Способ получения культуральной энцефалитной ^^и-:^ис tj'aвакцины

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 02.1.1964 (№ 874015/61-16) 1(л. 30h, 6 с присоединением заявки ¹

Приоритет

МГ1К А 61k

УД1- 615 371(088 8) Государственный комитет по делам изобретений и открытий СССР

Опубликовано 05.11.1965. Бюллетень ¹ 3

Дата опубликования описания 15.11.1965

Авторы изобретения

M П. Чумаков, А. В. Гагарина, Л. М. Вильнер, М. К. Ханина и

В. И. -Лакииа

Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН ССС

ЫОэЛАЯ

3 аявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЪТУРАЛЬНОЙ ЭНЦЕФАЛИТИОЙ

ВАКЦИНЫ

Лод>гисная гру>гпа № 189

Известны способы получения культуральной энцефалитной вакцины, например вакцины против клещевого энцефалита, инактивированной формалином. Указанные способы предусматривают вырашивание вируса в однослойных культурах куриных эмбрионов с по следующей инактивацией вирусной жидкости формалином (1: 2000) при 37 С в течение трех суток, адсорбцией вируса на гидроокиси алюминия и декантацией 50% надосадочной жидкости, Такая методика выращивания весьма трудоемка и не обеспечивает удовлетворительной иммуногенности вакцин.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что вирус выращивают во взвеси трипсинизированных клеток и ипактивируют в присутствии клеток и клеточного детрита.

Это упрощает производственный процесс и повышает иммуногенные свойства вакцины.

Для изготовления культуральной вакцины против клещевого энцефалита получают первично оттрипсинизированные клетки куриных эмбриональных фибропластов, заражают взвеси клеток вирусом, инкубируют их во взвешенном в среде состоянии в сосудах большой емкости, инактивируют вирус формалином при

37 С и удаляют клетки и клеточный детрит сепарированием с последующей фильтрацией через осветляющие и стерилизующие фильтры.

Первично оттрипсинизированные клетки фибропластов получают в результате трипсинизации 11-дневных куриных эмбрионов. Сливы оттрипсинизированных клеток до центрифугирования разбавляют равным количеством среды, состоящей из 0,5% гидролпзата лактальбумина на солевом растворе Эрля с добавлением 3% нормальной бычьей сыворотки.

Из оттрипсинизированных клеток составляют взвеси необходимой концентрации (1,5—

10 2,5 млн. клеток на 1 лл). Для лучшей адсорбции вируса на клетках при заражении счачала готовят взвешенную культуру пятикратной концентрации, а через 2 — 2,5 час инкубации при комнатной температуре ее разводят четы15 рехкратным объемом среды. Для заражения клеток используют штаммы «Софьин» или

«Пан» в виде эмульсии мозговой ткани инфицированных мышей из расчета 10г LD,-o,мл взвешенной культуры.

20 Для инкубирования инфицированных взвешенных культур используют среду Паркера № 199 на растворе Эрля с добавлением 0,1% гидролизата лактальбумина и 5% аминопептида при рН 78.

25 Взвешенные культуры получают либо в бутылях нейтрального стекла емкостью 5 л и более, либо в специальных реакторах. В обоих случаях необходимо постоянное перемешивание. Инкубирование инфицированных культуп

30 производят при 37"С в течение б4 час. Дпя

167967

Предмет изобретения

Составитель В. А. Таратута

Текред А. А. Кудрявицкая Корректор Л. В. Тюняева

Редактор А. If. Байнова

Заказ 12/10 Тираж 975 Формат бум. 60>(90 /8 Объем 0,13 пзд. л. Цена 5 коп.

ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытий СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 поддержания равновесия в содержании СО емкости должны быть герметизированы и над слоем жидкости оставляют прослойку воздуха примерно на /з объема.

Во время инкубации до 50о/о клеток отмирает, и при этом происходит дополнительный выход в жидкую фазу внутриклеточного вируса и веществ, стабилизирующих инфекционные и антигенные свойства вируса. По окончании инкубации непосредственно в инфицированную культуру добавляют формалин до концентрации 1: 2000. Инактивация продолжается 96 час при 37 С в присутствии клеток и клеточного детрита. После инактивации производят сепарацию и фильтрацию инактивиров анной инфицированной взвешенной культуры для удаления клеток и клеточного детрита.

Способ получения культуральной энцефалитной вакцины, например вакцины против клещевого энцефалита, инактивированной

10 формалином, отличающийся тем, что, с цель1о повышения иммуногенных свойств вакцины н упрощения производственного процесса, вирус выращивают во взвеси трипсинизированных клеток и инактивируют в присутствии клеток

15 и клеточного детрита.