Способ получения окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности
Изобретение относится к способам получения окрашенных соединений и может быть использовано в энзимологии, микробиологии и микробиологической промышленности в качестве субстрата для определения целлюлазной активности в ферментных препаратах и в биологических средах. Целью изобретения является упрощение способа, увеличение выхода и повышение качества целевого продукта. Способ заключается в том, что при получении окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание активного красителя, содержащего дихлортриазиновые или монохлортриазиновые группы с водонерастворимой оксиэтилцеллюлозой при 25-90°С. Краситель берут в количестве 2-50% от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой дистиллированной водой. 1 з.п.ф., 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 4270009/30-13 (22) 12.05.87 (46) 23.10.90. Бюл. № 39 (71) Ташкентский государственный университет им. В.И.Ленина (72) К.Султанов, Б.Т.Юлдашев, Ш.P.Ìàäüÿðîâ, Г.В.Никонович и М.N.Ðàõèìoâ (53) 577.15.08 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
¹- l056055, кл. G 01 N 33/52, 1983.
Рабинович M.Ë, Савицкене P.Þ., Герасимас В.Б., Мельник N.С., Новикова Т.В., Степанавичюс f0.Þ,, Денис Г.Й., Клесов А.А. Окрашенный субстрат целлюлаз. Области применения. — Биоорган. химия, 1985, т. 11, с. 1330-1342. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКРАШЕННОГО
СУБСТРАТА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛАЗНОИ АКТИВНОСТИ (57) Изобретение относится к спосоИзобретение относится к способам получения окрашенных соединений и может быть. использовано в энзимологии, микробиологии и микробиологической промышленности в качестве субЪ
/ страта для определения целлюлазной ак тив но сти в ферме нтных препаратах и биологических средах.
Цель изобретения — упрощение спо-, соба, увеличение выхода и повышение качества целевого продукта.
Способ заключается в том, что при получении окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание ак
„,80„1601122 А 1 (1)5 С 12 Q 1/34
2 бам получения окрашенных соединений и может быть использовано s энзимологии, микробиологии и микробиологической промьппленности в качестве, субстрата для определения целлюлаз- ной активности в ферментных препаратах и в биологических средах. Целью изобретения является упрощение способа, увеличение выхода и повышение качества целевого продукта. Способ заключается в том, что при получении ,окрашенного субстрата для определения целлюлазной активности осуществляют связывание активного красителя, содержащего дихлортриазиновые или мо- нохлортриазиновые группы с водонерастворимой.оксиэтилцеллюлозой при
25-90 С. Краситель берут в количестве 2-50Х от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой дистиллированной водой.
1 з.п. ф-лы, 1 табл. тивного красителя, содержащего дихлортриазиновые или монохлортриаэиновые группы, с водонерастворимой ока сиэтилцеллюлозой при 25-90 С, причем краситель берут в количестве 2507 от массы оксиэтилцеллюлозы и несвязавшийся краситель удаляют промывкой водой.
Пример 1. 10 г оксиэтилцеллюлозы суспензируют в 100 мл 0,2Хного раствора красителя активного золотисто-желтого 2КХ, перемешивают
10 мин, вносят 20 г Na 1601122 (11 Г04 12Н О и перемешивают еще 1 мин. Все операции проводят при 3 С. Окрашенный продукт отделяют ф льтрованием, промывают теплой водой 5 д исчезновения окраски в ромывных в дах и высушивают íà воздухe. Выход 9,6 г. Пример 2. 10 г оксиэтилцелл оэы суспендируют в 100 мл 2Х-ного аствора красителя активного золоисто-желтого 2КХ, далее процесс проодят как в примере 1, с тем изменеием, что после добавления фосфата атрия перемешивание осуществляют О мин. Выход 10,5 r. Пример 3. 10 г оксиэтилцелозы суспендируют в 100 мл 0,5Хого раствора красителя активного рко-желтого 53, перемешивают 10 мин, носят 30 r Na SOq и продолжают переешивать 30 мин. Затем приливают 0 мл 15Х-ного раствора Na POg 12H O перемешивают еще 40 мин, Все операо ии проводят при 80 С. Остальные перации как в примере 1. Выход 9,8 г. Пример 4. 10 r оксиэтилцелюлозы суспендируют в 100 мл 5Х-ного аствора красителя активного яркоелтого 53, перемешивают 10 мин, вносят 30 г Na SO+ и продолжают перемешивать 30 мин. Затем приливают 30 мл 15Х-ного раствора Na>PO< 12Н О и перемешивают еще 60 мин, Все операо ции проводят при 80 С. Остальные 35, операции как в примере 1. Выход 12,,4 г. Пример 5. Определение цел люлазной активности. В двух пробирках суспендируют по 50 мл субстрата (полученного согласно примеру 2) в 4 мл 0,1 N ацетатного буфера, 40 рН 4,5, при 40 С и перемешивают 5 мин. Затем в одну пробирку прилиЗначения показателей по примеру Показатели Известный 2 Ярко-желтый Золотисто» желтый 2КХ Краситель Ярко-оранжевый ЖТ Дихлортриазиновая 370 Монохлоразиновая 410 Винилсульфоновая 490 12,6 6,9 0,9 Характеристика красителя Активная группа Максимум поглощения,нм Характеристика 0,1Х-ного раствора субстрата в 85Хной Н1РО Максимум поглощения, нм Оптическая плотность вают 0,1 мл раствора целловиридина ГЗх с концентрацией 60 мг/мл и продолжают перемешивание. В другую пробирку также приливают О, 1 мл указанного раствора фермента и содержимое быстро пропускают через фильтр (контроль). Через 20 мин реакционную смесь в первой пробирке пропускают через фильтр и определяют оптическую плотность фильтра при длине волны 375 нм против контрольной пробы. Оптическая плотность 0,74. Сравнительная. оценка субстратов, изготовленных согласно примерам 2 и 4 по известному способу, дана в таблице. Формула изобретения 1. Способ получения окрашенного субстрата для определения- целлюлаэной активности путем окрашивания целлюлозной подложки активным красителем, содержащим винилсульфоновую группу с последующим отделением несвязанного красителя промыванием, отличающийся тем, что, .с целью упрощения процесса, увеличения выхода и повьппения качества целевого продукта, в качестве целлюлозной подложки используют водонерастворимую оксиэтилцеллюлозу, а отделение несвязанного красителя осуществляют промыванием водой. 2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— Ф шийся тем, что окрашивание проводят при 25-90 С активным краситео лем, содержащим дихлортриазиновые или монохлортриазиновые группы с содержанием активного красителя в реакционной смеси 2-50Х от массы оксиэтилцеллюлозы. Продолжение таблицы 1601122 Показатели Значения показателей по примеру Известный Характеристика 0 17Х-ного гидролизата субстрата в ферментном растворе Максимум поглощения, нм Оптическая плотность Выход субстрата, Х Интервал линейной зависимости оптической плотности от глубины превращения субстрата 5,5 105 6,4 124 75-80. 0-24 „5 0-4,6 1-О, 1 Золотисто-желтая .окраска изменяется в красную. +Ф Интервал, достигаемый при 120 мин инкубацни. Составитель А.Семенов Техред М. Ходанич . Корректор C. Некмар Редактор Н.Яцола Заказ 3246 . Тир аж 488 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, эсква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101
