Способ получения гликозида

 

Изобретение относится к производным антрациклиновых гликозидов, в частности к получению гликозидов ф-лы @ , где R 1 - H /1а/ или гидроксил /1б/, обладающих противоопухолевой активностью. Цель - разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут исходя из 3Ъ-амино-3Ъ-эпидаунорубицина, и через соответствующие 3Ъ- эпи-N-салицилидени N-салицилиден-3Ъ -эпи-4-0-трифторметансульфонат производные, последнее затем подвергают кислотному гидролизу. Полученный 3Ъ-деамино-4Ъ-деокси-3Ъ-4Ъ-эпи-3Ъ-4Ъ-эпиминодаунарубицин через соответствующее N-трифторацетил производное превращают в 4Ъ-деокси-4Ъ-эпи-N-трифторацетил-3Ъ-деамино-3Ъ-гидроксидауномицин, который после мягкого щелочного гидролиза переводят в целевой продукт 1а, который в свою очередь в случае необходимости через соответствующее 14-бром производное дауномицина переводят в производное доксорубицина 1б. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„, 1590045

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н flATEHTV сосн,в, К СО 0 ОН

HN 0

" /Г

° HCl, (I) 0Н

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

40 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4202740/23-04 (22) 11.06.87 (31) 8614323 (32) 12.06.86 (33) GB (46) 30.08.90. Бюл. 9 32 (7t) Фармиталиа Карло Эрба С.п.А.(IT) (72) Антонино Суарато, Микеле. Карузо, Серджио Пенко и Фернандо Джулиани (IT) (53) 547.455.07(088.8) (56) Патент СССР Р 1378784, кл. С 07 Н 15/24, 1982. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛИКОЗИДА (57) Изобретение относится к производным антрациклиновых гликозидов, в частности к получению гликозидов ф-лы

СОСН,Н, О ОН

I ОН

НЗСО О ОН i

Изобретение относится к способу получения новых антрациклиновых гликозидов общей формулы (Д1) C 07 Н 15/24, А 61 К 31/70

2 где R, — Н (Ia) или гидроксил (Тб), обладающих противоопухолевой активностью. Цель — разработка способа получения более активных соединений.

Получение ведут исходя из 3 -амидо-!

-3 -эпидаунорубицина и через соответствующие 3 -эпи-N-салицилиден- и N-..

-салицилиден-3 -эпи-4-0-трифторметансульфонат производные, последнее затем подвергают кислотному гидролизу.

Полученный 3 -деамино-4 -деокси-3 -4 -эпи-3,4 -эпиминодаунарубицин через соответствующее N-трифторацетил производное превращают в 4 -деок-, си-4 -эпи-N-трифторацетил-3 -деамино-3 -гидроксидауномицин, который после мягкого щелочного гидролиза переводят в целевой продукт Еа, который в свою очередь.в случае необходимости через соответствующее 14-бромпроизводное дауномицина переводят в производное доксорубицина Тб. 3 табл. где R, — водород или гидроксильная группа, обладающих противоопухолевой активностью, Цель изобретения †-получение новых производных антрациклиновых гликозидов, обладающих лучшими свойствами, чем родоначальники данного ряда гликозидов даунорубицин и доксорубицин достигается путем синтеза исходя из

3 -амино-3 -эпидаунорубицина и через соответствующие 3 -эпи-N-салицилиден и N-салицилиден-3 -эпи-4-0-трифторI метансульфонат производные, последнее

1590045 затем подвергают кислотному гидролизу, полученный 3 -деамино-4 -деокси-3 -. 4 -эпи-3,4 - эпиминодаунарубицин через соответствующее N-трифт эраце."

5 тил, производное превращают в 4 -деокси-4 -эпи-N-трифторацетил-3 -деами-! но-3- гидроксидауномицин, который после мягкого щелочного гидролиза переводят в целевой продукт Ia,êîòîðûé в свою очередь в случае необходимости через соответствунйцее 14-бромпроизводное дауномицина переводят в производное доксорубицина Хб.

П р и м e p 1 3 Эпи N-салици лидендаунорубицин (ХХХ).

Раствор 2 r 3 -амино-3 -эпидаунорубицина (II) в смеси 80 мл воды и

20 мл ацетона обрабатывают при комнатной температуре 0,5 мл салицилаль- 20 дегида при рП 8. Через 10 мин добав1 ляют этилацетат и отделяют органическую фазу, дважды промывают ее водой, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досуха под ва куумом.

Остаток сначала растирают с гексаном для удаления следов салицилальдегида, затем собирают, сушат под вакуумом при 30 С и получают целевой продукт почти с количественным выходом, R = 0,21 при тонкослойной хроматограэ фии на Кизельгеле Р 254 (Yepa), ис-. пользуя в качестве элюирующего растворителя смесь метиленхлорида — ацетон 8:2 об ° /об.

Пример 2. 3 -Деамино-4 -деокси-3 -эпи-4 -эпи-3,4 -эпииинодау норубицин (IV) (азиридин), 1

К раствору 2 г 3 -эпи-N-салицили40 дендаунорубицина (ХХХ) в 20 мл безводного дихлорметана и 2 мл сухого пиридина при -10 С добавляют раствор о

0,8 мл трифторметансульфоангидрида в

10 мл дихлорметана. После выдержки 45 смеси при -10 C в течение 1 ч ее разбавляют дихлорметаном и промывают водой, холодной 0,1 М соляной кислотой, холодным водным 57;ным бикарбонатом натрия и водой, органическую фазу после сушки над безводным сульфатом натрия фильтруют, растворитель отгоняют в вакууме, получая 0-салицил:иден-. 3 —

-эпи-4-0-трифторметансульфонат.

R 0,50 при тонкослойной хроматографии на Кизельгеле P 254 (Мерк), ис

55 пользуя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметана и ацетона в соотношение 95:5 об,/об.

Полученный сырой продукт растворяют в 50 мл метанола и добавляют 0,2 r моногидрата tt-толуолсульфокислоты.

Раствор в течение 1 ч выдерживают при комнатной температуре, затем к нему добавляют 100 мл воды и экстрагируют небольшим количеством дихлорметана.

Водную фазу доводят до рН 8,0 1 N едким натром и добавляют дихлорметан.

Органическую фазу отделяют, промывают водои, сушат над безводным сульфатом натрия и растворитель выпаривают до малого объема.

Смесь очищают на хроматографической колонке с-силикагелем, поддерживая при рН 7, используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлор метан — этанол, Элюат, содержащий це- левой продукт (IV), промывают водой, дихлорметаном и кристаллизуют. >

Масс-спектр 509 (м+); т.пл. 135 -137 С.

R 0 38 при тонкослойной хроматоэ графии на Кизельгеле F 254 (Мерк) . используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметан — метанол - уксусная кислота — вода (30:4:

:1:0,5 об./об.). Н ЯИР-спектр (200 МГц, в CDCI ):

8,02 (двойной дуплет, Х = 1,1, 7,7 Гц, 1Н, Н-1); 7,76 (двойной дуплет, J =

° 7,7, 7, 7 Гц, 1Н, Н-2); 7,37 (двойной дуплет, J = 1, 1, 7,7 Гц, 1Н, Н-3);

5,31 (двойной дуплет, J = 3,0, 4,8 Гц, 1Н, Н-1 ); 5,17 (двойной дуплет, J =

= 2,0, 3,6 Гц, 1Н, Н-7); 4,32 (двойной дуплет, J = 1, 6,7 Гц, 1Н Н-5); 4,07 (синглет, ЗН, ОСН,-4); 3,17 (двойной дуплет, J = 19,2 Гц, 1Н, Н-10е); 2,95 (дуплет, J = 19,2 Гц, 1Н, Н-10ах);

2,46 (тройной дуплет, J = 2,0, 2,0, 15,0 Гц, 1Н, Н-8е) ; 2,43 (синглет, ЗН

C0CH3); 2,30 (тройной дуплет, J = 1,5, 4,3, 6,4 Гц, 1Н, Н-3); 1,9-2,0 (мультиплет, 2Н, Н-8ах, kl-2ах).; 1,87 (тройной дуплет, J = t,5, 3,0, 14,6 Гц, 1Н

Н2 е)1 1,44 (дуплет, J = 6,7 Гц, ЗН, СН,-5 ) .

Hp и м е р 3. 3 -Деамино-4 -деокси-3, -окси-4 -эпи-4 -аминодаунорубиГ цин гидрохлорид (7.а) .

1 г азиридина переводят в N-трифторацетильное произ водное (V) обработкой 1,2 мл ангидрида трифторуксусной кислоты в безводном дихлорметане. У

После обработки сырой продукт iR !

0,7 при использовании тонкослойнои хроматографии на Кизельгеле F 254

90045 6

5 15 (Керк), применяя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметанацетон в соотношении 4:1 об./об.) растворяют в 20 мл ацетона и обрабатывают каталитическим количеством серной кислоты при 10 С. Смесь разбавляют 200 мл дихлорметана, промывают водой, водным 5Х-ным бикарбонатом натрия и водой. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток очищают на колонке с силикагелем, используя дихлорметан в качестве элюирующего растворителя. В результате получают 0,7 г 4 -деоксиФ

-4 -эпи-И-трифторацетил-3 -деамино-3—

-гидроксидауномицина (Ч1).

R 0,21 при применении тонкослойной хроматографии на Кизельгеле

F 254 (Мерк), используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлор-метана и ацетона (4:1 об./об.).

Продукт (VI) медленно. растворяют в водном 0,1 н,растворе едкого натра при 0 С, осуществляя гидролиз N-трио фторацетильной защитной группы. После

1-часовой выдержки при О С раствор доводят до рН 8,6 децинормальной соляной кислотой и экстрагируют дихлорметаном. Растворитель выпаривают, получая 0,5 г остатка, который обработкой метанольным хлористым водородом переводят в хлоргидрат целевого продукта (Ia).

Уасс-спектр ГД 527 (М+), т.пл.

153 С (с разлож.).

R О, 18 на тонкослойной хроматограмме на Кизельгеле F 254 (Мерк), используя в качестве растворителя дихлорметан — метанол — уксусная кислота — вода в соотношении 30:4:1:

:0,5 об./об.

Н-ЯИР (200 МГц, CDC13): 8,02 (двойной дуплет, J 0,9, 8,5 Гц, 1Н, H-1); 7,77 (двойной дуплет, J = 8,5, 8,5 Гц, 1Н, Н-2); 7,38 (двойной дуплет, J = 0,9, 8,5 Гц, 1Н, Н-3); 5,52 (двойной дуплет, J = 1,40 Гц, 1Н, Н-1); 5,28 (двойной дуплет, J 1,8, 4,0 Гц, 1Н, Н-7);

4,07 (синглет, 3Н, ОСН,-4); 3,69 (двойной квартет, 7 = 6,3, 9,5 Гц, 1Н, Н-5); 3,51 (тройной дуплет, J =

4,8, 9,5, 11,6 Гц, 1Н, 11-3); 3,22 (двойной дуплет, J = 1,9, 18 9 Гц, 1Н, Н-10е); 2,94 (дуплет, J = 18,9 Гц, 1Н, Н-10ах); 2,40 (синглет, 3H, COCH,);

2,2-2,4 (мультиплет, 1Н, Ц-8ах) ; 2,30 (двойной дуплет, J ..= = 9,, 5,,9,5 Гц, 1Н+

Н-4); 2,0-2,2 (мультиплет, 2Н, Н-8е, Н-2е); 1, 70 (тройной дуплет, J 4,0

4,6, 13,2 Гц, 1Н; Нт2ах); 1,31 (дуплет

Ю = 6э3 Гц» ЗН СНэ 5)

Пример 4. 3 -Деамино-3 -окси-4 -деокси-4 -эпи-4 -аминодоксорубис (/ цин гидрохлорид (?б) .

0,5 г полученного соединения Ia, растворенного в смеси 7,5 мл безводного метанола, 21 мл диоксана и 0,5 мл этилфторформиата, подвергают обработке 2,1 мл раствора 0,93 г брома в

10 мл хлороформа. Через 3 ч при 10 С смесь выливают в смесь 105 мл этилового эфира и 50 мл петролейного эфира. Полученный красный осадок после фильтрации и промывки этиловым эфиром растворяют в смеси 15 мл ацетона и 15 мл 0,25 н.водного бромистого во20 дорода. Спустя 15 ч при комнатной температуре добавляют 9 ил воды и раствор экстрагируют хлороформом, удаляя агликоны.

Затем водную фазу экстрагируют

25 И-бутанолом до тех пор, пока экстрак-. ты обесцветятся.

Органические экстракты (и-бутанол) выпаривают под вакуумом до небольшо- го объема (около 9 мл) и осаждают этиловым эфиром, получая 0,45 г соответствующего 14-бромпроизводного. Полученное производное растворяют в

9 мл 0,25 н.водном растворе бромистого водорода и обрабатывают 0,75 г формиата натрия в 8 мл воды.

Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре при перемешивании в течение 48 ч и затем добавляют

1 н.хлористоводородной кислоты, дово40 pÿ рН до 4.

Полученную смесь экстрагируют смесью 1: 1 этиловый эфир - этилацетат с целью удаления некоторых линофильных загрязнений. Водную фазу, после под- .

45 нятия значения рН до 7,6 водной NaHCO повторно экстрагируют хлороформом до тех пор, пока экстракты не обесцветятся, !

Все собранные хлороформные экстракты сушат над На 80, выпаривают до не большого объема (около 45 мл) под вакуумом. Полученный красный раствор до водят до рН 3,5 водным метанольным раствором хлористого водорода и добавляют в.него избыток этилового эфира, получая 0,30 г целевого соединения (Is)е Т.пл. 180 С (разл.). СРД-ИС

543 (М+) .

1590045

Д 6-о (нг/

Соединение

/Dx

Не1а Р-3I

19 10,5

11 24,5

230

43

235

Даунорубицин

Соединение

О/20

2/20

О/20

О/10

О/10

О/10

10 165

15 192

8,2 175

11 5 230

16, 1 240

22,5 130

Даунорубицин

35

Соединение ая ть +

О/10

8/10

О/10

0/10

9/10 45

10/10

2,9 155

4,4 170

1,96 155

2,9 150

4,4 140

6,6 100

Даунорубицин

О ОН

СОСН,В, ОН

83СО О ОН

ОН

ТСХ на Кизельгеле F 254 (Мерк) при использовании злюентной системы ди" хлорэтан:метанол; уксусная кислота:вода (30:4:1:0,5 об./об.) показывает

К = 0,1 °

Биологическая активность.

Цитотоксичную активность новых антрациклиновых гликозидов определяли ин витро на клетках Не1а-клетках шеечной 1 эпителиальной карциономы человека клетки, клетках Р-388 лейкемии, чувствительны к доксорубицину; клетках Доза, определяющая 50% подавления контрольными.

Соединения, опыты с которыми прове-25 дены ин виво против P-388 асцитической лейкемии и Гросс-лейкемии, показали хорошую противоопухолевую активность по сравнению с даунорубицином, особенно при пероральном выведении.

Опыты проведены Hà CDF мьппах, зараженных интралеритониально 10 клетка6 ми P-388 асцитической лейкемии.

Результаты приведены в табл. 2.

Та бли ца 2

+ Обработка интраперитониально день спустя после заражения опухолевыми клетками.

«+Среднее время жизни обработанных 50 препаратом мышеи, отнесенное к

1 среднему времени жизни в контрольной группе х 100.

«««Оценка проведена на основе данных прижизненной биопсии. 55

Действия против Гросс-лейкемии проведены на СЗН мьппах, инокулированных внутривенно 20 х 10 клетками лейкемии.

P-388/Dx лейкемии, устойчивых к доксорубицину; Lovo-клетках человека аденокарциномы толстой кишки, чувствительные к доксорубицину; Lovo/Dxклетках человека аденокарциономы толстой кишки, устойчивых к действию док сорубицина. .1

Продолжительность действия соединения 24 ч (в сравнении с даунорубицином)..

Результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1 числа клеток по сравнению с

Результаты приведены в табл. 3.

Таблица 3

Лечение внутривенно день спустя после инокуляции, опухоли.

»» Средняя продолжительность жизни мышей, подвергнутых лечению,. к средней продолжительности мышей в контрольной группе.

""» Оценка на основе данных првжизненной биопсии.

Формула изобретения

Способ получения гликоэида общей формулы

1590045

О ОН

ll СОСн 3

ОН

НЗСО О ОН i вн, Н3

0Н растворенный в смеси вода — ацетон

4:1 об./об, подвергают взаимодействию при комнатной температуре с салицилальдегидом с получением соответствующего 3 -эпи-N-салицилиденпроизводного (ЕЕЕ), которое подвергают взаимо- 25 действию с трифторметансульфоновым ангидридом при -10 С в безводном дихлорметане и в присутствии сухого пиридина и полученный N-салицилиден-3 —

-эпи-4-0-трифторметансульфонат раст- 30

Составитель Г. Коннова

Редактор Н. Киштулинец Техред М.Дндык Корректор Н. Король

Заказ 2550 Тирах 301 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета rio изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент .", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 где R — водород (Ia) или гидроксил (Еб), отличающийся тем, что 3 -амино-3 -эпидаунорубицин формулы

S воряют в метаноле и подвергают кислотному гидролиэу при комнатной тем-, пературе в течение 1 ч п-толуолсульфокислотой с получением 3 -деамино-4 «

-деокси-3 -эпи-4 -эпи-3,4 -эпимино-дауf р норубицина (IV), который превращают в соответствующее N-rpa@vopaqermпроизводное (V) обработкой трифторуксусным ангидридом в растворе дихпорметана, которое в свою очередь подвергают взаимодействию с каталитическим количеством серной кислоты в ацетоне при 10 С и полученный 4 -деокси =

-4 -эпи-N-трифторацетил-3 -деамино-3 гидроксидауномин (UI) подвергают прн 0 С в течение 1 ч мягкому щелоч. ному гидролизу 0,1 н.водным раствором гидроокиси натрия, получая целевой продукт Еа в виде гидрохлорида обработкой метанольным хлористым водоро дом в метаноле, который, в случае необходимости, превращают в соответствующее 14-бромпроизводное путем обработки водным раствором брома, из которого после гидролиза водным раствором формиата натрия при комнатной температуре получают целевой продукт Еб в виде гидрохлорида.