Способ получения гидрохлорида @ -6-аминогексилгликозида-n- ацетилмурамоил-l-аланил-д-изоглутамина

 

Изобретение относится к пептидам, в частности к получению гидрохлорида β - 6-аминогексилгликозида N-ацетилмурамоил-L-аланил-D-изоглутамина, который находит применение для получения конъюгатов с синтетическими и природными полимерными носителями. Цель - повышение выхода целевого продукта. Получение ведут путем использования в оксазолиновом синтезе в качестве исходного продукта 1,6-гександиол, полученный парацетат β-6-гидроксилгликозид N-ацетилглюкозамина мезилируют хлористым мезилом в пиридине с последующим превращением мезилата в азид, бензилиденируют диметилацеталем бензальдегида без растворителя, конденсируют защищенную кислоту с трифторацетатом бензилового эфира L-ананил-D-изоглутамина с помощью N-оксисукцинимида и N,NЪ-дициклогексилкарбодиимида, бензилиденовую защиту удаляют кислотным гидролизом и гидрируют над окисью палладия в присутствии хлороформа. Способ позволяет выделить целевой продукт в виде гидрохлорида. Общий выход 22%(против 7% в известном способе).

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

СВ1 Иг>

А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ. /

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfTHRM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4400461/31-04 (22) 30.03.88

{46) 23.04.90. Бюл. Ф 15 (71) Симферопольский государственный университет им. M.B.Ôðóíçå (72) А.Е .Земляков, В.Я.Чирва и Н.B.Áîýèí (53) 547.964.407 (088.8) (56) Ponpipon M.М., Rupprecht К.М.

Carbohyd. Resear. v -Aminoa1kyl /3—

Glygosides of N-Acety1muramyl-h-AlàDigfn, and their conjugates with meиiи осса1 group с polysaccharides, 1983, 113, с. 57 — 62. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОХЛОРЦЦА

В-6-ЖЯНОГЕКСИЛГЛИКОЗИДА-N-АЦЕТИЛ-МУРАМОИЛ-L-АЛАНИИ-В-ИЗОГЛУТАМИНА (57) Изобретение относится к нептидам в частности к получению гидрохлорида

;8-б-аминогексилгликозида-N-ацетилмурамоил-L-аланил-D-изоглутамина,который находит применение для получения

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения гидрохлорида 8-6-аминогексилгликозида-Яацетилмурамоил-1.-аланил-1 -изоглутамина, который находит применение для получения конъюгатов с синтетическими и природными полимерными носителями.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта.

К раствору 1,9 г (16, 1 ммоль) .1,6гександиола в 20.мл сухого нитрометана, содержащему 60 мг безводной птолуолсульфокислоты, при перемешивании и нагревании (температура бани

80-85 С) тремя порциями в течение (51)5 С 07 К 9/00 С 07 Н 5/06

2 конъюгатов с синтетическими и природными полимернымнносителями.Цель -повьппение выхода целевого продукта. Получение ведут путем использования в оксазолиновом синтезе в качестве исходного продукта 1,б-гександиол. Полученный парацетат (3-6-гидроксилгликозид-Nацетилглюкозамина мезилируют хлориС тым мезилом в ниридине с последующим превращением мезилата в азид, бензилиденируют диметилацеталем бензальдегида без растворителя, конденсируют за.щищенную кислоту с трифторацетатом бензилового эфирами.-аланил-D-изоглутамина с помощью N-оксисукцинимида иМ,N —, )» дициклогексилкарбодиимида, бензилиде- - >

< новую защиту удаляют кислотным гидрд- Е . лизом и гидрируют над окисью палладия в присутствии хлороформа. Способ позволяет выделить целевой продукт в виде гидрохлорида. Общий выход 22Х (против 7Х в известном способе).

6 ч добавляют раствор 5 3 г (16,1 ммоль) 2-метил-(3,4,6-три-0ацетил-1,2-дидезокси- 4-D †глюкопирано)-(2,1-dj-2-оксазолина в 25 мл сухого нитрометана. По окончании реакции (контроль ТСХ система 1) реакционную смесь нейтрализуют пиридином и упаривают. Колоночной хроматографией (хлороформ- хлороформ — этанол, 30:1) выделяют 2,9 r (40X) б-гидроксигексил.

2-ацетамидо-3,4,6-три-О-ацетил-2-деэокси- p -D-глюкопиранозида (1), т.пл.

90-91 С (эфир-этанол),,() -18 (С 0,87; этанол).

Rg 0,40 (2) .

1558927

ИК, см : 3400, 3300 (OH NH)

2930, 2860 (СН ); 1750, 1240 (сл. эфир); 1670, 1540 (амид) .

ПМР (CDC1 ):1,38 м, 1,56 м (8Н, 4СН ); 1,95 с, 2,02 с, 2,03 с, 2,09 с (12H, NAc, 3-ОАс); 4, 67 д (1Н, 3

9 Гц; Н-1); 5 71 д (1Н, ИН).

Гликозид (I) (2,4 г; 5,4 ммоль) растворяют в 25 мл сухого пиридина и при охлаждении льдом добавляют

0,62 мл (8, 05 ммоль) хлористого мезила. Через 2 ч в реакционную смесь добавляют 1 -мл воды и упаривают. Колоночной хроматографией (хлороформ

«хлороформ-этанол, 50:1) выделяют

2,4 r (85X) мезилата (II) (6-мезилоксигексил-2-ацетамидо-3,4,6-три-Оацетил-2-дезокси- p -D-глюкопиранозид), т.пл. 95-97 С (хлороформ-эфир), 20

Го(3 zqq -15 (С 0,73; хлороформ) . R<

0,50 (2) .

ИК, см - : 3310 (NH), 2930, 2840 (СН ); 1730, 1220 (сл. эфир); 1650, 1540 (амид), 1350, 1160 (ЯОд) . 25

К раствору 2,35 г (4,48 ммоль) мезилата (II) в. 15 мл ДИФА прибавляют

1,45 г (22,4 ммоль) азида натрия и. перемешивают 1 ч при 80 С. Реакционную смесь упаривают, колоночный хроматографией (хлороформ) выделяют

2,07 г (98X) азида (III) (6-азидогексил-2-ацетамидо-3,4,6-три-0-ацетил2-дезокси-,p-D-глюкопиранозид), т.пл.

85-86 С (хлороформ-гексан), (gg<4<-17 (С 0,70; хлороформ). R< 0,68.

ИК, см 1; 3290 (NH) 2930, 2850 (СН ), 210 l (азид); 1740, 1240 (сл. эфир); 1660, 1550 (амид) .

К раствору 2,0 г (4,24 ммоль) ази- 40 да (III) в 20 мл метанола добавляют

2 мл О, 1 н. раствора метилата натрия в метаноле. Через 6 ч раствор нейтрализуют катионитом КУ-2 (H+), смолу отфильтровывают, фильтрат упаривают. 45

Получают 1,47 г (1007) соединения (IV) (б-аэидогексил-2-ацетамидо-2дезокси- 8 -D-rëþêîèèðàíîçèä), т.пл.

142-143 С (метанол-эфир). ГЫ 3 gq< -25 (С 0,54; этанол) . R g 0,24 (3) .

ИК, см : 3340-3220 (ОН, NH); 2910; 2830 (СН ); 2080 (азид); 1640, 1530 (амид) .

К суспензии 1,40 г (4,05 ммоль) производного (IV) в 30 мл диметилацеталя бензальдегида прибавляют 5 капель 10%-ного раствора серной кислоты в-метаноле и нагревают 5 мин на масляной бане (95-100 C). Реакционную смесь охлаждают, добавляют 100 мл гексана. После фильтрования получают

1,61 r (92/) ацеталя (V) (6-азидогексил-2-ацетамидо-4,6-0-бензилиден-2дезокси- p --D-глюкопиранозид), т.лл.

2.":5-258 С (с разл.), f.a 3 q

ИК, см - ; 3410 (0H); 3250 (NH);

2930, 2860 (СН ); 2100 (азид): 1630, 1570 (амид); 750, 700 (фенил).

К раствору 1,60 r (3,7 ммоль) соединения (V) в 60 мл сухого диоксана при перемешивании добавляют 0,33 г (11,1 ммоль) гидрйда натрия (807-ная суспензия в масле). Реакционную смесь о выдерживают 1 ч при 90 С, после чего охлаждают до 65 С и добавляют 0,68 мл (7,4 ммоль). L-2 — хлорпропионово:" кислоты. Выдержав смесь 3 ч при 6 " С, добавляют О, 11 .r (3,7 ммоль) гидрида натрия и еще перемешивают 1 ч. Избыток гидрида натрия разлагают добавлением 3 мл этанола. Реакционнуг смесь выпивают в 800 мл холодной воды. Раствор подкисляют 2 н.серной кислотой до рH 2-3 и хлороформом экстрагируют выпавшую кислоту. Экстракт высушивают

Na

7 (С 0,54, хлороформ). Rz Оу68 (2)

ИК, см : 3290 (NH); 2950, 2870 (СН ); 2110 (азид); 1720 (C=O); 1670, 1570 (амид); 710, 680 (фенил) .

К раствору 0,70 г (1,37 ммоль) кислоты (ЧХ) в 50 мл сухого диоксана при перемешивании и охлаждении льдом добавляют 1,19 r (1,64 ммоль) М-оксисукцинимида и 0,35 г (1,71 ммоль)

N,N -дициклогексилкарбодиимида. Через

4 ч отфильтровывают осадок N,N -дициклогексилмочевины и к фильтрату добавляют 0,63 r (1,51 ммоль) трифторацетата) бензилового эфира L-аланилD-иэоглутамина и 0,21 мл триэтиламина. Реакционную смесь перемешивают

24 ч, упаривают и колоночной хроматографией (хлороформ хлороформ-этанол

10: 1) выделяют 0,93 r (85X) гликопептида (VII) (бензиловый эфир О-(6-азидгексил-2-ацетамидо-4,6-0-бензилиден-2дезокси- fj -D-rëþêoïèðàíoçèä-3-ил)D-лактоил-L-аланил-D-изоглутамина), аморфное вещество, (о(J «q-7 (С 0,54; диметилформамид). К„ 0,62 (2).

5 155

ИК, см - : 3390, 3260 (NII, NH);

2920, 2850 (СН ); 2090 (азид); 1720, 1230 (сл.эфир); 1640, 1540 (амид);

740, 690 (фенил) .

ПМР (ДМСО-d ):1,20 д, 1,23 д (6Н, Л сц н 7 Гц; 2СН СН); l, 30 м (4Н;

2СН,); 1,44-1,53 м (4H; 2СН ); 1,80 с (ЗН; NAc); 2, 34 т (2Н, у СН. );

4,46 д (1Н, .Т q 8 Гц, Н-1); 5,07 с (2H; C00CH ); 5,68 с (!Н; CHPh);

7, 31-7, 39 м (10Н; 2Ph); 7, 08 с, 743 д, 7,91 д, 8,10 д (5Н, ÇNHь МНг)

Гликопептид (VII) (0,40 г;

0,5 ммоль) растворяют при нагревании на кипящей бане в 10 мл 80%-ной ук" сусной кислоты и выдерживают 10 мин, Раствор упаривают, добавив 20 мл эфира осаждают 0,35 г (98%) диола (VIII) (бензилоный эфир О-(6-азидогексил-2ацетамидо-2-дезокси- p -D ãëþêîïèðàíîэид-3-ил)-!)-лактоил-L-аланил-D-иэоглутамина), аморфный порошок, fg ) >«+

+12 (С 0,69, диметилформамид) . К

0,1 (2) .

Ик, см : 3370-3280 (ОН, NHд, МН) i

2910, 2840 (СН ); 2080 (азид); 1710, 1230 (сл. эфир); 1640, 1530 (амид), 730, 690 (фенил).

Раствор О, 1 r (0,14 ммоль) диола (VIII) в смеси 15 мл этанола и 1 мл хлороформа гидрируют 24 ч при комнатной температуре над 0,2 г окиси палладия. Катализатор отфильтровывают, промывают 5 мл этанола„ фильтрат упаривают. Добавлением 20 мл ацетона высаживают 0,080 r (90%) производного (IX) (О-(гидрохлорид-6-аминогекснл-2-ацетамидо-2-дезокси- 6 -D-глюкопиранозид-3-ил)-D-лактоил -L-аланил-D-изоглутамин) гидрохлорид- в -6аминогексилгликозида-N-ацетилмурамоилL-аланил-D-изоглутамина), (d g g

+3 (С 0,62, этанол). Rg 0,5 (4).

ИК, см - : 3450-3?00 {ОН, NH, NH);

29 10 (CH<), 1640, l530 (амнд) . С-ЛЖ (МеОН-d<); 18,4 (С -ALa), 20,1 (С ;1ас) 23,6 (СIIÄAc), 26,9 (C>-iGln), 27,7 (С-4), 28,8 и 29, О (С-2 и С-З), 31,8 (С -iGln), 33,8 (C-5, 41, 5 (С-6) 49, 2 (С -Al a)

52,5 (C iGln), 54 4 (С-2), 57, О (С-1 ), 63,4 (С-б), 71„9 (С-4), 78,3 (С-5), 78,9 (С -lac), 8 2, 2 (С-З), 103,9 (С-1) .

Таким образом, предлагаемый способ позволяет выделить р-б-аминогексилгликозид МДП в виде устойчивого гидрохлорида. Обший выход 22%., в

8927 б т. ч. на завершающих стадиях 64%. P известном способе общий ньь.оп 7%,, ня завершающих стадиях 6%, 5

Полученный гидрохлорид,В -6-аминогексилгликоэид-N-ацетилмурамоил-!.— алания-D — изоглутамиц (МДП) может быть

45 использован для получения конъюгатон

МЦП с полимерными носителями.

Пример 1. К раствору 16 мг (8,3 мкг-экв) и-нитрофенилоного эфира полиакрилоной кислоты н 1 мл АРИФА добавляют 10 мг (1.6 мкмаль) гидрохлори да р -6-аминогексилгликозица — N-ацетилмурамоил-Е. — аланил-D èýîãëóòaìèía и

1-2 капли триэтиламина и перемешивают

12 ч. К раствору добавляю 0.2 мл

25%-ного раствора аммиака, выпержинают 2 ч и гель-фильтрацией выделяют !

5 мг конъюгата 6-аминогексилгликозида-N-ацетилмурамоил-1 -алаиил-D-иэоглутамина с полиакриламидом.

П р и и е р 2. Конъюгацию 7 мг (1, 1 мкмоль) гидрохлорида р -б-аминогексилгликозицà-N-ацетилмурамоил-Еas.aíèë-D-иэоглутамина и 8 мг (1, 1 мкмоль) фосфатидилэтаноламина с

9 мг (4,6 мкг-экн) и-нитрофенилового эфира полиакрилоной кислоты проводят аналогично примеру 1. После гель- -фильтрации получают 17 мг (количественно) конъюгата 6-аминогексилгликоэида МДП и фосфатидилэтаноламина с полиакриламидом.

П р и и е р 3. Конъюгацию 7 мг (1, 1 мкмоль) гидрохларида л -б-аминогексилгликозида-N-ацетнлмурамои.т-Lt аланил-D иэоглутамина и 3 мг (1,2 мкмоль) 3-аминопропил-3„6-ди-Ометил- р -D-глюкопиранозида с 9 мг (4,6 мк-экн) полимера проводят аналогично примеру 1. После гель-фильтрации получают 12 мг (количественно) конъюгата 6-аминогексилгликозида МЦП и З-аминопропилгликозида-З,б-ди-Ометилглюкоэы и полиакриламицом.

Температуры плавления определяют на приборе ПТП, удельное нращение прн 20-22 C на поляриметре. ПИР-спектры получают на приборе "Brut.ег MN500" (500 МГц), внутренний стандарт

Ме Ъ . Спектр з С-ЯМР снят на спектрометре с рабочей частотой по углероду 62,9 МГц, внутренний этанол СН ОН (49,6 м.д, оч Ме Si). ИК-спектры записаны на спектрофотометре (таблетки

KBr) . ТСХ проводят на пластинках

Silufo1 UV-254 системы растворителей:

1558927

Составитель В.Волкова

Редактор Н.Гунько Техред А.Кравчук Корректор М.Шароши

Тираж 307

Заказ 817

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина,101

f5 хлороформ-этанол 15: 1 (1); хлороформэтанол, 10: 1 (2); хлороформ-этанол

5: 1 (3); этанол-бутанол-пиридин-водауксусная кислота 100:10:10:10:3 (4).

Зоны обнаруживают обугливанием при

400 С. Колоночную хроматографию проводят на промытом силикагеле Ь 100250 мкм, гель-фильтрацию — íà Sephadex G-15. Данные элементного анализа 10 для всех соединений соответствуют расчетньвк значениям.

Формула изобретения

Способ получения гидрохлорида

l р -6-амнногексилгликозида-N-ацетнлмурамоил-Ь-аланйл-D-из оглутамина, включаюп1ий получение гликозида оксазолиновым синтезом, дезацетилирование 20 метилатом натрия в метаноле, бензилиденирование, алкилированне Е-2-хлорпропионовбй кислотой, конденсацию с солью бензилового эфира L-апанилВ-изоглутамина путем гидрирования над окисью палладия, о т л и ч а ю-, шийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве исходного продукта для проведения оксазолинового синтеза используют 1,6-гександиол, полученный р -бгидроксигексил-2-ацетамидо-3,4,6- три0-ацетил-2-дезокси-р -6-гидроксипиранозид мезилируют хлористым мезилом в пиридине с последующим прещ ащением в азид, бензилиденированне ведут обработкой диметилацеталем бензальде гида, конденсацию проводят в присутствии N-оксисукцинимида-или И.,М вЂ” дициклогексилкарбодиимида и г1 :.;рирование проводят в среде хлороформа.

Способ получения гидрохлорида @ -6-аминогексилгликозида-n- ацетилмурамоил-l-аланил-д-изоглутамина Способ получения гидрохлорида @ -6-аминогексилгликозида-n- ацетилмурамоил-l-аланил-д-изоглутамина Способ получения гидрохлорида @ -6-аминогексилгликозида-n- ацетилмурамоил-l-аланил-д-изоглутамина Способ получения гидрохлорида @ -6-аминогексилгликозида-n- ацетилмурамоил-l-аланил-д-изоглутамина 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу получения меченных тритием линейных пептидов и гликопептидов, и может найти применение в медико-биологических исследованиях

Изобретение относится к производным пептидов, в частности к нагриевым солям -производных мурамилпептидов общей формулы 1

Изобретение относится к новым биологически активным сединениям, а именно к фуллереновому производному гликопептида GlcNAc-(1 _ 4)-MurNAc-Ala-D-iGln[Lys- - CO(CH2)5-NHC60-H] формулы I, приведенной в формуле изобретения, обладающему адъювантной активностью

Изобретение относится к новым растворимым синтетическим полимерсвязанным антрациклинам, проявляющим противоопухолевую активность, к способу их получения и содержащим их фармацевтическим композициям

Изобретение относится к новым цитостатическим средствам, специфичным к опухолям, в частности к модифицированным углеводами соединениям цитостатической активности

Изобретение относится к соединениям формулы (1), где Х - С1-С20-алкил, за исключением Х - бутил, гептил или гексадецил, или С3-С9-циклоалкил, незамещенный или замещенный С1-С3-алкилом, или адамантил, незамещенный или замещенный С1-С3-алкилом, или С6-С12-арил, незамещенный или замещенный одним или тремя С1-С3-алкилами
Наверх