Способ получения карбоциклических пуриновых нуклеозидов

 

Изобретение относится к получению карбоциклических пуриновых нуклеозидов формул I и II @ , где Y - пуриновое основание аденин-9-ил, гуанин-9-ил, обладающих противовирусной активностью. Цель - разработка способа получения соединений, обладающих активностью против вирусов РНК. Получение ведут тиокарбонилированием в положении 2Ъ или 3Ъ соединения формулы II, где Y указано, а имеющиеся в пуриновом основании аминои гидроксигруппы защищены один из R<SB POS="POST">1</SB> и R<SB POS="POST">2</SB> - OH, а другой - H, при комнатной температуре с последующим восстановлением гидридом трибутилолова в присутствии L,LЪ - азобисизобутиронитрила при 80-100°С и снятием защитных групп.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК, ()) С 07 Н 19/16! о.- г но >

Н0 6 5

RR 1 но >

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4202204/23-04 (22) 05 ° 03.87 (31) 49395/86 (32) 06.03.86

; (33) JP (46) 30.04.90, Бюл. N - 16 (71) Такеда Кемикал Индастриз ЛТД (pj) (72) Йесио. Танияма, Такуми Хамана, Риюдзи Марумото и Наоки Ямамото (Л. ) (53) 547.963.32.07{088.8) (56) Патент Великобритании

Р 1386585 кл. С 2 С, 1975, Патент Ивейцарии Ф 564562, кл. С 07 Н 19/16, 1975. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРБОЦИКЛИЧЕСКИХ ПУРИНОВЬИ НУКЛЕОЗИДОВ (57) Изобретение относится к получению карбоциклических пуриновых нуклеозидов А-л I u II

Изобретение относится к способу получения новых нуклеозидных аналогов, имеющих циклопентановое кольцо,. а именно карбоциклических пуриновых нуклеозидов общей Аормулы где Y — пуриновое основание аденин9-ил, из анин-9-ил, обладающих противсвируснсй активНОстью.

„„SU„„1561 26 А 3

Ф где Y — пуриновое основание аденин-9ил, гуанин-9-ил, обладающих противовирусной активностью. Цель изобретения — разработка способа получения соединений, обладающих активностью против вирусов РНК. 11олучение ведут

I тиокарбснилировачием в положении ? или 3 соединения Аор-лы II где. Y указано, а имеющиеся в пуриновом основании амино- и гидроксигруппы защищены один из К „ и К -OH, а другой—

Н, при комнатной температуре с нсследующим восстановлением гидридом триI бутилолова в присутствии М,Ы -азсбисо изобутиронитрила при 80 — 100 С и снятием защитных групп.

Цель изобретения — получение новых дидезоксинуклес идных аналогoB обладающих активностью против вирусов

РНК.

II p H м р р 1 (осы очный) . Синтез

9- (1R9 2Sô,3Н, 4К.) -4 метил 2 гипрокcèë-3,6-(тетраиз прсl èíïисилоксанил) диоксициклопентав-1-ил) гипсксантина.

С-аналог ннсзпна (10 г 37,5 ммоль) растворяют я ?О() мл безводного диметилАсрмамп;(а, добавляют 1,3-дихлср1,1,3,3-тетраизспрспилднсил ксан(13 мл, 41 мм .пь) и пмипазсл (11,3 г, 1561826

165 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 ч..

Реакционную смесь по каплям добавляют к 2 л воды, осадок собирают фильтрацией, промывают водой, далее быстро промывают диэтиловым эфиром, сушат и получают указанное в заглавии примера соединение в виде белого порошка (T7,2 r). Часть полученного продукта перекристаллизонывают из дихлорметана и получают кристаллы, т.пл. 135-138 С.

С-аналог инозина известен из Chemical and Phormaceutical Ви letin 24, 2624 (1976).

If р и м е р 2 (ссылочный) . Синтез

9- t(1R, 2S» 3R, 4К) -4-метил-2-фенокситиокарбонилокси-3, 6-(тетраиз опропилдис илок с анил) ди о к сицикл о и е нт а н1-ил)гипоксантина.

Соединение, полученное н ссылочном примере 1 (11,2 r, 22,3 ммоль), растворяют в 300 мл безводного ацетонит, рила, добавляют диметиламинопиридин (15,8 r 53,S ммоль) и фенокситиокар- 25 бонилхлорид (5 г» 29 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температу" ре 7 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а остаток растворяют н 250 мл хлороформа. Раствор 3р промывают О,S М раствором первичного кислого фосфорнокислого калия (250 мл, 2 раза)„ а затем водой (200 мл), сушат безводным сульфатом натрия и кон центрируют при пониженном давлении.

Получают сироп желтого цвета. Его

35 очищают хроматографией на силикагеле (90 r растворитель: хлороформ и смесь хлороформа с метиловым спиртом и отношении 60:1) и получают указанное в названии примера соединение в виде стеклоподобного вещества светло-желтого цвета (13,0 г).

Спектр ЯМР (60 МГц, СРС1 )о » M.д.:

1,0-1,23 (28Н, м); 2,13-2,43 (ЗН, м, Н4, HS)».3,93-4,10 (2H» м, Hg)» (Н, м, Н ); 7 03 7 50 (5Н, м)» (1Н, с); .8,13 (1H, с) .

Пример 3 (ссылочный)-. Син- 50 тез 9- P(1R» 3$, 4R)-4-метил-3,6-(тетраизопропилдисилоксанил)диоксициклонентан-1-ил1гипоксантина.

Безводный толуол (30 мл) добавляют к соединению, полученному н ссылоч-„

55 ном примере 2 (13,0 г, 20 ммоль), с последующим концентрированием при пониженном давлении. Остаток растворяют н 300 мл безнодного толуола и газооЬразный азот .барботируют в раствор в течение ?О мин. После доЬавления гидрнда трибутилолона (11 мл, о

40 ммоль) раствор нагревают при 80 С

I и добанляют кристаллический 2 о -азобисизобутиронитрил (АИБН) (820 мг) четырьмя частями с 15-минутными интервалами. После 3 ч нагревания при перемешивании растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученное масло очищают хроматографией на силикагеле (80 г, растноритель: хлороформ и смесь хлороформа с метилоным спиртом н соотношениях 60:1 — 30:1) и получают указанное н названии примера соединение в ниде бесцветного стеклоподобного вещества (10,4 г).

Перекристаллизацией части полученного продукта из этилового спирта подуо чают беспветные иглы, т.пл. 200-202 С..

Спектр ЯМР (60 МГц, СВС1з)» м.д.:

0,93-.1,20 (28Н, с); 1,97-2,53 (5H, 4,43-5»2! (2Н» М» Н2» H ); 7,81 (1Н„ с); 8,20 (1Н, с).

Пример 4 (ссылочный). Син" тез 9- ((1R» 3R, 4R)-4-(монометокситрифенилметилокси)-метил-3-гидроксилциклопентан-1-ил)-(1-метоксиме-: тил)гипоксантина.

Соединение, полученное в ссылочном примере 3 (19,8 ммоль), растворяют н 240 мл безводного диоксана и к раствору быстро добавляют гидрид натрия (880 мг, 21,8 ммоль) при охлаждении льдом и перемешинании, а затем смесь перемешивают при комнатной температуре 1,S ч. После этого быстро добавляют к смеси метоксиметилхлорид (2 мл, 21,8 ммоль) при охлаждении льдом, Всю смесь перемешивают при . комнатной температуре 3 ч.

Растноритель удаляют при пониженном давлении, а масляный остаток растворяют в ?00 мл хлороформа. Раствор промывают буфером 0,1 M бикарбоната триэтиламмония (ТЭАБ) (рН 7,5, 2 раза по 100 мл) и далее водой (200 мл), сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении, Полученный сироп очищают хроматографией на силикагеле (колокка 5,3х7,0 см, растворитель: ацетоновая вода, 55 — 80%), что дает бесцветное стеклоподобное соединение (8,5 r).

Это соединение (8,0 r) растворяют н 32 мл тетрагидрофурана (ТГФ) и до5 15618 бавляют тригидрат фтористого тетрабутиламмония (THAM ÇH О) (10 г) и смесь перемешивают при комнатной темпера туре полчаса. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а оставшееся масло растворяют в 100 мл воды. Раствор промывают диэтиповым эфиром (2 раза по 100 мл) и из него устраняют соль тетрабутипаммончя обработкой 10 на HOHooáìåííoé смоле Доуэкс-50 (пиридиновая форма, 60 мл).

Элюент и промывочные воды (240 мл) объединяют и концентрируют, а концен "1r рат обезвоживают азеотропно тремя порциями пиридина. Остаток растворяют в 100 мл пиридина, добавляют хлористый монометокситрифенилметил (Ю4ТФИХ) (5,4 г) и смесь перемешивают при 20

37 С 4 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении, а масляный остаток распределяют в 0,1 N буферном растворе бикарбоната триэтиламмония (50 мп) и в .хлороформе (100 мл), ор- 25 ганический слой промывают водой (100 мл), сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении, а концентрат обезвоживают азеотропной дистилляцией с то-. 30 луолом. Получают бесцветный сироп.

Фракцию 0,1 М буфера бикарбоната триэтиламмония и промывочные воды объединяют и концентрируют, при этом восстанавливают монометокситрифеннлметилированное соединение. Это соединение очищают на смоле HP-20 (190 мл; растворитель. "вода и ЗОХ-ная смесь этанол — вода) и после концентрирования и азеотропной дистилляции с пи- 40 ридинбм монометокситрифенилметилируют аналогично описанному. Оба полученных при этом соединения объединяют, очищают хроматографией на силикагеле (80 г; растворитель: смесь хлорофор- 4б ма и метанола в отношении 100:1, 60:1, 50:1) и получают бесцветный стекловидный продукт (6,1 r). Раствор части этого продукта в дихлорметане, если его приливать по каплям к н-гексану, б0 дает белый порошок.

Спектр ЯИР (60 ИГц, СЭС1 ), м.д., 3,40 (2Н, м, H ); 3,45 (ÇH, с, СН ОСН ); 3,80 (ЗН, с); 4,30-4,57 (1H, м, Н ) ", 4-87-5, 10 (1Н, м, Н, );

5,47 (2Н, с, СН ОСН -); 6,73-6,97 (2Н, м); /,17-7,53 (12Н, м); 7,73 (1Н, с); 7,98 (1Н, с).

26 6

Пример 5 (ссылочный). Синтез

1- ((1R, ÇS, 4R)-4-(монометокситрифе-";нипметипокси)метил-3-оксициклопентан1-ип)-(4-карбамолил-5-аминоимидазопа).

Соединение, полученное в ссылочном примере 4 (6,1 r, 10,7 ммоль)

) растворяют в 490 мл этилового спирта и при нагревании с обратным холодильником быстро добавляют теплый 5 M водный раствор гидроокиси натрия (130 мл). Нагревание с обратным холодильником продолжают дополнительно

40 мин; Затем растворитель удаляют прц пониженном давлении. Иасляный остаток растворяют в ?00 мл хлороформа и промывают водой (2 раза по 100 мп), затем О, 1 И буфером бикарбоната триэтиламмония (? раза по 100 мл) и далее насыщенным водным раствором хлористого натрия (100 мп), сушат безводным сульфатом натрия, концентрируют при пониженном давлении и по.лучают сироп. Очисткой этого сиропа хроматографией на силикагеле (90 г; растворитель: смесь хлороформетанопа в соотношении 100:1 — 20:1) получают бесцветный стеклоподобный продукт (3,2 г). Раствор части этого продукта в хлороформе, добавляемый по каплям к н-пентану при перемешивании, дает белый порошок. Моп. вес 521,616.

Вычислено, Х." С 69,08; Н 6,38;

N 10,74.

С ОН И 04 0,5Н О.

Найдено, Е: С 69,14; Н 6,09;

N 10,54.

Спектр ЯМР (100 МГц, CDC1>) Р, м.д.: 1, 36-2, 52 (5H м); 3,00-3, 40 (3H, м, Н, ОН); 3,77 (ЗН, с); 4,124,60 (?H, м, Н,, К ); 4,80-5,28 (?H, ш. с, Н ); 5,64-6,44 (2Н, ш.с, Н );

6,76-6,94 (ÇH, м); 7,15-7,48 (12Н, м; ш.с) .

Пример 6 (ссыпочный). Синтез

1- f(1R, ЗБ, 4R)-4-(монометокситрифенилметилокси)-метил-3-оксицикпопентан-1-ил) — (4-карбамоип-5-(N-бензоил S-ìåòèëèaoòèoêàðÜàìoèë)аминоимида- зола) .

Соединение, полученное в ссылочном примере 5 (0,88 г, 1,7 ммоль) растворяют в ?5 мп безводного ацетона и при нагревании с обратным холодильни ком в течение более 10 мин по каплям добавляют раствор бензоилизотиоцианата (260 мкп, 1,9 ммопь) в ацетоне (8 мл). Растворитепь удаляют при пониженном давлении, а полученное стек.-.

1561826 ловидное вещество светло-желтого цвета очищают хроматографией на силикагеле (15 r, растворитель: смесь хлороформа и метилового спирта в отношении 50:1 — 30:1) и получают светложелтое стекловидное соединение (0,87 r). К этому соединению (0,84 г, 1,2 ммоль) добавляют небольшое количество ацетона и полученный сироп превращают в гомогенный .раствор до+, бавлением 12,5 мл 0,2 .н. гидроокиси натрия и воздействием ультразвука.

При перемешивании добавляют диметилсульфат (130 .мкл, 1,4 ммоль), затем энергичное перемешивание продолжают при комнатной температуре 1 ч, Реакционную смесь смешивают по частям с хлороформом (хлороформ добавляют два раза по 15 мл), органический слой 20 промывают 0,1 М буфером бикарбоната триэтиламмония (3 раза по 15 мл), затем насыщенным водным раствором хлористого натрия (?О мл), сушат безводным сульфатом натрия, концентн- 25 рируют при пониженном давлении, а остаток очищают хроматографией на силикагеле (15 г, растворитель: смесь хлороформа и метилового спирта в отношении 100:1 — 60:1), К полученному 30 таким образом стекловидному веществу добавляют небольшое количество дихлорметана, смесь по каплям добавляют к гексану полученный осадок собирают центриаугированием, сушат и получают целевое. соединение в виде порошка (400 мг). Мол. вес. 689,835.

Вычислено, Х: С 67,90; Н 5,70;

N 10,15 ° (зз Н 11 1зО . ° 40

Найдено, %: С 67,45„ H 5,45;

N 9,89.

Спектр ЯМР (100 МГц, СПС1 ), м.д. 1 34-2,60 (5H, м); (2,52 (ЗН, с, S СНз);. 3,04-3,44 (ЗН, м, Н6); 3,19 (ЗН, с ОСНз); 4,08-4,44 (1Н, м, Н );

4,60-5,00 (1Н, м, Н(); 5,64 (1Н, ш.с, NH ); 6,72-6,94 (ЗН, м), 7, 12-7,52 (15 Н, м); 7,80-7,96 (2Н, м); 11,35 .(iH3 Ое 50

11 р и м е р 7 (ссылочный). Синтез

9- f(1R, ЗБ, 4R)-4-монометокситрифенил- метилоксиметил-3-оксициклопентан-1ил)гуанина.

Соединение, полученное в ссылочном примере 6 (360 мг, 053 ммоль) добавляют к теплому 6 н; раствору гидроокиси натрия (18 мл) и смесь нагревают с обратным холодильником 1 ч. Продукт экстрагируют .из реакционной смеси .хлороформом„ экстракт промывают

О, 1 н. буфером бикарбоната триэтиламмония (30 мл), затем насыщенным водным раствором хлористого натрия (30 мл), сушат безводным сульфатом натрия и подвергают хроматографии на силикагеле (8 г, растворитель: смесь хлороформетилового спирта в отношении .40:1 - б:1). К полученному таким образом стеклообразному веществу добавляют небольшое количество ацетона, смесь по каплям добавляют к бензолу, полученный осадок собирают центрифугированием, сушат и получают целевое соединение (указанное в названии примера) в виде и:горошка (210 мг). М« . нес. 555, 63.

Вычислено /о. (., :, (!: >, 99 в

N 12 60. (;S, H51 N 0.(1, . ° (.i °

Найдено,, % . б /,О, 5,6 ";

И 12,42, Спектр ПП (100. МГ. пиметилсульЬоксид — d. ) u, м.д. 0- j.,бО (5H, м); 3,01 (2И, ш, с);.".,о 4,20 (1Н,м); с, Нв) 10,60 < " Н. и.. с . NH, Пример 8 (с..ыл ни т9-((1Н, 3S, 4К)-4-оксиметил- "-ок;и-. циклопентан- i-ил) -гуанина.

Соединение, полученное в с ном примере 7 (180 мг, 0,33 ммс ль,, растворяют в 10 мл 80Х-ной уксус«;. кислоты, раствор перемешивают при

40 С в течение 4,5 ч ° Растворитель удаляют при пониженном давлении и далее два раза проводят азеотропную дистилляцию с водой. Добавляют воду (10 мл), смесь промывают эфиром (два раза по 10 мл) и удаляют воду при пониженном давлении, получают указач.ное в названии примера соединение в виде бесцветных кристаллов (41 мг), т.пл. 246-248 С,/о(/ =+7,7 (С=0,5, диметилформамид), Q макс (нанометры) (Н О): 255, 278 (изгиб пика); (Н+): 257,282;. (ОН ): 256 (изгиб) 273 .

Мол. вес. 278, 886.

Вычислено, %: С 48,24; Н 6,00;

N 25,11.

С цН, N Оз 0,5 Н О " 1 С Н,ОН, Найдено, %: С 48,61; Н 6,41;

М 25,40.

1561826

Пример 1, N6-бензоил-6 -01

l (4,4-диметокситрифенилметил)-3 -0( (имидаз ол-1-ил) -тиокар бонил-2 -дез оксиаристеромицин. 5

6 I

N -бензоил-6-0-(4,4 -диметокситрифенилметил)-2 -дезоксиаристеромиI цин (2,5 г) растворяют в 10 мл сухого дихлорметана, к раствору добавляют тиокарбонилдиимидазол (8,0 г) и 10

>.мешивают при комнатной темпера20 ч. Реакционную смесь концентд суха и подвергают очистке

" ":о.рафией на силикагеле (Kie де. b0, Merck СО, 50 r,. раствори- 15 тиловый эфир уксусной кислоты). <:. .:"чают стекловидное вещество свет келтого цвета, выход 2,2 r.

Спектр 5!МР <90 МГц, CDC1>) м.д.: 3,80,бН, 82 СНБО-), 8,35 (1Н, 20

Пример N -бензои.."6 -0I ! (4,4 -диметокситрлфенилметил)-2,3дидезоксиаристеромицин.

Производное 3 -тиокарбонила, полу- 25 ченное в примере 1 (2,0 г), растворяют в 20 мл сухого диоксана, к полу-. ченному раствору по каплям добавляют раствор гидрида трибутилолова (4,S г) в сухом диоксане (10 мл) при нагре- 30 вании с обратным холодильником. Тем временем постепенно добавляют крис ( таллы о M -азобисизобутилонитрила (500 мг). Добавление по каплям заканчивают за 20 мин, а нагревание с об-. ратным холодильником продолжают 2 ч.

Растворитель выпаривают при пониженном давлении, масляный остаток очищают хроматографией на силикагел@ (40 г, растворитель: хлороформ) и по- 4р лучают бесцветный порошок (1,1 г).

Спектр ЯМР (90 МГц, CDC1 ) 8 м.д.: 3,80 (6Н, Р, 2CH 0-); 4,80-5,20 (1Н, м, Н1); 3,15 (2H, д, 2Н6); 8,76 (1Нэ Н ) > 9ю10 (1НэЯИН С ) ° 45 (t

П р и м .е р 3. 2,3 -Дидезоксиари-. стеромицин.

Соединение, полученное в примере 2 (1 0 г), растворяют в небольшом коли- gp честве пиридина, к раствору добавляют 50 мл концентрированной аммиачной воды и нагревают в герметичной трубке, рассчитанной на давление, при

60 С 5 ч. Реакционную смесь концентрируют досуха, к остатку добавляют

80Х-ную уксусную кислоту (100 мл) и нагревают при 60 С 2 ч с последующей концентрацией реакционной смеси досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде (100 мл) и дважды промывают воцой. Водный слой концентрируют,досуха, остаток превращают B порошок в эфире и получают 2,3 -диI дезоксиаристеромицин (0,23 г). Мол. вес 251; 29.

УФ-спектр: 9,Н О макс (нм): 260.

Вычислено, Х: С 52,57; Н 6,82;

N 27,87, С Н, И О Н О.

Найдено, Х: С 52,83; Н 6,95;

N 27,54. (Полученный таким образом 2,3 -дидезоксиаристеро "ицин растворяют в эквивалентной п весу 1 н. соляной кислоте. После концентрирования добавляют этанол и раствор концентрируют досуха.

Эту процедуру повторяют несколько раз ° Остаток лерекристаллизовывают из горячего э-: .лового спирта и получают кристаллк :ли хлористоводородной кислоты, т и.;. 173-175 С. Мол.ве

278, 73.

}Зычи .лена, Х: 47,40; Н 6,15;

N 25ь 12 С1 12 ю 72 °

H, N О НС1.0,5 Н О..

Найдено, Х! С 47,98; Н 6,06;

N 24,84; С1 2,71.

/oL/ — 6,79 ((=0,61, Н О) .

П р и и е р 4. Соединение, полученное в ссылочном примере 8 (2,S г), обрабатывают .по примерам 1 — 3 и по лучают кристаллический порошок 9 (18, 4R)-4-оксиметилциклопентан-1ил)гуанидиан (0,3 г), т.пл. 269 С.

Мол. вес.249 27.

УФ Я рН < макс (нм) .. 255, 280 (из- гиб пика);

УФ gl H О макс (нм): 253,270 (изгиб);

УФ ф рН 1 О макс (нм): 258 (из гиб), 270.

Вычислено, Х: С 53,00; Н 6,07;

N 28,10.

С <(Н з О Ь .

Найдено, Х: С 52,81; Н 5,86;

N 27,83.

lk/. — 4,74 (С=0,57, диметилформамид).

9- ((18, 4К)-4-Оксиметилциклопентан-1-ил1гипоксантин получают, если т6 .1 вместо N --бензоил-6 -0-(4,4 -диметокситрифенилметил)-3 -0-((имидазол-1I ил)-тиокарбонил1-2 -дезоксиаристеромицина в примере 1 обрабатывают про-.

i 561826 изводное гипоксантина способом, по примерам 1 — 3. Мал. вес 234 25.

Вычислено, %: С 56,40; Н 6,02;

N --23,92.

С и Н 4 1 14 4.

Найдено, %: С 56,81 Н 6,33; N 24,52.

Пример S, 9- ((1$, 4R)-4-Оксиметилциклопентан-1-ил)гуанин.

1Î

1. Синтез 9-)(1R, 3$, 4R)-4-оксиметил-3- гидроксилциклопентан-1-ил гипоксантина.

Соединение, полученное в ссылочном примере 3 (12,4 г, 20 ммоль), раство- 15 ряют в 200 мл толуола и в смесь добавляют фтористый тетрабутиламмоний (10,46 r 40 ммоль) с последующим нагреЬанием при 75 С 2 ч. Реакционный раствор концентрируют досуха и раст- 20 воряют в воде, Раствор подвергают обессоливанию 30 г активированного древесного угля, неочищенный продукт перекристаллизовывают из смеси метилового спирта и этилового вфира и по- 25 лучают бесцветные кристаллы (4,6 r), т.пл. 170 С, Мол. вес 268,.27.

Вычислено, %: С 49,25; Н 6,01;

N 20,88. - «Н„И О, Н,О. 30

Найдено, %: С 49,08; Н 5,86;

N 20,81.

2. Синтез 9- ((1R, 3$, 4R)-4 -Монометокситрифенилметилоксиметил-3-гидроксилциклопентан-1-ил)гипоксантина.

Кристаллическое соединение (2,3 г, 9,2 ммоль), полученное опис" ííûì методом (1), растворяют в 100 мл пиридина с последующим добавлением монометокситрифенилметилхлорида (3,1 r, 0

10.ммоль), а затем перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч.

Реакционный раствор очищают хроматографией на силикагеле (80 г, растворитель: смесь хлороформа и метилового 45 спирта в отношении 40:1 — б:1) и получают желаемый продукт в виде порошка (4,3 г).

Часть полученного продукта перекристаллизовывают из смеси хлороо „ форма и эфира, т.пл. 244-246 С.

Мол. вес 531,60.

Вычислено, %: С 70,04; Н 5,88;

N 10,54 55

С з1Н о N Op Н О.

Найдено, %: С 70,39; Н S,77;

N 10,38..

3. Синтез 9 ((1 S, 4R) -4-монометокситрифенилметилоксиметилциклопентанt-èë7гипоксантина.

Соединение, полученное описанным методом (2) (4,32 r 8,27 ммоль), растворяют в 70 мл толуола с последуют им добавлением тиокарбонилдиимидазола (?„2 г, t?,4 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре 5 ч.

Реакционный раствор концентрируют досуха, остаток очищают хроматографией на силикагеле (80 r, растворитель:.смесь хлороформа и метанола в отношении 100:1 — 60:1) и получают порошок бледно-желтого цвета (5,2 г).

Полученный таким образом продукт растворяют в 90 мл толуола и подвергают реакции с гидридом трибутилолова (3,4 мл, 12,4 ммоль) и g Ы -азоби, сизобутилонитрилом (270 мг, 1,6 ммоль) методом по ссылочному примеру 3 с последующей очисткой хроматографией на силикагеле (100 г, растворитель: этиловый эфир уксусной кислоты и метиловый спирт в отношении 9:1) и получают желаемый продукт (1,63 г).

Часть продукта перекристаллизовывают из смеси раствора метилового спирта и этилового эфира, т.пл. 175-177 С.

Мол. вес 531, 60.

Вычислено, %: С 72,21; Н 6,06;

N 10,87.

С Н NO 05Н О.

Найдено, %: С 72,69; Н 5,88;

N 10,.92.

4. Синтез 9- ((1$, 4R)-4-оксиметилциклопентан-1-ил)гуанина.

Желаемое соединение может быть получено по ссылочным примерам 4-8 с использованием соединения, полученного методом (3).

Пример 1 (тестовый)..

Материалы и методы.

Клетки. Были использованы в данном исследовании линия клеток-носителей лимфотропного Т-клеточного вируса человека тип I (HTLV-I) МТ-4 и линия клеток-продуцентов лимфотропного

Т-клеточного вируса человека тип III (НП.V-III) No It-4/HTLV, Клетки содер.жались в среде RNI 1640 с с добавлением 10% фетальной телячей сыворотки, 100 ME пенициллина и 100 мкг стрептомицина на 1 мл при 37 С в инкубаторе в атмосфере углекислого газа.

Вирус и вирусная инфекция. Линфотропный вирус T-клеток человека (HT-2) был получен из недостаточной культуры

14

1561826

Формула и з о б р е т е н и я

Рь2 1 где Y — имеет указанные значения, а имеющиеся н пуриновом основании амино- и гидроксигруппы защищены; один из R( и R — гидроксильная группа, а другой — водород, у . подвергают в положении 2 или 3 тиокарбонилированию при комнатной температуре с последующим восстановлением гидридом трибутилолова в приI сутствии K,Ì-азобисизобутиронитрила при 80 — 100 .С и снятием защитных групп.

Составитель И,Федосеева

Редактор M Ïåòðîâà Техред Л.Сердюкова Корректор II.Патай

Заказ 985 Тираж 301 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ" СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский коибинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 клеток-продуцентов MoI — 4 способом, описанным ранее н Virology 146, 272, 1985..Титр этого вируса бх10 цитопатических ед/мл. Заражение клетокносителей МТ-4 вирусом HTLV-III проводили при кратности инфекции 0,002.

Клетки смешивали с вирусным раствором и выращивали 1 ч при 3? С. После абсорбции зараженные клетки проиыва- 10 ли и повторно суспензировали н свежей среде до концентрации Зх10 клеток на 1 мл. Суспензии клеток такой концентрации выращивали как в отсутствии, так и н присутствии различных 15, концентраций карбоциклических 2,3—, дидезоксинуклеозидов в инкубаторе при о, 37 С в атмосфере углекислого газа в течение б дней.

Оценка цитопатического действия,. 20 индуцированного kIIV-HTLV/I.AV, Индуцированный HIV-НЫЛ/LAV цитопатический эффект анализировали путем измерения уменьшения численности жизнеспособных клеток. Выжившие клетки-подсчиты- 25 вали методом исключения скрашивания трипановым синим погибших клеток.

Оценка антигенной экспрессии HIVK П.Ч/?.AV.

Зараженные вирусом. HIV-НП V 30

МТ-4 с вирусоспецифическими антигенами подсчитывали непрямым иммуно-флуоресцентным методом (ИФ). Фиксированные в метаноле клетки инкубировали с разбавленной антивирусной сывороткой человека (протин вируса HIV-НПЛIII) н течение 30 мин при 37 С. Затем препараты промывали н течение 15 мин фосфатным буферным раствором, содержащим 0,15Х хлористого натрия. Клет- 40 ки окрашивали флуоресцеинизотиоцианатои, сопряженным с кроличьими антителами против человеческого иммуноглобулина ((продукт Dakoppatts А/.S.

Copenhogen, Denmark) 30 мин при 37 С 45 и снова промывали фосфатным буферным соленым раствором. Под флуоресцентным микроскопом было подсчитано более

500 клеток и вычислен процент ИФ-положительных клеток.

Из приведенной оценки бало заключено, что предлагаемые соединения имеют выраженную антивирусную активность (протин HIU HTLV -III/LAV. В слу

I чае 2,3 -дидезоксиаристеромицина (пример 3) эффективная концентрация составляет 50-100 мкмоль, а цитотоксичность наблюдается при 5001000 мкмоль соответственно, В случае 9- j(1 S, 4k() -4-гидроксиметилциклопентан-1-ил)гуанина (пример 5) эффективная концентрация составляет

100-200 мкмоль, а цитотоксичность наблюдается при 500-1000 икмоль соответственно.

Способ получения карбсциклических

nvpHHoBbIx нуклеозидов 06pjpH формуJlbIЕ

НО

4 1

2 где Y — пуриноное основание аденин-9ил, гуанин-9-ил, отличающийся тем, что, соединение общей формулы II

6 5Q