Динатриевая соль аденилил(2 @ -5 @ ) аденилил (2 @ -5 @ )-9- (2,3-ангидро- @ - @ -рибофуранозил)аденина, обладающая фиторостостимулирующей активностью

 

Изобретение касается производнык caxapops в частности ди-Ка-соли аденилил(2( -51)аденилил(2 -5 )-9-(2а 3-ангидро-/5-В рибофуранозил)аденина} обладающей фиторостостимулирующей Изобретение относится к области органической химии и касается 2 55 - олигоаденилата - динатриевой соли аденилил(2/-5 )аденилил(2 -5 )-9-

СО1ОЗ ГО:=- =1ЯМХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУЬПИИ

Ä,,SUÄÄ1573834

А3 (g1)g С 07 Н 21/00, А 01 N 57/16

Н АВТОРСКОМУ» CB»4p TEABCYBУ где ь у" активностью, ГОСУДАРСТБЕИИЧЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ HHT СССР

1 (46) 15 09 91. Бюг. № 34 (21) 4609388/04 (22) 09.11.88 (71) Институт биосрганической химии

АН БССР и Институт молекулярной биоло- гии и генетики АН УССР (72) Е.И. Квасюк,, Т.И, Кулак, О.В. Ткаченко, И,А. Иихайлопуло, З.Ю. Ткачук, Л.В. Ткачук, Б.С. Иузыченкс и Г.Х. Мацука (53) 547.693.3 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 954014, кл, А 01 С 1/00, 1980. (54) ДИ1АТРИЕВАЛ СОЛЕ АДЕНИЛИЛ(2

5 )АДЕНИЛИЛ (2 -5 )-9-(2,.3-АНГИДРОР-D-РИБОфУРАН03ИЛ)АДЕНИНА, ОБЛАДАЮЩАЯ ФИТОРОСТОСТИЮ"ЛРУН311БЙ АКТИВНОСТЬЮ (57) Изобретение касается производных сахаров, в частности ди-Na-соли аденилил(2 -5 )аденилил (2 -5 )-9-(2, 3-ан гидр о-P-D-риб офур ан о зил) ад енина, . обладающей фитор остостимулирующей

И зобретение относится к области ,» II органической химии и касается 2,5— олигоаденилата — динатриевой соли аденилил(2 -5 )аденилил(2 -5. )-9(2,3-ангидро-P-D — рибофуранозил) аденина формуль» „о ь, но о4-oy +

2 активностью., Цель изобретения — создание новых более активных соединений укаэанного класса. Целевое соединение получают из соответствующим образом блокированного производного аденозин2-фссфата, используя 6-N-бензоил-(20-ацетил-3-деэокси-3-хлор-P-D-ксилофуранозил)-аденин в качестве терминального фрагмента. Синтез ведут триэфирным способом с использованием сме си трииэопрспилбенэолсульфохлоряда и 1,2,3,4-тетразола в качестве кон".åíñèрующего агента. Целевой продукт вь.целя:от иснообенной хроматографией на ДЕЛЕ-цел полозе А-25 в НСО -форме.

Выход 45,67,, Брутто формула

С Н g 0»у )g Р NO Исполbэование растгсра новогo соединения при обработке посевов озимой пшеницы сортов "Киянка" и "Одесская-66" превосходит эффективность аналогичной обработки растворами дрожжевой PHK в 2 9 и 4,5 раза. 1 табл. спадающей фитор остостимулирующей

BK THBHOCTbN, Цель изобретения — новое соедине"(» нис 2,5 -олигоаденилат, обладающее повышенной фиторостостимулирующей

1573834

Пример. Аденилил(2"-5 )аденилил(2 -5 )-9-(2,3-ангидро- -D-рибол фуранозил) аденин (динатриевая соль) .

К смеси 4 ) мг (0,092 ммоль) 6-0" кг 5 бензоил-9-(2 -0-ацетил-3 -дезокси-3— хлор-P-D-ксилофуранозил) -аденина (II) и 119 мг (0,11 моль) 6-N-бензоил-9(2 -и-нитрофенилэтилфосфо-3 -бензоел-5 -монометокситритют+ПРибоФли 10 нознл)аденина (III) в 1 мл пиридина добавляют 47 мг (0,66 моль) тетразола и 67 мг (0,22 ммоль) триизопропилбензосульфохлорида, перемешивают

20 ч, добавляют 30 мл хлороформа и встряхивают с фосфатным буфером рН

7,4 (2120 мл). Органический слой отделяют, сушат над безводным сульфатом натрия, упаривают остаток хроматографируют на силикагеле (75 смз) . 20

Колонку элюируют смесью хлороформ— метанол при градиенте концентрации последнего 1-10 . Фракции, содержащие продукты реакции, обьединяют» упаривают досуха. Получают 80 мг (62»5 ) блокированного димера ХЧ.

УФ-спектр, фМеб, нм (1яЕ): 234 (4,67)

281 (4,66) .

Растворяют 50 мг (0„036 ммоль) соединения ХЧ в 3 мл 2 -ного раствора и-толуолсульфокислоты в смеси хлористый метилен — метанол„ 7:3.

Через 15 мин раствор разбавляют .хло-, роформом до 30 мл и встряхивают с с фосфатнык буфером рН 7»0 (2ИО мл) .

Органический слой отделяют, сушат над безводными сульфатом натрия и упаpHBBIoT досуха. Остаток -хроматографируют на силикагеле Л 40/100 (20 см )» как описано для соединения

IV Получают 40 мг (90K) детритилиро- ванного димера.Ч. УФ-спектр, 9,до с

МЭОН нм ((1gE) з 234 (4 60)» 281 (4,70).

Конденсируют 200 мг (0,179 ммоль) димера Ч и 270 мг (0,25 ммоль) дизфира ХХХ в 1 8 пириднна в присутствии 105 мг (1 5 ммоль) тетразола и

152 мг (0»5 ммоль) тринзопропилбензолсульфохлорида в течение 20 ч . Реакционную смесь обрабатывают и .хроматографируют на силикагеле Л 4 О/100 . (150 см»)» как описано для соединения ХЧе Получают 270 мг (72,73) блокированного тримера VI. УФ-спектр, нм (lgE): 231 (4»85), 277 вакс (4,81),.

Растворяют 270 мг (0,13 ммоль) трииефа VI в 7 мл 2Х-ного раствора и толуолсульфокислоты в смеси хлористый метилен — метанол 7:3, через

10 мин разбавляют хлороформом до

100 мл и встряхивают с фосфатным буфером рН 7,0 (2ФЗО мл). Органический слой отделяют, сушат над безводным сульфатом натрия и упарнвают досуха.

Остаток растворяют в 60 мл О;5 М раствора 1,5-дназабицикло(5,4,0)-ундец-5-ена (ДБУ)» выдерживают 20 ч, добавляют 30 мл 1М раствора уксусной кислоты в пиридине и упаривают раствор досуха. Остаток упаривают с .пиридином (3 Х15 мл), раствсфяют в 30 мл концентрированного водного раствора аммиака, выдерживают раствор 20 ч и упаривают досуха. Остаток хроматографируют на ДЕАЕ-целлюлозе в НСО -фор3 ие (150 см ) . Колонку .элюируют раствором триэтиламмонийбикарбоната при градиенте концентрации от 0,02 до

0,2 М.,Фракции, содержащие тример объединяют и лиофилизуют. Получают

6S,6 мг (45,6 ) аденилил (2 -5 )аденилил(2 -5 )-9-(2»3-ангидро-Р-D-рибо/ г фуранозил)аденина (I) в виде триэтил-. аммониевой соли. Для удобства в работе соединение переводят из триэтиламмониевой в натриевую соль действием на раствор триэтиламмониевой соли в метаноле раствором натрия иодистоМебН го в ацетоне. УФ-спектр, Я, нм

lHQKC» (1g E): 259 (4, 5 7).

ПМР-спектр (D<0) о в м.д., внутренний стандарт-трет-бутиловый спирт .

6, 93; 6,86; 6,61; 6 59; 6,46-синглеты по 1Н (Н-2, Н-8); 4,88 с (1Н, Н-1).

4,88д (1Н, Н-1, 1 1 2 -4 2 Гц);

4,50д (1Н, Н-1, J 1 2 -2 4 Гц).

Суо Нзз 01 N,g Рд Ма.р. 951»6 5.

Исследование биологической активности аденилил (2 -5.)аденилил-(2—

5 )-9-(2,3-ангидро-/ -0-рибофуранозил) аденнна в виде соли (1) .проводилось на посевах озимой пшеницы сортов "Киянка" и "Одесская-66". Посевы пшеницы на VIII этапе органогенеза (конец колошения — начало цветения) на,рембдоьжэированных делянках rio 25 и ; (в четырех повторах) опрыскивались раст-. вором 2,5-олигомера Х в концентрациях 0,25 мг/л, 0,025 мг/л 0»0025 мг/л

-и 0,00025 мг/л. Для опрыскивания каждой делянки использовалось .по 1 л раствора соответствующей концентрации» что в пересчете расхода олигбие» ра Х на 1 га посевов составляло

73834 нилил (2" -5 "} -9- (2, 3-ангидр о- -Р-рибофуранозил) аденин (1) (в виде соли), синтезируемый из доступного сырья

5 н реагентов является новым предстае вителем 2 5 -олигоаденилатов, содер1 жащим 2,3 -ангидропроиэводное аденоэина в терминальном фрагменте и проявляющим биологическую активность при концентрации 2,5а10 М. Соедине-9 ние Х можно отнести к новому поколению экологически чистых стимуляторов роста растений, так как оно состоит иэ компонентов, являющихся участниками естественных биологических процессов в растениях и в живых орга низмах. ноф

НО О-Р-0 Ка

"Ре

НО О-P-OM Абв

30 где

35

Влияние динатриевой соли аденилил(2 -5 )аденилип(2 -5 )-9-(2,3ангидро-ф-П-рибофуранозил)аденина на урожайность озимой пшеницы сортов "Киянка" .и "Одесская-66"

Урожайность, Разность с контролем

Концентрация, r /.ãà

Препарат ц/га ц/га Х

Вода

63,9

65,6

67,7

66,0

Контроль

Киянка

PHK

+297

+1,7

+5,9

+3,8

100

+3,3

+2,1.50

100, 10, 1 и 0,01 мг соответственно.

В качестве контроля использовалась вода, а в качестве стандарта — раствор суммарной дрожжевой PHK в концентрациях 0,5 г/л, 0,25 г/л, 0,125 г/л и 0,00025 г/л, что в пересчете расхода PHK на 1 га посевов составляло 200, 100, 50 и 0,1 г соответственно. Урожайность пшеницы пересчитывалась на 1 га.

Использование растворов 2,5 -олигоаденилата I для опрыскивания посевов .пшеницы приводило к четко выраженному повышению ее урожайности. Использование раствора соединения Х в оптимальной концентрации

0,025 мг/л повышало урожайность пшеницы сортов "Киянка" с 63,6 до 75,0 ц с гектара или 17,47, давая прибавку в 11,1 ц/га или 17,47, тогда как при испольэованйи раствора PHK в концентрации 0,25 г/л эта прибавка составляла 3,8 ц/га или 5,9Х. Применение раствора олигомера 1 в оптимальной концентрации .0,25 мг/л для обработки посевов пшеницы "Одесская-66" приводило к повышению ее урожайности с

53,2 до 62,2 ц/га (прибавка в 9 ц/га или 16,97., а при использовании раствора PHK в концентрации 0,125 г/л эта прибавка составляла 2 ц/га или

3,8X).

Сравнительные данные проведенных испытаний представлены в таблице.

Представленные результаты свидетельствуют о том, что использование

g 1 раствора 2,5 -олигоаденилата I в оптимальной концентрации при обработке посевов озимой пшеницы сортов

"Киянка" и "Одесская-66" превосходит эффективность аналогичной обработки растворами PHK в 2,9 и в 4,5 раза

I соответственно. Аденилил(2 -5 )адеФормула изобретения

t 1

Динатриевая соль аденилил(2 -5 ) аденилил(2 -5")-9-(2,3-ангидро-Р-Ррибофуранозил)аденина формулы

1 обладающая фиторостостимулирующей ак тивностью.

1573834

Продолжение таблицы

Г г

Сорт

Урозайность, ц/га

Препарат Концентрация г/.га

Разность с контролем ц/га 7

Олигоаде" нилат

72,8

75,0

0,01

О, 001

1191

+8,6

72 5

Одесская-55

53,2

Контроль Вода

200

50 О

54,8

РНК

-3,2

100

+3,0

55,2

53,7

+3,8

0,1

Олигоаденилат

0,1

+2,6

+3,1

+5 8

+16,9

+6,4

10,1

НСР, 5,5

Составитель Г. Коннова

Редактор Е. Кравцова Техред A.Êðàâ÷óê Корр::=ктор C. Щекмар

Заказ 3726 Тираж Л адпи.с но е

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

1 1 3035 Москва» Ж 35 Рауиская наб о до 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород„ул. Гагарина, 101

04,01

0,001

030001

55 8

56 3

62,2

+13,9

+17,4

+13,5, 12,7