Штамм бактерий gluсоnовастеr oxydans - продуцент сорбозы

 

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологической промышленности и касается получения нового штамма GLUCONOBACTER OXYDANS ВНИИгенетика 16-С12 (ВКПМ В-4160). Штамм получен методом многоступенчатой селекции на устойчивость к производственным фагам GS -1 и GS -2 из производственного штамма GLUCONOBACTER OXYDANS 15. При культивировании в производственных условиях на дрожжеаммонийной среде с 20%-ным сорбитом штамм позволяет за 30 - 36 ч ферментации достичь глубины окисления сорбита в сорбозу свыше 94%. Штамм характеризуется устойчивостью к фагам GS -1 и GS -2, лизирующим клетки производственных штаммов GLUCONOBACTER OXYDANS.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1555363

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ стоимости,.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4441156/30-13 (22) 14.06.88 (46) 07,04.90. Бюл. № 13 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции про. мьппленных микроорганизмов (72) Р,Р.Àçèýáåêÿí, Т,М.Григорьева, M.Þ,Ãàëüïåðèí, Т.А.Смирнова, Т.А,Левина, Л.И.Сироткина, Г,Ф,Макаренко. и Л.И.Орел (53) 577.154(088.8) (56) Европейский патент ¹- 233050A, кл. С 12 P 19/02, 1987.

Промьппленный регламент на,производство аскорбиновой кислоты, Белгородский витаминный комбинат, 1985 ° (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ GLUCONOBACTER

OXYDANS — ПРОДУЦЕНТ COPB03bI

Изобретение относится к микробиологической и медицинской промьппленности и может найти .применение в производстве витаминов, а именно аскорбино« вой кислоты, при ее производстве были выделены из ферментеров два.блиэкородственных,фага Gs-1 и Сэ-2, отличающихся по ультраструктуре и молекулярно-биологическим характеристикам. как от фага А-1, так и от фагов, выделенных в природе, фаги Gs-1 и Gs-2 вызывают лизис производственного штамма С1uconobacter oxydans 15 ° что порождает срывы производства сорбозыи приводит к уменьшению выхода аскорбиновой кислоты и повьппению ее себе-: (51) 5 С 12 P 19/02 С 12 N 1/20

2 (57) Изобретение относится к биотехнологии и микробиологической промышленности и касается получения нового штамма Gluconobacter ozydans ВНИИгенетика 16-С12 (ВКПМ В-4160 у. Штамм получен методом многоступенчатой селекции на устойчивость к производственным фагам Gs-1 и Gs-2 иэ производственного штамма Gluconobacter

ozydans 15, При культивировании в производственных условиях на дрожжеаммоиийной среде с 207-ным сорбитом штамм позволяет sa 30-36 ч ферментации достичь глубины окисления сорбита в сорбозу свыше 94Х, Штамм характеризуется устойчивостью к фагам Gs-1 и Gs-2, лиэирующим клетки производственных штаммов Gluconobac ter oxydans, С"

Целью изобретения является получение штамма Gluconobacter oxydans, устойчивого к производственным фагам

Gs-1 и Gs-2и характеризующегосявысокой эффективностью окисления сорбита в сорбозу, Штамм С.охуйапэ ВНИИгенетика 16-С12 получен из производственного штамма

Gluconobacter ozydans 15 методом многоступенчатой селекции на устойчивость к фагу Gs-1 ° а затем - на устойчивость к фагу Gs-2, На каждой стадии селек».. ции. проводилась оценка окислительной активности полученных клонов с помощью поляриметрического измерения образовавшейся сорбозы по методике, рекомендо- .ванной промышленным регламентом яа

1555363 производство аскорбиновой кислоты Белгородского витаминного комбината.

Штамм G,oxydans ВНИИгенетика )6-С12 хранится во Всесоюзной коллекции про5 мышленных микроорганизмов и имеет регистрационный номер ВКПМ В-4160.

Штамм депонирован также в коллекции

Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков и имеет регист- 0 рационный номер 1898.

Штамм С,oxydans ВНИИгенетика i

16-С12 имеет следующие признаки.

Культурально-морфологические свойства, Грамотрицательные неспорообразующие неподвижные клетки овальной формы, размером 0,8х1,0-1,2 мкм, На агаризованной дрожжевой среде, содержащей (на 1 л): сорбит 100 г; дрожжевой автолизат (1)X сухих ве,ществ) 60 мл; азотнокислый аммоний

1 г; агар 25 г (рН 5,8), после двух

1 о суток роста при 33 С штамм образует мелкие бесцветные блестящие куполообразные колонии правильной формы с ровным краем, имеющие гиалиновую струк— туру и вязкую консистенцию, На агаризованной среде с мелом, содержащей (на 1 л): глюкозу 50 г; дрож1 жевой экстракт 10 г; углекислый кальций 30 г агар 25 r (рН 5,8), штамм после трех суток роста при 33 С образует колонии той же морфологии, вокруг которых наблюдается зона просветления агара, На arape Хоттингера штамм не растет.

На мясо-пептонном агаре штамм не растет.

Физиолого-биохимические свойст40 ва;.Отношение к кислороду. Облигатный аэроб.

Отношение к источникам углерода.

Усваивает сорбит, маннит, глюкозу, глицерин. Не окисляет пируват, йцетат„45 сукинат. Желатину не разжижают.

Отношение к источникам азота. Использует соли аммония.

Нитрат не восстанавливает, Отношение к температуре. Растет при 28-36ОС. Оптимальная температу50 ра 34 С.

Отношение к рН среды. Растет при рН 3,5-6,0. Оптимальное значение рН

5,3.

Отношение к антибиотикам. Устойчиз к хлорамфениколу (50 мг/л), эри; ромицину (20 мг/л), тетрациклину (30 мг/л), полимиксину (300 мг/л);

Штамм хранится в лиофильно высушенном виде в запаянных стеклянных ампулах.

Чувствительность к фагам, Чувствительность предлагаемого штамма

G.oxydans ВНИИгенетика 16-С12 и известного штамма G,oxydans 15 и производственным фагам Gs-1 и Gs-2 сравнивается путем титрования фагов на культурах обоих штаммов двуслойным методом. При высеве этих фагов на газон культуры известного штамма происходит лизис бактерий, проявляющийся в образовании негативных колоний фага, При высеве тех же фагов на газон предлагаемого штамма 16-С12 негативных колоний фага не образуется. Так, не было обнаружено ни одной негативной колонии фага Gs-1 при высеве на культуру штамма 16-С12 суспензии фага Gs-1, содержащей 5х10 фаговых частиц (по данным титрования фага на культуре известного штамма). При высеве на культуру штамма

16-С12 фага Gs-2 в количестве 4х109 фаговых частиц (по данным титрования фага на культуре известного штамма) негативных колоний также не обнаруживается.

Устойчивость предлагаемого штамма 16-С)2 к фагам Gs-1 и Gs-2 проявляется и при внесении фагов в жидкую культуру бактерий. Так, при введении в культуру известного штамма фага Gs-1 в количестве Iх10 фаговых частиц в 1 мл происходит лизис бактерий, проявляющийся в снижении оптической плотности культуры от 0 5 до 0,02 уже за первые 2 ч инкубации, тогда как оптическая плотность аналогичной культуры штамма 16-С!2 в такой ситуации не менее 24 ч остается на уровне контроля.

Сравнение способности клеток обоих штаммов к адсорбции фагов Gs-1 и Gs-2 путем измерения титра фага в суспенэии после осаждения бактерий центрифугированием показывает, что предлагаемый штамм )6-С12 сохранил такую же способность к адсорбции обоих фагов, что и известный штамм, Таким образом, устойчивость штамма

)6-C)2 к фагам Gs-1 и Gs-2 не связана с измененной адсорбцией фаговых частиц, Продуктивность штамма, Штамм G oxydans ВНИИгенетика

16-С12 (BKIIM В-4160) при культивиро155

5363

Составитель Н,Афанасьева

Редактор Н, Рогулич Техред А.Кравчук Корректор N.Øàðîøè

Заказ 538 Тираж 484 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 вании в производственных условиях в дрожжеаммонийной среде с 207. сорбитом позволяет достичь за 30"36 ч ферментации глубины окисления сорбита в сорбозу свыше 947..

Пример. Использование штамма

G,oxydans ВНИИгенетика 16"C12 (ВКПМ

В-4160) для получения кристалличес-. кой сорбозы, Исходную культуру штамма ВНИИгенетика !6-С12 выращивают в течение

2 сут при 33 С на косяках с агаризоо ванной средой следующего состава (рН 5,6): сорбит 100 г, дрожжевой автолизат (117. сухих веществ) 60 мл, азотнокислый аммоний lг; вода водопроводная (артезианская) 1 л.

Культуру бактерий с косяков засевают в пробирки, содержащие по

10 мл жидкой среды вышеуказанного состава, и растят 2 сут при 33 С.

Для размножения полученной культуры ее 3 раза последовательно пересева!от, разводя после 2 сут роста при 33 С

20-кратным объемом свежеприготовленной среды. Полученный посевноч материал контролируют на отсутствие посторонней микрофлоры. При полной стерильности культуры ее используют для промьппленной ферментации.

Получение сорбозы в промьппленных условиях ведут в ферментере объемом

5000 л, содержащем 2500 л среды, включающей 207: сорбита, О ° 017. дрожжевого автолиэата и 0,017 азотнокислого аммония (рй 5,3). Окисление ведут при интенсивной аэрации, подавая в ферментер не менее 3 л стерильного воздуха на 1 л среды/мин. Температура среды в ферментере.30-36 С, рН

4,0-4,5, Через 36 ч глубина окисле,ния сорбита в сорбозу достигает 947..

Для выделения сорбозы из окислен-. ного раствора его упаривают под вакуумом при температуре не более 60 С затем охлаждают до !8-20 С и ведут кристаллизацию сорбозы при перемешивании, Выпавшие кристаллы сорбозы сушат горячим (50 С) воздухом, просеи вают и собирают в соответствующую

Продукт, получаемый с использованием предлагаемого штамма ВНИИгенетика 16-С12, соответствует требованиям промышленного регламента на проиэвод15 ство, L-сорбозы — промежуточного продукта в синтезе аскорбиновой кислоты, Основное отличие и преимущество предлагаемого штамма G.oxydans ВНИИгенетика 16-C I 2 (ВКПМ В-4160) по срав20 нению с известным штаммом G.oxydans

15 заключается в устойчивости к производственным фагам Gs-I u Gs-2, что позволяет вести процесс культивирования в производственных условиях без

25 фаголизиса, Тем самым сокращаются затраты на производство аскорбино вой кислоты и увеличивается съем го- тового продукта с 1 м питательной среды. Надсорбционный механизм ус-

30 тойчивости штамма БНИИгенетика 16-С!2 к фагам Gs-1 и Gs-2 позволяет использовать его в качестве сорбента для очистки производственных ферментеров и коммуникационных линий от этих фагов. Кроме того, фагоустойчивость z

35 штамма ВНИИгенетика 16-С12 (БКПМ

В-4160) позволяет рекомендовать его для использования в непрерывном способе ферментации.

Формула изобретения

Штамм бактерий Gluconobacter oxy

dans ВКПМ В.-4160 — продуцент сорбозы.

Штамм бактерий gluсоnовастеr oxydans - продуцент сорбозы Штамм бактерий gluсоnовастеr oxydans - продуцент сорбозы Штамм бактерий gluсоnовастеr oxydans - продуцент сорбозы 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к технологии ферментативного гидролиза полисахаридов и может найти применение преимущественно при получении глюкозных и паточных сиропов в крахмалопаточной отрасли пищевой промышленности

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой новый эффективный штамм клубеньковых бактерий, используемый для изготовления нитрагина под луговой клевер

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской, пищевой, молочной и консервной промышленности

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при внутривидовой диагностике возбудителей холеры

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой питательную среду для культивирования рубцовой микробной ассоциации ВНИИСХМ N 1 - 32

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, являющегося тест-культурой для определения никотиновой кислоты

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения гидролитических ферментов

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выделения микоплазм и накопления биомассы

Изобретение относится к области биотехнологии и органической химии, к способам получения изотопомодифицированных природных соединений, а именно: L--аминокислот, и может найти применение в экспериментальной биологии, медицине, ветеринарии, сельском хозяйстве
Наверх