Способ получения s-аденозилметионина
Изобретение относится к биохимии, в частности к биотехнологическим способам получения значительных количеств как немеченных, так и меченных радиоактивными изотопами препаратов S-аденозилметионина. Цель изобретения - увеличение выхода S-аденозилметионина на 1 г ткани печени и получение меченного радиоактивными изотопами S-аденозилметионина с высоким включением метки. Цель достигается путем внутрибрюшинного введения животным за 2 - 6 ч до забоя 150 - 250 мг/кг массы тела диоксипропиладенина и за 20 мин до забоя L-метионина в дозе 100 мг/кг массы тела, извлечения печени, гомогенизации, центрифугирования, экстракции эфиром, хроматографии на фосфоцеллюлозе CELLEX-P, элюции целевого продукта и лиофилизации. Изобретение позволяет получить выход S-аденозилметионина 2,5 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченного S-аденозилметионина достигает 20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ в области экспериментальной онкологии и биотехнологии S-аденозилметионином. 2 ил.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„,Я0„„15520
А1 (51)5 G 01 N 7/00, 7/06, С 12 P 19/40
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н A BTGPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
f.
1 !
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
flail ГННТ СССР
1 (21) 4447422/30-13 (22) 24.05 ° 88 (46) 23 ° 03 ° 90. Бюп. У 11 (71) Всесоюзный онкологический научный центр АМН СССР (72) Ю.В.Букин и Е.Н.Орлов (53) 547.85.04 (088.8) (S6) Eloranta I.0. — Biochem. J., 1977, ч.166, р.521-529. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ S-АДЕНОЗИЛИЕТИОНИНА (57) Изобретение относится к биохимии, в частности к биотехнологическим способам получения значительных количеств как немеченых, так и меченых радиоактивными иэотопами препаратов S-аденозилметионина. Цель изобретения — увеличение выхода Sадеиозилметионина на 1 r ткани печенк и получение меченого радиоакИзобретение относится к биохимии, в частности к способам получения веществ, обеспечивакацих процессы трансметилирования, трансаминопропилирования, транссульфирования в организме и используемых в экспериментальной онкологии, генной и белковой инженерии.
Целью изобретения является увеличенне выхода S-аденоэилметионина на
1 r ткани печени и получение меченого радиоактивными иэотопами S-аденозилметионина с высоким включением метки.
На фиг.1 представлен график динамики изменения содержания S-аденоэилметионина в ткани печени крыс пос.-, 2 тивными изотопами S-аденозилметионина с высоким включением метки.
Цель достигается1путем внутрибрюшинного введения животным за 2-6 ч до забоя 150-250 мг/кг массы тела диоксипропиладенина и за 20 мин до за- . боя L-метионина в дозе 100 мг/кг массы тела, извлечения печени, гомогенизации, центрифугирования, экстракции эфиром, хроматографии на фосфоцеллюлозе Се11ех-Р, элюции целевого продукта и лиофилизации. Изобретение позволяет получить выход S-аденоэилметионина 2,5 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченого
S-аденоэилметионина достигает
20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ в области экспериментальной онкологии и биотехнологии S-аденозилметионином. 1 з.п. ф-лы, 2 ил. ле введения диоксипропиладенина; на фиг.2 — график динамики изменения радиоактивности функций S-аденозилметионина, полученных после хроматографии экстрактов ткани печени крыс после внутривенного введения Ь-(u- С), Ф1., .метионина., I, Основу предлагаемого способа,обеспечивающую достижение поставленной цели, составляет. предварительное (эа
2-6 ч до забоя) внутрибрюшинное вве- 1, девке крысам производного аденина (диоксипропиладенина), который способствует накоплению Б«аденозилметионина в клетках печени..Данный прием ,позволяет получить 6 кратное увели1552073 чение количества S-аденозилметионина на 1 r печени крыс по сравнению с известным способом. Получение в этих условиях меченого соединения обеспе" чивается за счет внутривенного введения 2,5"-, 10 мКи/кг массы тела животных меченого радиоактивными изотопами Ь-метионина за 4-6 мин до забоя.
Предлагаемый способ дает возможность получения меченого радиоактивными изотопами ь-аденозилметионина с высоким уровнем включения метки.
Пример 1. Самцам белых беспородных крыс весом около 200 г эа
4 ч до забоя внутрибрюшинно вводят диоксипропиладенин в дозе 200 мг/кг массы тела в концентрации 200 мг/мп физиологического раствора. Затем за
20 мин до забоя внутрнбрюшинно вводят L Net в дозе 100 мг/кг массы тела. Животных забивают тоанслокацией шейного позвонка, извлекают печень, охлаждают в ледяном физиологическом растворе и гомогенизнруют с 1U H G и 4Ч 503-ной трихлоруксусной кислоты. Затем гомогенат центрифугируют в течение 20 мин при 6000 об/мин, су-! пернатант трижды экстрагируют 1U эфира, водную фазу фильтруют и на,носят на колонку (1 7 см) с Се11ех-Р.: уравновешенную 1 иЫ КС1. Примеси отделяют пропусканием 100 мл 50 <8i НС1, АйоКе элюируют с 20 мл 0,5 M НС1 и элюат лиофилизируют.
Содержание АйоИе после указанных воздействий составляет в печени оКо ло 2,5 мкг/г ткани. Количественное содержание S-аденозит:иетионина определяют спектрофотометрически при
257 нм.
П р и и е р 2. Проводят аналогично примеру 1, но для получения
Айо1|ей, меченого радиоактивнымн изотопами, дополнительно за 5 иин до забоя внутривенно вводят 5 мКи/кг массы тела 31 - метил в C) -AdoMet c 4 ( удельной активностью 40 мкКи/ммоль.
При этом выделяют около 60 икКи
Ш-(метил- С -Adol iet: или 30 мкКи
L-(метил- " Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить 2,5 мкмоль Б-аденозилметионина на 1 г ткани печеки крыс, а после введения меченого метионина выделяют препараты DL-(метил- Cj-Ы-аденоэилметионина или 1.И -(метил- С)-Ы-аденоэилметионина с И удельной активностью 20 мкКи/ммоль. Чистота продукта при этом составляет более 957. Полученные предлагаемым способом 10 препараты S-аденозилметионина по своим характеристикам (степени гомогенности, удельной активности) удовлет- . воряют требованиям, предъявляемым к этому соединению при его использовании для серийных определений активностей специфических ферментов обмена S-аденоэилметионина, а также в исследованиях процессов метилирования различных клеточных метаболитов, для которых S-аденозилметионин является донором метильных групп. Кроме того, предлагаемый метод получения Б-аденозилметионина характ еризуется методической доступностью и быстротой. Применение .предлагаемого способа облегчит обеспечение работ в области экспериментальной онкологии и биотехнологии необходимым количеством крайне мобильного соединения — S-аденозилметионина. 4 Формула изобретения 1. Способ получения S-аденозилметионнна, включающий внутрибрюшинное введение L-метионина, забой животного, извлечение печени, ее гомогенизирование, экстракцию эфиром, хроматографию на фосфоцеллюпозе Се11ех-P, лиофилизацию выделенного продукта, отличающийся тем, что, 40 с целью увеличения выхода S-аденозилметионина на 1 г ткани печени, за 2-6 ч до забоя животным вводят диоксипропиладенин в дозе 150— 250 мг/кг массы тела в концентрации 150-250 мг/мл физиологического раствора. 2. Способ по п. 1, о т л .и ч а юшийся тем, что, с целью получения меченого изотопами S-аденозилметиоьжна с высоким уровнем включения метки, за 4-6 мин до забоя животным дополнительно внутривенно вводят 2,5-10 мКи/кг массы тела ме— ченого радиоактивными изотопами Ь-метионина. 1552073 9 1Ю ь Ю Время, ч з Ъ м 1266 % g 860 М OM - а 6.8 Ш дрем, prw ФАЗ Составитель Н.Александрушкнна Редактор И.Дербак Техред М.Ходанич Корректор А.Обручар Заказ 325 Тира к 490 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская -наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101
