) .

Б. 1-N-(L-(-)-II-амино-о ;оксибутирил)канамицин А.

К раствору 2,4 r (2,0 ммоль) поли(триметилсилил)канамицина А в

30 мл сухого ацетона медленно добавляют 2 ммоль И-окси-5-норбернеп-2,3дикарбоксиимидногo (NAE) L ()« 35

- -бензилоксикарбониламин-с ;оксимасляной кислоты в 10 мл сухого ацетона при 0-5 С. Реакционную смесь перемешивают при 23 С в течение недели, 40 о упаривают досуха в вакууме при температуре бани 30-40 С. Затем к остатку добавляют 60 мл воды, затем 70 мл метанола и получают раствор, который подкисляют 3 н. EIC1 до рН 2 и восстанавливают при 50 фунд/кв.дюйм (3,5 атм) водорода в течение 2 ч, применяя в качестве катализатора

500 мл 5Х-ного палладия па угле..

Смесь фильтруют, в объединенных фильтрах и промывках определяют активность 50 микробиологическим анализом против

Е. coli и находят, что в них содер жится 29,47. амикацина.

Пример 5. Получение ампкацина селективным N-ацилированием поли (триметилсилил) 6 -N-карбобензоксиканамицина в безводном ацетоне.

Силилирование 6 -N-карбобензокси

Кана А в ацетойитриле с помощью гексаметилдисилаэана (ERG)S) дает промежуточпый 1 6-N-карбобенэокси Кана А (силил) . Этот силилированный Кана А хорошо растворим в большинстве органических растворителей, Ацилирование

NAE в безводном ацетоне при 23 С с помощью 57-иого молярного избытка NAE по отношению к 6 -N-CbZ Кана А дает г смесь, содержащую только производное

CbZ амикацина и ВВ-К29, некоторое количество Кана A n немного полиацильного вещества. В этих опытах »е обнаруживали ВВ-К11. Элюирование смеси ацетона и ацилированной смеси после восстановления и обработке из колон+

Э ки с СС-50 (ИН4) с помощью градиента гпдроокиси аммония, дает выход чистого амикацина порядка 40Х.

A. Получение 6 -N-карбобенэилоксиканамицина А (силил) (6 - N-CbZ Ka9 на A (силил) q ) .

Суспендируют 50 г б -И-карбобензилоксиканамицина А (KF 47) в 300 мл ацетонитрила (КГ (0,01Х). Нагревают

О до обратной перегонки (74 С) и подают ток сухого азота через суспензию.

Медленно в течение 30 мин добавляют 75,8 мг гексаметилдисилазана (HMDS).

Полное растворение происходит с вьщелением газообразного аммиака.

Продолжают нагревание с обратной перегонкой в течение 18-20 ч в токе азота.

Светло-желтый прозрачный раствор упаривают в вакууме (температура бани

40-50 С) до пенистого осадка. ПолуО чают 89-92 r (силильного) соединения

9 (90-947 от теории).

B других опытах с растворителем это вещество выделяют и прямо используют для ацилирования.

Б. Получение М-окси-5-норборнен2,3-дикарбоксиимидного эфира Ь-(-)- -карбобензилоксиамин-о -оксимасляной кислоты (ИАЕ).

Растворяют 21,5 г L-(-)-g-карбобензилоксиамин-Ы.-оксимасляной кислоты (ВНВА) в 100 мл сухого ацетона при о

23 С, затем растворяют 15,2 г N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимида (EI0NB). Получают .раствор. В течение

30 мин добавляют раствор 17,48 г дициклогексилкарбодиимида (ДСС) в 50мл ацетона при перемешивании, Темпера- . о тура поднимается до около 40 С во вре9 1480 мя добавления и праггсхадит осаждение дициклогексилмачевины (DCU) .

Перемешивают суспензию в течение

3-4 ч, позволяя температуре устаноо

5 виться около 23-25 С.

Удаляют производное мочениггы фильтрованием, осадок промывают 30 мл ацетона. Сохраняют фггльтрат и промывки для следующей стадии ацилирования. 10

В. Ацилиравание 6 -N-CbZ Кана А (силил)з

Растворяют выделенный в пункте А, 6 -N CbZ (силил)я в 100 мл сухого ацетона при 23-24 С. 75

При хорошем перемешивании в течение 15 мин добавляют раствор МАК из части Б. Температура постепенно повы0 шается до 40 С. Дают раствору остыть

0 до 23 С и перемешивание продолжают 20 в течение 18-20 ч н атмосфере азота.

Добавляют 100 мл воды и уменьшают рН (6,9-7,2) до 2,2-2,5 6 н. соляной кислоты. Перемешивают 15 мин при

23 С. 25

При этом может образоваться второй слой, но это не мешает дальнейшей обработке.

Отгоняют ацетон в вакууме при темО пературе бани 30-35 С. Переносят кон- 30 центрат в сосуд для гидриронания, предварительно продутый азотом. Добавляют 10 r 5%-ного палладия на угле и гидрируют при 40 фунт/кв.дюйм (2,8 атм) в течение 2-3 ч.

Смесь фильтруют через слой Дикалита, осадок и сосуд для гидрирования промывают еще 50 мл воды.

Фильтрат и промывку упаривают до около 1/3 объема (50 мл) н вакууме, 40 при 40-45 С.

774 удельное вращение

С =. 1,07

23 С Н О (гл) 589 +101,6

Выход ВВ-К29 в этой смеси составляет также 39-427, остаточного Кана А

10-14% и 1,3-ди-AHBA-Кана А около 57, что.состанляет баланс веществ 957..

Пример 6. Получение амикацина селектинным N-ацилированием поли(триметилсилил) Кана А в безводном ацетоне. и tt

Силилирование Кана А основания в ацетонитриле с помощью гексаметилдисилазана (IMDS) дает поли(триметилПроверяют рН ана должна быть в диапазоне 6 9-7,2. Если рН другое, та его доводят да нужной величины

1 и. раствором гидроакиси аммапия.

Смесь загружаю-. в колонку с CG-50 (ИН,г) (6 х 110 см) .

Колонку промывают 1000 мл дистиллированной воды, затем элюируют

0,5-0,6 н. раствором гидроокиси аммония, применяя автоматический поляриметр для слежения за ходам элюирования. Порядок элюиронания счедующий:

Остаточный Кана А -+ БВ-К29 — + Амикацин.

E наших продуктах ацилипования не обнаружено ВВ-К11. Палиацильное вещества, например 1,3-ди-AHBA аналог

Кана А, ныпеляют промывкой копонки

3 н. раствором гидроокиси аммония.

Соединяют амикациноные фракции и упаринают их до 25-30% твердых частиц. Разбавляют 1 объемом метанола и добавляют в качестве затравки кристаллы амикацина.

Медленно н течение 2 ч добавляют

2 объема изапропанола (ТРА) при хорошем перемешивании и кристаллизуют при

23 С в течение 6-8 ч.

Осадок отфильтровывают, промывают 50 мл смесью вода — метанол—

IPA (1:1:2) и наконец 25 мл IPA.

Сушат в.вакууме при 40 С в течение

12-16 ч. Выход 17,3-19,0 г (38-42%) амикацина со следующими свойствами.

Тонкослойная хроматография: CHC1)метанол — МН ОН вЂ” вода — (1:4:2:1), 5 х 20 см, силикагеленые пластинки фирмы Квантум Индистриз — одна зона обнаруживается нингидрином (К = 0,4).

Удельное вращение

0 1 M NH40H 0 1 М Н,804

+101,9 + 103,5 силил) Кана А. Степень силилирования еще неопределенная, но по времени считают, что это Кана А (силил) д.

Полисилилированный Кана А легко растворим в большинстве органических растворителях. Ацилирование ЯАЕ в о безводном ацетоне при 23 С при малярном отношении SAE к Кану А 1:1 дает смесь, содержащую производные CbZ амикацина и ВВ-К29, обычно в отношении 2-3/1; ВВ-К6 (аколо 5-87), непро

14807

11 реагировавшего Кана А (15-?07) и небольшое количество полиацильного вещества (около 5-101). По ацилированию политриметилсилил 6 -N-карбобензокси

Кана А не было обнаружено ВВ-К11.

Восстановление и обработка ацетоновой ацилированной смеси с последующей хроматографией на колонке с CG-50 (NH4) с помощью 0,5 н. раствора гидроокиси 10 аммония дают кристаллический амикацин с выходом 34-397.

А. Получение Кана Л (силил)„.

Суспепзию 50 г Кана А ".основания" (КГ 2,5-3,57) в 500 л»л ацетонитрила (КУ (0,0147) нагревают до обратной

D перегонки (74 С) н токе сухого азота. пропускаемого через суспензию.

В течение 30 мин медленно добавляют 112 мл гексаметилдисилазана (НГПБ).,20

Полное растворение происходит за 4-.

5 ч с выделением газообразного ал»»лиака.

Кипячение с обратным холодильником продолжают в течение 22-26 ч в атмо" 25 сфере азота.

Прозрачный светло-желтый раствор упаривают в вакууме (40 С) до сиропообразного остатка. Его прол»ывают еще

100 л»л ацетонитрила и полностью сушат др в высоком вакууме н течение 3-6 ч, Выход беловатого аморфного осадка составляет 109-115 r (90-95% от теории, рассчитано на Кана Л (силил) о )..

Б. Получение N-оксисукцинпмидного дб эфира L-(-)-g-карбобензилоксиамин-, оксамасляной кислоты (SAE).

Растворяют 100 г 1,-(-)-»ь-бензилоксикарбониламин-» -оксимасляной кислоты (ВНВА) и 45,38 r N-оксисукцин-. i»р имида (N-HOS) в 1300 л»л этилацетата (KF < 0,057) при перемешивании при

23 С.

Растворяют 81,29 г дициклогексил- карбодиимида (ДСС) в 400 мл этилацета- 46 та (KF 0,057) при 23 С. При хорошем перемешивании этот раствор в течение

30 мин добавляют к раствору из стадии

A. Температура поднимается до 40-42 С при одновременном выпадении в осадок дициклогексилмочевины (DCU). Суспензию перемешивают 3-4 ч давая темпе» ратуре установиться при 23 С.

Отфильтровывают DCU осадок промывают 250 мл этилацетата (КГа0,05%) .; ВВОсадок DCU выбрасывают. Сохраняют фильтрат и промывки.

Упаривают фильтрат и промывки до

500 мл (в вакууме при 30-35 С). Выкрпсталлизовывается небольшое количество продукта, Концентрат переносят в соответствующий сосуд и при сильном перемешинании добавляют 100 мл гептана. Если нужно, то добавляют н качестве затравки .кристаллы SAE Кристаллизация начинается сразу. Суспензию перемешивают 30 мин при 23 С °

В течение 30 мин добавляют 400 мл гептана и перемешивают 4-5 ч при

23 С.

Осадок отфильтровывают и промывают 200 л»л смеси гептана и этилацетата (3;1), затем 100 мл гептана.

Сушат в вакуумной печи при 30-35 С в течение 18-20 ч. Выход 110,1

131,4 r (80-957), т.пл. 119 †1 С, размягчение 114 С, Тонкослойная хроматография — 4 ацетон: 12 бензол: 1

Cfl. СООН обнаружение: 17 водный КИО,».» х П y " 0,7 для SAE" 0,2 ВНВА на предварительно насеченных силикагельных пластинках фирмы Аналтех Инк.

В. Лцилиронание Кана A (силил)„ .

Растворяют Кана А (силил) „, выделенньп» н части А примера 4, в

500 мл сухого ацетона при 23 С.

При сильном перемешинании быстро добавляют SAE, полученный в части Б (35,03 r), в виде 10%-ного раствора в сухом ацетоне в течение 5-10 мин. о

Температура поднимается на 5 C расто, вору дают стоять до температуры 23 С и в течение 18-20 ч продолжают перемешивание.

Светло-оранжевый прозрачньп» раствор разбавляют 400 мл воды и рН доноднт с 7,0-7,5 до 2,2-2,5 3 н. НС1.

Прозрачный раствор снова перемешивают о при 23 С н течение 15-30 мин.

Отгоняют ацетон и вакууме при температуре бани 30-35 С (может отделитьо ся небольшое количество вещества, но

I это не мешает). Концентрат переносят в соответствующий сосуд для гидриронания, Добавляют 10 r 57.-ного палладия на угле и гидрируют при 50 фунт/кв. дюйм (3,5 атм) в течение 2-3 ч °

Смесь фильтруют через Дикалит и промывают сосуд для гидриронания и осадок еще 2 х 50 мл воды.

Упаривают фильтрат и промывки до около 1/3 объема (150-165 мл) в вакууме при 40-45 С. рН при этом составляет 6,0-7,0..

Смесь загружают н колонку с CG-50 . (%14) размером 6 х 110 см.

14807 /4

Колонку промывают 1000 мл дистиллированной воды. Элюируют 0,5 н, гидроокисью аммония с применением автоматического поляриметра для слежения за ходом элюирования. Ниже приводится порядок элюировапия:

Оставшийся Кана Л - ВВ-К6 — + ВВ-К29

-ФАмикациEE.

В опь|тах не обнаруживали ВВ-К11 °

Соединяют амикационовые фракции и вьптаривают до 25-307 твердых частиц.

Разбавляют 1 объемом метанола и вносят затравку из кристаллов ампкацина.

В течение 2 ч медленно добавляют 15

2 объема ЕРА при хорошем перемешивао нии и кристаллизуют при 23 С в течение 6-8 ч.

Отфильтровывают осадок, промывают

35 мл смеси вода — метанол — тРЛ 20 (1:i:2) и наконец 35 мл IPA.

О

Сушат в вакууме при 40 С в течение

16-24 ч. Выход 19,91-22,84 г (34-39), IR PkK и СИЯ-спектральные данные в дополнение к удельному вращению пол- 25 постыл согласовываются с нужной структурой.

Система тонкослойлой хроматографии:

СНС1 — метанол — NH OH — вода (1:4:

:Z:1) 5 х 20 мл силикагелевые пластин-30 ки фирмы Квантум Индастриз — одна зона амикацина с К =- 0,4 (нингидриновое определение).

Пример 7. Получение амикацина ацилированием поли (триметилсилил) 35

6 -N-CbZ Кана А в тетрагидрофуране с помощью смешанного ангидрида триметилуксусной кислоты и ВНВА.

А. Получение смешанного ангидрида.

5,066 r (20,0 ммоль) ВНВА, 4,068 г 40 (20 ммоль) BSA и 2,116 г (22 ммоль) триэтиламина растворяют в 200 мл вы-! сушенного молекулярными ситами тетрагидрофурана. Раствор кипятят в течео ние 2,25 ч, затем охлаждают до -10 С. 45

В течение 2-3 мин добавляют 2,412 r (20 ммоль) хлорангидрида триметилуксусной кислоты при перемешивании, коо торое продолжают 2 ч при -10 С. Затем о температуре дают подняться до 23 С. 5р

Б. Ацилип ов ание поли (триметилсилил)-6 -N-CbZ Кана А.

5,454 r (4,97 ммоль) поли(триметилсилил)-6 -N-CbZ Кана A,ïîëó÷åííîãî в примере 1 (в пересчете на 6 -СЬЕ Ка= .на А (силил)з), растворяют в 50 мл сухого (молекулярное сито) тетрагидрофурана при 23 С ° В течение 20 мин при перемешивании добавляют половину раствора смешанного ангидрида, полученного в пункте А (10 ммоль), и перемешивание продолжают 7 дней.

Затем добавляют 100 мл воды и рН доводят с 5,4 до 2,0 3 kI kI $0 . Перемешивапие продолжают в течение 1 ч EE раствор экстрагируют этилацетатом.

Полиацилированное вещество начинает кристаллизоваться и реакционную смесь фильтруют. После сушки над Р О масса выделенного твердого вещества составляет 0,702 r. Экстракцию реакционной смеси проводят 4 х 75 мл этилацетата, после чего избыток этилацетата отгойяют нз.водного слоя. Часть водного раствора анализируют с помощью высокопроизводительной жидкостной хроматографии. Полученная кривая показывает выход дп-СЬЕ ампкацина 26,47.

Затем водный слой гидрируют в аппарате Парра прп 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водорода в течение 2 ч, применяя 0,5 r 107-ного палладия на угле. Вещество фильтруют и в фильтрат и промывках определяют активность против Е, coli в них содержится

31,27 амикацина. Отношение амикацинВВ-К29 около (9-10):1; следы полиацилов и непрореагировавшего Кана А.

Пример 8. Влияние воды на получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) Кана А в ацетоо новом растворе при 23 С.

A. Безводный растворитель.

2,4 г (2 ммоль) поли(триметилсилил) Кана А, полученного в примере

3, в пересчете на Кана А (силил)„„, растворяют в 20 мл ацетона, который был высушен молекулярным ситом. Расто вор перемешивают при 23 С и в течение

10 с добавляют раствор 0,701 r (2 ммоль) SAE в 10 мл высушенного мо.лекулярным ситом ацетона, Перемешивао ние продолжают при 23, С в течение

22 ч. Ацетон отгоняют в вакууме при о

40 С и затем водный раствор восстанавливают при 51 фунт/кв,дюйм водоо рода при 23 С в течение 2 ч, применяя

1 r 107-ного палладия на угле в качестве катализатора. микробиологический анализ показывает выход амикацина

31,247.

Б. При добавлении воды к растворителю.

Повторяют стадию А, но к раствору поли(триметилсилил) Кана А добавляют

1 мл (56 ммоль) воды и перемешивают

14807

15 мин перед ацилированием БЛЕ. Микробиологический анализ показывает выход амикацина 33,8%.

Пример 9. Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил)

6 -N CbZ Кана А в ацетоне смешанным ангидридом ВНВА и изобутилкарбоновой кислоты, A. Получение смешанного ангидрида. 10

1,267 г (5 ммоль) ВНВА и 1,313 r (10 ммоль) N-триметилсилилацетамида (МБА) в 20 мл высушенного молекулярными ситами ацетона перемешивают при 23 С и добавляют 0,7 мл (5 ммоль) 15 триэтиламина (TEA). Смесь кипятят в атмосфере азота 2 5 ч. Смесь охлаж дают до -20 С и добавляют,0,751 г

i(0,713 мл, 5,5 ммоль) изобутилхлор формиата, Сразу начинает отделяться 2О хлоргидрат триэтиламина. Смесь перео мешивают 1 ч при -20 С, Б. Ацилирование, 6.215 г 6 -N-CbZ Капа А (4,9 ммоль в пересчете на соединение (силил) ) растворяют в 20 мл высушенного молекулярными ситами ацетона при перемео шивапии и температуре 23 С. Раствор охлаждают до -20 С и холодный раствор смешанного ангидрида на стадии А медленно добавляют в течение 30 мин, Реакционную смесь перемешивают еще

1,5 ч при -20 .С и 17 ч при 23 С. Затем реакционную смесь выливают в 150 мл воды при 23 С и при перемешивании рН доводят до 2,5 с 7,5 с помощью 3 н.

НС1 и перемешивание продолжают 15 мин.

Затем отгоняют ацетон в вакууме при

40 С. Часть полученного водного раствора анализируют высокопроизводитель40 ной жидкостной хроматографией. Полученная кривая показывает .выход ди-CbZ амикацина- 34,33Х.

Основную часть водного раствора восстанавливают при 50 фунт/кв,дюйм (3,5 атм) водорода при 23 С в течение

3,25 ч, применяя 2,5 г катализатора

Pa/C. Катализатор отфильтровывают, фильтрат и промывки подвергают микробиологическому анализу против Е.coli

50 и получают выход амикацина 35,0%.

Пример 10. Получение амикацина ацилированием поли (триметилсилил) —.

-6 -N-CbZ Кана А в 3-пентаноне.

30 r (23;65 ммоль, в пересчете на

6>-И-CbZ Кана А (силил) ) поли(три55 метилсилил)-6 -N-CbZ Кана А, полученного в примере 1, растворяют в

100 мл высушенного молекулярным ситом

74 16

3-пентанона, перемешивают при 23 С и в течение 40 мин добавляют

26,02 ммоль (избыток 10%) NAE. Перемешивание продолжают 113 ч при 23 С и смесь добавляют в 250 мл воды при сильном перемешивании, рН с 7,3 доводят до 2,5 3 н. НС1, смесь перемешивают еще 30 мин и 3-пентанон отгоняют о в вакууме при 40 С. Водный раствор экстрагируют 4 х. 100 мл этилацетата.

Часть водного раствора анализируют высокопроизводительной жидкостной хроматографией. Полученная кривая показывает выход ди-CbZ амикацина 46,12%.

Основную часть водного раствора восстанавливают при 51 фунт/кв.дюйм водорода (3,55 атм) при 23 С в течение 2,5 ч, применяя 3 г 10%-ного

Рд/С катализатора. Микробиологический анализ части соединенного фильтрата и и промывок показывает выход амикацина 40,24%.Основную часть восстановленной реакционной смеси упаривают в о вакууме при 40 С до объема около

100 мл и фракционируют на ионнообменной колонке CG-50 (4 дюйма х 4 фута, 101 мм х 1,2 м), содержашей около

10 л смолы. Водный раствор загружают в колонку и колонку промывают 5 л воды, вещество элюируют 0 5 н. раствором IJH40Н (затем 3 í. NH40Н для элюирования полиацилированных продуктов). Поляриметрия фракций показы.вает наличие 42,7Х амикацина, 12,0% непрореагировавшего канамицина А, 12,4%. полиацилированного вещества и

23,2% ВВ-К29.

Пример 11. Получение амикацнна ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N-CbZ Кана А в безводном циклогексаноне при различной продолжительности реакции.

А. 2,537 г (2,0 ммоль в пересчете на 6 -N-CbZ Кака А (силил) ) поли(триметилсилил) 6 -N-CbZ Кана А, полученного в примере 1, в 300 мл сухоro циклогексанона ацилируют 20 ч при

23 С раствором NAE в сухом циклогекt саноне (10,.8 мл раствора, 0,1944 ммоль/мл, 2,1 ммоль), Реакционную смесь добавляют к 150 мл воды при перемешивании и рН с 5,6 доводят до 2,5 3. н. НС1. Циклогексанон отгоняют в вакууме при 40 С и"часть оставшейся водной фазы берут на анализ жидкостной хроматографией. Основную часть водной фазы восстанавливают при 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водоро17

1480774

18 да в течение 3 ч при 23 С, применяя

1 г катализатора 107.- Pd/Ñ. Катализатор отфильтровывают и соединенные фильтрат и промывки микробиологи5 чески анализируют на амикацин.

Б. Реакцию А повторяют, но длительность реакции ацилирования увеличивают до 115 ч, вместе 20 ч, Результаты приведены в табл. 2.

Пример 12 ° Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) 6 -И-СЬЕ Кана А в безводном тетрагидрофуране при различной продолжительности реакции ° 15

A. Повторяют пример 11, но вместо сухого циклогексанона применяют сухой тетрагидрофуран.

Б. Повторяют пример 11, но вместо сухого циклогексанона применяют су- 20 хой тетрагидрофуран.

Результаты приведены в табл. 3.

Пример 13. Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N-CbZ Кана A в безводном ди- 25 оксане при различной длительности реакции.

А. Повторяют пример 11, но ацилирование ведут 44 ч в сухом диоксане.

Б. Повторяют пример 11, но ацилирование ведут 18,5 ч в сухом диоксане. Ф

Результаты приведены в табл. 4 °

p n м e p 14 ° Получение амикацина ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N CbZ Кана А в безводном диэтилкетоне при 75 С.

K перемешиваемому раствору поли(триметилсилил) 6 -N CbZ Кана А, по- 40 лученного как в примере 1 (2,537 г, 2,0 ммоль, в пересчете на 6 -N-CbZ

Кана А (силил) ), в 32 мл высушенного ситами диэтилкетона при 75 С добавляют раствор NAE (10,8 мл, 45

0,1944 ммоль/мл диэтилкетона, 2,1 ммоль) в течение 15 мин. Перемешивание продолжают при 75 С еще 3 ч, после чего смесь выливают в 150 мл воды, рН доводят до 2,8 3 н. НС1 и диэтилкетон отгоняют в вакууме при о

40 С. Анализ .части водной фазы высокопроизводительной жидкостной хроматографией показывает выход ди- CbZ амикацина 39,18 .

Основную часть водной фазы восста навливают при 49,8 фунт/кв.дюйм (3,45 атм) водорода в течение 3,25 ч о .при 23 С, применяя 1 г катализатора

Pd/С. Катализатор отфильтровывают и соединенные фильтрат и промывки анализируют микробиологическим методом на амикацин. Турбидиметрический метод показывает выход 27,84, анализ на пластинках показывает выход 28,67.

Пример 15. Получение амикацина ацилированием поли(триметилсио лил) Кана А с помощью ИАЕ 0-5 С после обратного гидролиза водой.

Л. Силилирование канампцина А с помощью HOES, применяя в качестве катализатора TNCS.

1О г канамицина А 97,6 -ной чистоты (20,14 ммоль) в 100 мл высушенного на молекулярных ситах ацетонитрила кипятят в атмосфере азота. К кипящей реакционной смеси в течение 10 мин добавляют смесь 22,76 г (141 ммоль, 7 моль на 1 моль канамиципа НМВ$) воды и 1 мл, 0,856 г (7,88 ммоль)

ТИСЯ, Нагревание с обратной перегонкой продолжают в течение 4,75 ч, затем смесь охлаждают, выпаривают в вакууме до желтого вязкого сиропа и сушат в вакууме в течение 2 ч. Выход продукта 23,8 г (97,8% в пересчете на канамицин А (силил), )., Б. Ацилирование.

23,8 г (20,14 ммоль) поли(триметилсилил) канамицина А, полученного в стадии А, растворяют в 250 мл высушенного молекулярными ситами ацетона, о затем охлаждают до 0-5 С. Добавляют при перемешивании 3,63 мл (201,4 MMQJIb>

10 моль на 1 моль полисилилированного канамицина А) и смеси дают стоять при умеренном вакууме 30 мин. В теI чение меньше 1 мин добавляют

19,133 ммоль (0,95 моль на 1 моль полисилилированного канамицина А) NAE в 108,3 мл ацетона. Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0-5 С, разбавляо ют водой, рН доводят до 2,5 и ацето отгоняют в вакууме. Водный раствор восстанавливают при 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водорода при 23 С в теченйе

2,5 ч, применяя 2 r 10 -ного Pd/Ñ в качестве катализатора. Восстановленную смесь фильтруют через Дикалит, упаривают до 100 мл в вакууме при о

40 С и загружают в колонку с CG-50 (NH ) (6 л смолы 5 х 100 см).Ее про-Ф мывают водой и элюируют последовательно.0,6 — 1 — 3 н. растворами

NHg0H. Получают 60,25 . амикацина, 4,37 BB-K26, 4,35% ВВ-К29, 26,47 канамицина А и 2,18 полиацилов.

774

19 1480

П р и и е р l6. Получение амикацпна ацилированием поли(триметилсилил) 6 -N-СЬЕ Кана A с помощью SAE при 0-5 С после обратного гидролиза.

А. Силилирование 6 — N-CbZ канамицина А, 20 r (32,4 ммоль) 6 -N-CbZ канамицина А в 200 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила нагрева- 10 ют с обратной перегонкой в атмосфере азота. В течение 10 мин добавлятот

47,3 мл (226,8 ммоль, 7 моль на 1 моль

6 -N-CbZ Кана A) метанола и нагрева— ют с обратной перегонкой 20 ч. Затем 15 смесь охлаждают, упаривают в вакууме и сушат в высоком вакууме в течение

2 ч; получают 39;1 r белого аморфного твердого вещества (выход 95,4Х в пересчете на 6 -N-ГЬХ Кана Л (силил)>).

Б. Ацилирование.

39,1 r (32,4 ммоль) поли(триметилсйлил) 6 -И-CbZ Кана А, полученного в стадии А растворяют в 400 мл сухо- Z5

Э о го ацетона при 23 С и перемешивании.

Добавляют 6,6 мл (162 ммоль, 5 моль на 1 моль полисилилированного 6 -N-CbZ о

Кана А) и смесь перемешивают при 23 С в течение 1 ч при сильной продувке 80 азотом. Смесь охлаждают до 0-5 С, и добавляют раствор 11,35 г (32,4 ммоль)

SAR в 120 мл предварительного охлажденного сухого ацетона. Смесь перемешивают еще 3 ч при 0-5 С, затем помео 35 щают в термостат при 4 С. на одну неделю, Добавляют 300 мл воды, рН доводят до 2,0, смесь перемешивают 1 ч, ацетон отгоняют в вакууме ° Полученный водный раствор восстанавливают при

54 фунт/кв.дюйм (3,7 атм) водорода при 23 С в течение 17 ч, применяя 3 г

10Х-ного Pd/С в качестве катализатора.

Затем смесь фильтруют через Дикалит, упаривают в вакууме до 75-100 мл,: 45 загружают в колонку с CG-50 (NEi4) и элюируют водой и 0,6 н, раствором

NEE40H. Получают 52,527 амикацина, 14;5% BB-K29, 19,6% канампцина и

1,71% полиацилов.

Пример 17. Получение амика цина ацилированием пали(триметилсилил)

Кана А с помощью БАЕ при 0-5 С после обратного гидролиза водой.

А. Силилировапие канамицина А PCS в ацетонитриле, применяя тетраметилгуанидин в качестве акцептора кислоты, 4,88 r, (l0.07 ммоль) амикаци а Л суспендируют при 23 С в 100 мл высушенного на молекулярных ситах ацетонитрила и перемешивапии. К перелтешиваемой суспензии добавляют 16,234 г (140,98 ммоль, 14 моль на l моль канамицина A) тетраметилгуанидина (ТМС), Смесь кипятят в течение 15 мин, добавляют 15,32 г (140,98.ммоль, !4 моль на 1 лтотть канамиципа Л) ТИСБ. Образуется белый осадок TE EG НС1 после того, как добавили половину TNCS. Смесь охлаждают до комнатной температуры, выпаривают до липкого остатка и сушат в высоком вакууме 2 ч. Остаток растирают с сухим THE (100 мл) и нерастворимую соль ТМС НС1(отфильтровывают и промывают 5 х 20 мл ТНГ. Фильтрат и промывки соединяют и упаривают в о вакууме при 40 С до липкого остатка, сушат в высоком вакууме 2 ч. Получают

10,64 г светло-кремового липкого остатка (выход 87,67. в пересчете на канамицин Л (снлил), ).

Б. Ацилирование.

10,64 г (10,07 ммоль) поли(триметилсилил) канамицина Л из стадии А растворяют в 110 мл высушенного молекулярными ситами ацетона при перемео шивании и температуре 23 С, затем рао створ охлаждают до 0-5 С. Добавляют

1,81 мл (100„7 ммоль, 10 моль тта

1 моль полисилилированного Кана А) воды и раствор перемешивают 30 мин в умеренном вакууме. В течение 1 мин добавляют 3,7 г (10,57 ммоль, 5% избытка) БАЕ в 40 мл предварительно охлажденного сухого ацетона и смесь перемешивают в течение 1 ч. Смесь обрабатывают по общей методике примера

16 Б и получают около 507 амикацина, 107 ВВ-К29, 5-8% ВВ-К6, 207 канамицина A и 5-8Х полиацилов.

Пример 18. Получение поли(триметилсилил) канамицина Л в пиридине с помощью HM3S, 10,0 г (20,64 ммоль) канамицина Л суспеттдируют в 100 мл высушенного молекулярными ситами све>кеперегпанного о пиридина при 23 С. Начинают продувку азотом и суспензию нагревают до кипения. Добавляют 17,33 r (107,3 ммоль, 5,2 моль на 1 моль канамицина А) НМОБ в течение 10 мин и смесь кипятят в течение 19 ч. Затем ее охлаждают до комнатной температуры, упаривают в вакууме до светло-желтого золотистого сиропа и сушат в высоком вакууме до белого аморфного твердого вещества.

80774

2! 14

Получают 22,1 г (выход 9,67 в пере: счете на канамицин А (силил) ю ) .

П р и и е р 19. Получение поли(триметилсилил) канамицина A с помощью триэтилхлорсилана с триэтиламином в качестве акцептора кислоты.

5 r (10,07 ммоль, 97,6Х-ной чистоты) канамицина А суспендируют при

23 С в 100 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила. Добавляют

33,8 мл (24,5 r, 241,7 ммоль) триэтиламина (TEA) и суспензию кипятят.

В течение 20 мин добавляют раствор

23,7 мл (21,3 г, 140,98 ммоль) трихлорэтилсилана в 25 мл сухого ацетонитрила. Кипячение продолжают еще

7 ч и смесь охлаждают до комнатной температуры, после чего выделяются длинные тонкие иглы TEA НС1. Смесь выдерживают при комнатной температуре:около 16 ч, упаривают в вакууме

0 при 40 С до липкого твердого вещества и сушат 2 ч в высоком вакууме до образования оранжевого липкого твердого вещества. его растирают с 100 мл сухого THF при 23 С и отфильтровывают нерастворимую соль ""EA НС1, промывают

5 х 20 мл THF, сушат и получают 16 г

ТЕА НС1. Фильтрат и промывки соединяют и упаривают в вакууме до твердого остатка, который сушат в высоком вакууме 2 ч. Получают 19,3 r поли(триэтилсилил) канамицина А в виде оранжевого вязкого сиропа.

Пример 20. Получение поли(триметилсилил)канамицина А с помощью триметилсилилмочевины.

10 г (20,58 ммоль, 977. †н чистоо ты) канамицина А при 23 О суспендируют в 200 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила при перемешивании.

К суспензии добавляют 29,45 г (144,01 ммоль, 7 моль на 1моль канамицина Л) бис-триметилсилилмочевины (BSU) и смесь кипятят с обратным холодильником в токе азота в течение

17 ч, затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, Отфильтровывают небольшое количество нерастворимого вещества, промывают 3 х 10 мл ацетонитрила и сушат (1,1381 г). ИКспектр показывает, что это BSU и небольшое количество непрореагировавшего канамицина А. Фильтрат и промывки о соединяют и охлаждают при 4 С в течение 16 ч. Выпавший осадок (7,8 r) отделяют и ИК-спектр показывает, что это BSU плюс мочевина. Светло-желтый фильтрат и промывки упарнвают в вакууме при 40 С и сушат в высоком вакууме, получают 27 r белого твердого вешества, частично липкого, частично в 5 виде иглоподобных тонких кристаллов.

Осадок обрабатывают 150 мл гептана о при 23 С, нерастворимую часть отфильтровывают, промывают 2 х 50 мл гептана, 1р сушат и получают 6,0 г белых кристаллов (ИК-спектр показал, что это BSU плюс мочевина). Соединенные фильтрат и промывки упаривают в вакууме при

40 С и сушат в высоком вакууме 2 ч, получают 20,4 r белых кристаллов.

ИК-спектр которых типичен для полисилилированпогo канамицина А. Расчеты показывают, что продукт содержит в сред" нем 7,22 триметилсилильные группы.

Пример 21. Получение амикацина ацилированием пер-(триметилсилил) канамицина А после частичного десилилирования 1,3-бутандиолом.

А. Получение пер-(триметилсилил) канамицина А.

10 r (20, 639 ммоль) канамицина А о суапендируют при 23 С в 100 мл высушенного молекулярными ситами ацетонитрила при перемешивании. Суспензию нагревают с обратной перегонкой в атмосфере азота и в течение 10 мин добавляют 23,322 r (144,5 ммоль, 7 моль на 1 моль канамицина А) ЕП)Я. Обратную перегонку продолжают 16 ч, затем

35 смесь охлаждают до комнатной температуры, упаривают в вакууме и сушат

2 ч в высоком вакууме. Получают 24,3 r белого липкого остатка (выход 92 1Е в пересчете на канамицин А (силил) н ).

Б. Ацилирование.

24, 3 r пер- (триметилсилил) канамицина А, полученного в стадии А, при о

23 С растворяют в 240 мл высушенного молекулярными ситами ацетона при пере45 мешивании. К этому раствору добавляют

9,25 мл (103,2 ммоль, 5 моль на 1 моль пер-(триметилсилил)канамицина А) 1,3-бутандиола. Смесь перемешивают при о

23 С 2 ч в токе азота и охлаждают до, о

0-5 С. В течение 1 мин добавляют

7,23 г (20,64 моль) SAE в 70 мл предварительного охлажденного ацетона.

Смесь перемешивают при 0-5 С в течео ние 3 ч и выдерживают при 4 С в тече ние 16 ч. Добавляют 200 мл воды, рН доводят до 2,5 и прозрачный желтый о раствор перемешивают при 23 С в тече ние 30 мин. Ацетон отгоняют в вакууме

:и водный раствор восстанавливают при

23 14

55 фунт/кв.дюйм (3,7 атм) водорода о при 23 С в течение 2 ч, применяя 3 r

10%-ного Pd/Ñ в качестве катализатора

Восстановленный раетвор фильтруют через Дикалит, хроматографируют как в примере 16 Б и получают 47,05% амика цина, 5,8% ВВ-К29,, 7,32% ВВ-Кб, 24,26% канамицина А и 7,41% полиациI лов.

Пример 22. Получение амика-. цппа ацилированием поли(триметилсилил канамицина А, полученного в TIIF, с помощью $ЛЕ с катализатором — сульф амиповой кислотой, К кипящей смесгг 5 г (10,32 ммоль) каггамицигга А и 50 мл высушенного молекулярными ситами ТНЕ добавляют

100 мг сульфамнновой кислоты и 12,32 г

"(76,33 ммоль) НМ0$, Смесь кипятят

18 ч полное растворение про1гсходггт о через 6 ч. Раствор охлаждают до 23 С обрабатывают О, 1 кл воды >i иьндсржьгва— ют при 23 С в течение .30 мин. В течеI—ние 30 мин добавляют раствор 3,61 r (10,3 ммоль) SAE в 36 мл THI- . После перекешивания в течение 3 ч смесь разбавляют 100 мл воды, рН доводят

2, 2 1 0%-ной cþ 0É кисгготой. Смесь о перемешивают 30 мин при 23 С, выпаривают в вакууме для отгонки ТНГ. Полученный водный раствор восстанавливают при 50 фунт/кв.дюйм (3,5 атм) водороо да при 23 С в течение 2 ч, применяя

10%-ный Рс1/С. Восстановленный раствор отфильтровывают через Дикалит, осадок промывают водой. Фильтрат и промывки

I (150 мл) анализируют микробиологическим методом против Е. со1г., которые показали, что в них содержится

1225 мкг/кг (выход 31,5% активности) ,амикацина.

П р и и е р 23. Получение амикацина ацилированием поли(трикетилси-. лил) канамицина А с помощью И-оксисукцинимидного эфира дикарбобензилокси АНВЛ, Л. Получение И-оксисукципимидного эфггра дикарбобензилокси L-(-)- ;акино-о токсимасляной кислоты.

8 r (20,65 ммоля) дикарбобензилокси L-(-)-oL-амшг- -оксимасляной кислоты и 2,37 г (20,65 ммоль) И-оксисукципимида растворяют при 23 С в

50 мл сухого ацетона, 4,25 г (20,65 ммоль) дициклогексилкарбодиими да растворяют в 20 мл сухого ацетона и добавляют к полученному раствоо ру, всю смесь перемешивают при 23 С

80774 в течение 2 ч. Дициклогексилкочевину отфильтровывают, осадок промывают

10 мл сухого ацето|га, фильтрат и про мывку объед>гггяют.

Б. Лцилирование.

Поли(триметилсилил) канакицина Л полученньпг по методике примера ?1 из 10 г (20,639 кмоль) канамицина Л, 1ð растворяют в 100 мл сухого ацетона.

Раствор охлаждают до 0-5 С, добавля) ют 3,7 мл дистиллированной воды и раствор перемешивают при 0-5 С в течеггие 30 мип в умеренном вакууме. К этому раствору добавляют раствор блокированного дп-CbZ ацилирующего реагента, полученного в стадии Л, и смесь перемешивают при Π†5 30 мин.

Смесь разбавляют водой, рН доводят

20 до 2,2 и ацетон отгоняют в вакууме.

Водный раствор восстанавливают по общей методике примера 22, :затем фильтруют через Дикалит. Хроматография показывает нани гне 40-45% амикацина, 2 10% BB — К29, следы В — Кб, около 30% канамицина Л и небольшое количество полиацилов.

П р и к е р 24. Получение поли(трикетилсилил) канакицина Л с помощью

$0 НП3$ и икидазола в качестве катализатора, 11 г (22,7 ммоль) канамицина А и

100 мл имндазола нагревают с обратным холодильником в 100 мл сухого ацетонитрила в токе азота. В течение 30 мин

35 добавляют 18,48 г (114,5 кмоль, 5 моль на 1 моль канамицина Л) IIMDS и смесь кипятят 20 ч. Полное растворение происходит через 2,5 ч. Раствор . О охлажг1ают до 23 С, растворитель отгоняют в вакууме и получают 21,6 г поли(триметилсилил)канамицина A в ви— де пенистого остатка (выход 93,1%, в пересчете на канакицин А (силил)„ ).

Пример 25. Получение 1-N45

-tL-(-) -II -àìèHî-Ы-оксибутирил|канамицина В (В — К26) ацгглированием поли— (триметилсилил) канамицина В с помощью

SAE.

А. Получение поли(триметилсилил) канамицина В с помощью ЕП3$ и катализатора ТИС$.

25 г (51,7 ммоль) канамицина В в

250 мл высушенного молекуггярными си55 тами ацетонитрила кипятят в токе азота. В течение 30 мин добавляют 62,3 г (385,8 ммоль, 7,5 коль на 1 коль канамицина В) HMDS, затем 1 мл ТМС$ в качестве катализатора. Смесь кипя26

1480774

25 тят 21 ч, полное растворение через

1 ч. Затем растноритель отгоняют в о вакууме при 60 С и маслянистый остаток

О выдерживают прп 60 С в высоком выкуу5 ме 3 ч, Получают 53,0 г поли(триметилсилил)канамицнна В (ныход 85,27 в пересчете на канамицин В (силил), )

Б. Ацилирование.

53 г поли(триметилсилил)канамици- 1п на В, полученного в стадии А, раство- . о ряют в 500 мл сухого ацетона при 0-5 С, добавляют 20,9 мл метанола и смесь о перемешивают н вакууме при 0-5 С в течение 30 мин. В течение менее 1 мин 15 добавляют раствор 18,1 r (51,67 ммоль)

SAE в 200 мл предварительного охлажденного сухого ацетона и смесь пере= о мешивают 30 мин при 0-5 С. Смесь обрабатывают по методике примера 22 и 2р загружают в колонку с СС-50 (ИН")

4 (8 х 120 см) и элюируют градиентом

1HI4OH с 0,6 н. до 3 н. Получают

387 ВВ-К26, 57 соответствующего 6

-N-ацилированного канамицина В 25 (ВВ-К22), 107 соответствующего 3-N-ацилированного канамицина В (ВВ-К46), 14,637 канамицина В и небольшое количестно полиацилированного канамицина В. 30

Пример 26. Получение поли(триметилсилил) канамицина А с помощью

HMDS с катализатором сульфатом канамицина А.

19,5 г (40,246 ммоль) канамицина А и 0,5 r (0,858 ммоль) сульфата канамицина А (всего 20,0 r, 41 0 ммоль) в 200 мл сухого ацетонитрила нагревают с обратной перегонкой. Медленно добавляют 60,3 г (287,7 ммоль, 7 мбль 40 на 1 моль канамицина А) HMDS и нагревают с обратной перегонкой 28 ч. Затем ее отгоняют досуха на роторном испарителе и сушат в вакууме. Получают 47,5 r поли(триметилсилил) канамицина А в виде светло-желтого масла (выход 95,8 в пересчете на канамицин А (силил) q). ироп анализируют с троиным понто 50 ром на процент содержания Si методом атомно-абсорбционной спектроскопии; результаты составили 20,8, 22.4 и

21,2%, среднее значение 21,57. Теоретическое процентное содержание Si для каждой возможности составляет: силил 11 = 24,1; силил 10 = 23,3; силил 9 = 22,2; силил 8 — 21,1; силил 7 = 19,8; силил 6 = 18,3.

Основываясь на приведенном, можно утнерждать, что содержание силила в продукте примера 26 фактически соответствует диапазону силила 8 — 9, а не теоретическому силилу 10.

Пример 27. Получение амикацина ацилированием поли(триметилси- лил)канамицина А с помощью блокированного N òðèôòîðàöåòèë N oêñèñóêöèíимидного эфира AHBA.

А. Получение И-трифторацетпл АНВА и превращение ее н N oêñèñóêöèíèìèäный эфир.

К суспензии 5 г (42, ммоль) AHBA н 100 мл THF добавляют 40 r (191 ммоль) трифторуксусного ангидрида при перемешинании в течение 10 мин. Раствор перемешивают 18 ч при 23 С и выпарио вают досуха н вакууме при 50 С. Остаток растворяют в 100 мл водного метанола (1:1) и перемешивают 1 ч. Затем раствор выпаривают досуха н вакууме и снова растворяют в 50 мл воды. Водный раствор экстрагируют 3 х 50 мл

HIBK и после сушки сульфатом натрия экстракты выпаривают до масла. Следы растворителя удаляют добавлением и отгонкой 4 мл воды. После стояния масло превращается в парафинообразное кристаллическое вещество (выход 287, 2,5 г).

2.4 г (11,3 ммоль) N-трифторацетил AHBA растворяют и 50 мл сухого ацетона и к раствору добавляют 1,3 г (11,31 ммоль) N-оксисукцинимида,медленно добавляют раствор 2,33 г дициклогексилкарбодиимида.в 20 мл сухого ацетона. Реакционную смесь перемешио вают 2 ч при 23 С и выпавшую дициклогексилмочевину отфильтровывают и промывают небольшим количестном ацетона.

Объединенные фильтрат и промывки (раствор N-оксисукцинимидного эфира

N-трифторацетил АНВА) используют в следующей стадии без выделения.

Б. Ацилирование.

В раствор 11,31 ммоль поли(триметилсилил) канамицина А, полученного в примере 23, в 54 мл ацетона добавляют 2 мл (113,4 ммоль) воды и смесь о перемешивают в вакууме при 0-5 С в течение 30 мин. К смеси добавляют

11,31 ммоль N oêñèñóêöèíèìèäíîrо эфира N-трифторацетил АНВЛ из стадии о А и смесь выдерживают при 5 С н течение 1 ч. рН доводят до 2,0 20Х-ной серной кислотой, смесь перемешивают

30 мин и рН увеличивают до 6,0 раст1480774

27

28 вором NH+OH. Смесь упаривают досуха на роторном испарителе и получают

14,4 г липкого грязно-белого вещества. Его растворяют в 100 мл воды, рН

5 увеличивают с 5,9 до 11„0 10 н. раствором NEE OFE раствор нагревают на масляной бане при 70 С в течение 1 ч.

Затем рН снижают с 9,5 до 7,0 добавлением ггС1,раствор фильтруют для уда- 10 ления небольшого количества нерастворимых веществ и фильтр промывают водой. Объединенные фильтрат и промывки (188 мл) загружают в колонку с CG-50 (NH ) (8 х 90 см), промывают

2 л воды и элюируют градиентом NH4OH

0,6 н. — 1,0 и.. — концентрированный раствор. Получают 28,9% амикацина, 5,0% ВВ-К6, 43,87. канамицина Л, 3,257 полиацилов плюс 14,37 неизвестного вещества в первой фракции.

Пример 28, Получение амикацина. ацилированием поли(триметилсилил)канамицина А с помощью блокированного трет-бутилоксикарбопилом N—

-оксисукцинимидного эфира AHBA.

A. Получение трет-ВОС AHBA и превращение в его N-оксисукцинимидный эфира

Раствор 5 г (42 ммоль) АНВЛв 100 мл30 воды и 20 мл ацетона доводят до рН

10 10 н ° раствором NaOH. В течение

3-4 мин добавляют 11,6 г (53 ммоль) ди-трет-бутилдикарбоната и раствор перемешивают 35 мин при рП 10 при периодическом добавлении 10 н. NaOH, Ацетон отгоняют в вакууме и водную фазу промывают 40 мл этилацетата, рН водного раствора снижают до 2,3 3 н, НС1 и экстрагируют 3 х 30 мл МХВК. 40

Объединенные экстракты сушат сульфатом натрия и упаривают до прозрачного маслянистого остатка (8,2 г, 89%).

4,25 r (19,4 ммоль) трет-ВОС-AHBA растворяют в 50 мл ацетона и добавля- 45 ют 2,23 r (19,4 ммоль) N-оксисукцинимида. Медленно добавляют раствор 4 r (19,4 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 20 мл ацетона и смесь перемешио вают 2 ч при 23 С. Выпавшую дицикло" гексилмочевину отфильтровывают и промывают небольшим количеством ацетона. Фильтрат и промывки (раствор

N-оксисукцинимидного эфира трет-ВОСAHBA) используют в следующей стадии без выделения.

Б. Ацилирование.

E(раствору 41,28 ммоль поли(триметилсилил)канамицина А, полученного в примере 26, в 94 мл ацетона добавляют 3,5 мл (194 ммоль) воды и смесь перемешивают в вакууме при 0-5 С в течение 30 мин. Добавляют 19,4 ммоль

N oêñècóKöèíèìèäItoãî эфира трет-ВОСЛНВЛ из стадии Л и смесь оставляют о стоять при 5 С в течение 1 ч. Добавляют 200 мл врдьг и рН снижают с 7,0 до 2,0 207-ной серной кислотой. Через 30 мин перемешивания рН поднимают до 6,0 раствором NH

1 и. — концентрированный. Получают

40,327 амикацина, 4>58% ВВ-К6, 8,327

ВВ-К29, 30,507 канамицина В и 7,437. полиацилов.

Пример 29. Повторяют методику примера 1, но 6 -И-карбобензилоксиканамицин I А заменяют :эквимолярным количеством 6 -N êàðáoáeIIçèëoêñIIêàíàмицином В; получают 1-N- I L- (-) -)(-амин-Ы-оксибутирил) канамицин В.

Пример 30. Повторяют методику примера 1, но применяемый в нем

N — окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидный эфир L-(-) †g †бензилоксикарбониламин-oL-оксимасляной кислоты заменяют N îêñè-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидным эфиром 1-(-)-P-бензилоксикарбониламин-oL-оксипропионовой кислоты и N-окси-5-норбернен-2,3-дикарбоксиимидным эфиром 1-(-)-II-áåíçèëоксикарбониламин-е -оксивалериановой кислоты соответственно и получают

1-N-fL-(-)-8-амино-Ы-оксипропионил канамицина А и 1-И-(1-(-)-3-амин-Ы,—

-оксивалерил1канамицин А соответст— венно.

Пример 31. Повторяют методику примера 25, но вместо N †îêñè-эфира L-(-)- -бензилоксикарбониламино-g-оксимасляной кислоты берут И-оксисукцинимидный эфир 1-(-)-/3-бензилоксикарбониламино-г -оксипропионовой кислоты и N-оксисукцинимидный

1480774

30 эфир 1.-(-)-о-бенэилоксикарбониламиновЂ,4-оксивалериановой кислоты соответственно и получают 1-И-$L-(-)-Р-амико-ь|-оксипропионил) канамицин В и 15

-N- fL — (-) -3-амино — ;оксивалерил) канамицин B соответственно.

Пример 32. Приготовление

ВВ-К8 путем ацилирования поли(триметилсилил) 3,6 -ди-N-карбобензилкана- 10 мицина А в безводном диэтилкетоне, Г

А. 3, 6 — ди — N-êàðáoáåíýèëoêcèêàíeмицин А.

Суспензию, содержащую 7,26 r (15 ммоль) канамицина A (свободное 15 основание) и 18,6 r (75 ммоль) тетрагидрата никельацетата в 300 мл диметилсульфоксида (DMSO), нагревают при о

100 С в течение 30 мин с перемешиванием до получения чистого зеленого раствора. После охлаждения раствор, содержащий 11,8 г (37,6 ммоль) N-карбобензилокси-5-норборен-2,3-дикарбоксимида в 50 мл ПИ$0, добавляют к указанному выше раствору. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, обрабатывают 100 мл концентрированной аммиачной воды и

1 л воды и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч затем ввоУ Ч зо дят в верхнюю часть колонки объемом

300 мл с дианионом HP-10.Затем колонку подвергают элюированию 7 H. NH OH, а затем смесью метанол-вода (1:1) и наконец смесью метанол-вода (10:1) фракции по 20 мл собирают и анализируют с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах силикагеля 60

F-254 фирмы МегсЕ, используя хлороформ — этанол — 287-ный .гидроксид аммония (1:2:2). Порция желаемого про-

40 дукта, который выкристаллизовывается в виде тонких игл из фракций, содержащих продукт в высокой концентрации, отфильтровывают для создания аналитической пробы. Фильтрат и другие фракции, содержащие желаемый продукт (Г> 0,42), сливают вместе и раствор затем упаривают под вакуумом. Остаток растирают в порошок с диэтиловым эфиром для получения 9,7 r (867) названного продукта. t nn > 300 C IR(KBr): 1 C=O 1690 cM . 57K(OlISO-d6+DC1, pDca 3) F: 4, 76-5, 26 (6Н, m, Н, Н " и CO-OCHz-C4H х 2); 7,26 (10H, S, CO-ОСН -С Н, х 2).

Вычислено, 7: С 52,98; Н 6,54;

N 7,27.

С Н е И40 Н О

Найдено, 7: С 53,20; H 6,42;

N 7 04.

1.

Поли(триметилсилил) 3,6 -ди-Nкарбобепэилоксиканамицин А.

Смесь, содержащую 1,5 r (2 ммоль)

Г

3,6 -ди-N-карбобензилоксиканамицин А иэ стадии А и 1,29 г (8 ммоль) гексаметилдисилазана н 15 мл сухого ацетонитрила нагревают с обратным холодильником в течение 16 ч. Чистый раствор концентрируют под вакуумом до-: суха и остаток растворяют в 20 мл сухого диэтилкетона. Раствор непосредственно используют в следующей стадии.

Б- Лцилирование поли(триметилсилили)

3,6 -ди-N-карбобензилоксиканамицин А

Г эквимолярным количеством ацилирующего агента.

К раствору из стадии Б добавляют с перемешиванием 700 мг (2 ммоль)

И-оксисукцинимидного эфира Е-(-)-ь -карбобенэилоксиамино- -îêcèìàñëëíîé кислоты ($АЕ). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 19 ч, а затем обрабатывают 8 мл воды и 35 мл тетрагидрофурана (THF), с помощью водного раствора соляной кислоты доводят до рН 3, перемешпвают в течение

30 мин, затем упаривают под вакуумом досуха. Остаток растворяют в смеси 30 мл воды, 40 мл метанола, l0 мп п-бутанола и 40 мл THF и гидрируют в течение ночи в присутствии

500 мг 107-ного палладия на углероде.

Катализатор отделяют фильтрацией и фильтрат упаривают в вакууме, а затем лиофилизируют для получения сырого ВВ-К8. Аморфный порошок вновь растворяют в воде и рН раствора доводят до 4 при помощи водного раствора соляной кислоты и хроматографируют на колонке Амберлит CG-50 с циркуляцией ИН . Колонку подвергают ступенчатому элюированию водой; 0,1, 0,3, 0,5 и 2 н. ИП40Н, 10 мл фракции собирают и анализируют с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах силикагеля 60 Г-254 фирмы Merck, используя хлороформ — метанол — 28X-ный гидроксид алюминия — вода (1:4:2:1).

Гомогенные фракции сливают, упарива- ют и лиофилизируют. Фракции, содерЖащие ВВ-К8, и фракции, содержащие извлеченный канамицин А, анализируют с помощью К. pneumoniae А 20680и В.Subti1is PCI 129 соответственно (см. табл. 5).

32

1480774

СН2МН2

HoWlо ъ

NH

C=0

1 — CH L-(1

1 (.СН2)и

СН2

I нг

Н2

Таблица1

Канами55

ВВ-К29

Амикацин

Полиацилы

Гидрогенолиэ частично деблокированного продукта с использованием

Pd/C, с последующим извлечением в колонке CG-50, дает дополнительно

30 мг (2%) ВВ-К8. Общий выход ВВ-К8

846 мг (69%).

Г. Ацилирование поли(триметилсилил)3,6 -ди-N-карбобенэилоксиканами.тцина А с использованием 1,2 эквивалента ацилирующего агента.

Повторяют стадию В за исключением того, что добавляют 20%-ный избыток ацилирующего агента. Получают резуль таты, приведенные в табл. 6.

Гидрогенолиз частично деблокированного продукта с использованием

Pd/Ñ, с последующим извлечением в колонке CG-50, дает дополнительно 21 мг (2%) БВ-К8. Общий выход ВВ-К8

771 мг (62%). где R — 0H или NH<1

- n --целое число от 0 до 2, путем обработки производного канами цина А или В ацилирующим производным кислоты общей формулы II

С6Н5 CH OC NH СН2 (СН2).— С)1 СООИ .р ОИ где и имеет указанные значения, в среде органического растворителя с последующим удалением блокирующих

;групп, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевых продуктов и интенсификации про-. цесса, в качестве производного канамицина А или В используется полисилилированный канамицин А или В, содержащий от 4 до 8 триметилсилильных блокирующих групп, или полисилилированный канамицин, содержащий карбобензилоксикарбонильную группу при

6 -аминогруппе и от 3 до 7 триметилсилильяых групп, в качестве ацилируД. Ацилирование поли(триметилси лил) 3,6 -ди-N-карбобенэилоксиканамицина А, используя 1,5 эквивалент ацилирующего агента.

Повторяют стадию В за исключением того, что добавляют 50%-ный избыток ацилирующего агента, Получают результаты, приведенные в табл. 7.

Предлагаемый способ позволяет повысить выход целевых продуктов и интенсиф1лцировать процесс.

Формула изобретения

Способ получения 1-N (Ó-амино-d.—

-oKcHGJIKBHoHJT)I

Вещество Объем, о Масса, Выход, 578 мл г %

1000 +0,115 0,989 9,15

1750 +0,24 4„37 32,0

2000 +0,31 6,20 47,4

900 +0,032 0,288 2,0

14 5() 7 74

Выход, 7.

Реакция

Жидкостная хроматография (ди-CbZ амикацин) 49,18

56,17

42,87

55,39

39, 16

38,45

А

Выход, 7

Реакция

Микробиологический анализ на Амикацин

Жидкостная хроматография (ди-CbZ амикацин) Турбидимет- Пластинки рически

28, 18

28,63

28,34

2i 52

29,27

33,39

Выход, 7

Реакция

Микробиологический анализ Амикацин

Турбидимет- Пластинки рически

33,36

33,37 39, 18

42,82

43,27

22,55

А

Номер %1 ОН Масса, Выход фракции н. мг

Продукт нна

32-39

Частично деблокированный продукт

7* Канамицин А

Неидентифицированпый продукт

67*™* ВВ-К8

5 Диацилканамицин А

0,1 !02

0,42

0,33

40-46

47-59

174*

105

0,3

0i3

0,18

0,5

816**

0,5

60-78

S9-95. +408 мкг/мг;

**956 мкг/мг; t

* *На основании бнопробы..

Жидкстная хроматография (ди-CbZ амикацин) Таблица 2

Микробиологический анализ амикацина, Турбиди- Пластинметричес- ки

Та блица 3

Таблица 4

Таблица 5

1480774

36

Таблица 6

Номер фракции

Выход

Вели.—

Продукт

NH 0H Масса, н. мг чина

В.

0,2 107

28-29

30-41 О, 2 157

0,35

*933 мкг/мг;

**На основании биопробы.

Т а блица 7! .Номер фракции

Продукт

Выход

Масса, мг

НН ОН, н. полученная) 29-39 0,2 293

Составитель Г. Коннова

Техред М.Дидык Корректор M. Максимишинец

Редактор Н.Киштулинец

Заказ 2565/59 Тираж 339 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,101

42-52 0,3 120

53-81 0,3 0,5 750* 60*

94-116 1,2 147 11

40-47 0,3 95* 6***

65-80 0,5 582** 29»»»

100-130 1 2 543 26

»860 мкг/мг;

**880 мкг/мг;

*"*На основании биопробы.

Частично деблокированный продукт

Неидентифицированный продукт

ВВ-К8

Диацилканамицин А

Частично деблокированный продукт

Канамицин А

ВВ-К8

Диацилканамицин А

0,30

0,14

0 05

Величина В (дважды

0,67

0,33

0,09

Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в Способ получения 1-n-( @ -амино- @ -оксиалканоил)канамицина а или в 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии

Изобретение относится к новым олигосахарид-содержащим 14-аминостероидным соединениям
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в неврологии и нейрохирургии

Изобретение относится к микробиологии и медико-биологической промышленности и может быть использовано в медицинской практике

Изобретение относится к ветеринарии

Изобретение относится к области ветеринарии

Изобретение относится к медицине и фармакологии и касается композиции для лечения легочных инфекций
Наверх