Реагент для определения уреазной активности энтеробактерий

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для биохимической дифференциации энтеробактерий. Цель изобретения - повышение точности определения. Реагент содержит мас.% мочевину 0,9-1,1

глюкозу 1,5-2,5

поливиниловый спирт 0,4-0,6

бромтимоловый синий водорастворимый 0,04-0,06

физиологический раствор забуференный рН 5,4-5,6. Реагент наносят на лист бумаги с пленочным гидрофобным покрытием и высушивают. Для проведения определения уреазной активности на сухой реагент наносят каплю исследуемой культуры и по характеру окрашивания определяют степень активности (изменение цвета из желтого в зеленый и далее густо-синий).

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (l9) ® (Ill

А1

6040 1 4 1/58

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 43 . 30/28 — 13 (22) 2 .. 12.87 (46) 5 ° 09 89. Бюл, Ф 34 (71) Кишиневский государственный медици ский институт (72) .И.Георгица, В,И„Никитин, А,П.Ка .нча и С,И. Георгица (53) 576, 8. 093, 1 (088. 8) (56) ЖИЭИ, 1 .983, М- 4, с, 20-23, (54) РЕАГЕНТ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРЕАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть. использовано для биохимической дифференциации энтеробактерий, Цель изобИзобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для биологической дифференциации энтеробактерий, Цель изобретения — повьппение точности определения, Пример 1. Из листа бумаги с пленочным.гидрофобным покрытием вырезают диск диаметром чашки Петри (9-10 см), На пленочной поверхности расчерчивают 20 квадратных эон площадью 1,5 ем 1,5 см, В первую пробирку берут навески порошков мочевины (0,1 г) и глюкозы (0,2 г); заливают эабуференным физраствором с рН 5,5 (7,7 мп) затем помещают на водяную

Э баню при 90 С для растворения мочевины и глюкозы, Во вторую пробирку вносят поливиниловый спирт (0,5 r) и заливают дистилированной водой (10,0 мп), затем растворяют над пламенем горелки или в водяной бане, В

2 ретения — повышение точности определения. Реагант содержит, мас, Ж: мочевина 0,9-1,1; глюкоза 1,5-2,5; поливиниловыи спирт 0,4-0,6; бромтимоловый синий водорастворимый 0,040,06 физиологический раствор забуференный с рН 5,4-5,6, Реагент наносят на лист бумаги с пленочным гидрофобным покрытием и- высушивают, Для проведения определения уреаз ной активно сти на сухой ре агент наносят

1 каплю исследуемой культуры и по характеру окрашиваних определяют степень активности изменение цвета из желто-! го в зеленый и далее густо-синий), третью пробирку вносят бромтимоловый синий водорастворимый (0,05 г), заливают дистилированной водой (10,0 мл) и встряхивают ;о полного растворения, Затем в первую прсбирку вносят по

0 1 мл растворов поливинилового спирта и бромтимоловог0 синего,,тщательно встряхивают, получая смесь для приготовления реагента, Для этого в центр каждой квадратной эоны носителя наносят по 1 капле объемом 0,02 мл смеси ингредиентов, оставляют при комнатной температуре до полного высыхания капель и получения реагентов в виде фиксированных ьжкропленок диаметром 0,40,5 см.

Готовые реагенты хранят при комнатной температуре в течение трех лет (срок наблюдения), Для определения уреазной активности микробов носитель с реагентами помещают в чалку Петри, а на реФормула и з о б р е т е н и я

Со ставит ель Г. Смирнов а

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Н,Борисова

Редактор M.Ïåòðîâà

Заказ 5517/30

Тираж 501

Подписное

В11ИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

3 150779 агент наносят каплю излучаемой микробиой культуры, содержащей 3 — 5 мпрд и более микробных клеток в l мп фиэрас+ 1 вора эабуференного с рН 5,5 — О, 1, 5

Чапку закрывают и инкубируют при

37 С, При наличии уреазоположительной фякробной культуры цвет капли. переходит иэ желтого до густо-синего, а фри наличии уреаэоотрицательной микфс бной культуры цвет капли о стает ся без изменений, Пример 2, Готовят реагент в

Соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах; йас.%;мочевина 0,9 глюкоза 1,5;

1 оливиниловый спирт 0,4; бромтимоловый синий 0,04; эабуференный физиологический раствор (рН 5,4) остальное, Из 39-и исследованых культур одна культура — слабоположительная реакция (зеленый цвет), семь культур †. положительная реакция,(сине-зеленый цвет), 31 культура — резкоположительная реакция (густо-синий цвет). 25

Пример 3. Готовят реагент в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах; мас.%: мочевина 1,1; глюкоза 2,5; поливиниловый спирт 0,6; бромтимоловый 30 синий 0,06, эабуференный физраствор (рН 5,6) остальное.

Из 39-и исследуемых культур у всех

39 выявлена резкоположительная реакция (густо-синий цвет).

7 4

При исследовании 39-и уреаэоположительных культур энтеробактерий (16 видов) с помощью известного реагента (СИБ с мочевиной) выявлено 25 культтур, с помощью реагента по изобретению — 39 культур, Таким образом, использование нового реагента позволяет повысить точность определения уреаэной активности микроорганизмов;

Реагент для определения уреазной активности энтеробактерий, содержащий мочевину, индикатор рН, поливиниловый спирт и растворитель, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности определения, он дополнительно содержит глюкозу, в качестве индй-. катора рН он содержит бромтимоловый синий водорастворимый, а в качестве растворителя — физиологический раствор забуференный с рН 5,4-5,6 при следующем количественном соотношении компонентов, мас,%:

Мочевина, 0 9-1,1

Глюкоз а 1,5"2,5

Поливиниловый спирт 0,4-0,6

Бромтимоловый синий 0,04-0,06

Указанный физиологический раствор Остальное