Способ получения 1,3,4-тиадиазол-2-цианамида или его фармацевтически приемлемых солей

 

Изобретение касается гетероциклических веществ и, в частности, получения 1,3,4-тиадиазол-2-цианамида или его фармацевтически приемлемых солей, обладающих антивирусной активностью. Цель изобретения - создание новых, более активных веществ указанного класса. Синтез ведут дебензилированием (3-фенилметил-1,3,4-тиадиазол-2(3H)-илиден)цианамида с помощью ALCL<SB POS="POST">3</SB> с последующим выделением целевого продукта или превращением его в нужную соль обработкой соответствующим органическим или неорганическим соединением. Новые вещества малотоксичны, активны к вирусам гриппа типа A и B, Гон-Конг, лишая I и II, кори, а также к вирусам, приводящим к синдрому приобретенного имунного дефицита. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1616519 (51)5 С 07 D 285/12

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К flATEHTY

S 1-ЫН-CN <х>

М вЂ” Ж

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4356010/23-04 (62) 4028736/30-13 (22) 30. 06. 88 (23) 15. 12.86 (31) 809669 (32) 16. 12.85 (33) US (46) 23.12.90. Бюл. К 4 7 (71) Эли Лилли энд Компани (US) (72) Брент Джеффри Ридер, Вейн

Альфред Спитзер, Чун-E Ернст By, Чарльз Джонсон Пэджет, мп., и Вилл ьям Вива н Бл энчард (US) (53) 547. 791.07 (088.8) (56) J. Indian Chem. Soc., 1983, IV, с. 674-678.

J. Med Chem У 1972э 15> В 10, с. 1082-1084.

Пате нт С ША Ф 3 7 72316, кл. С 07 D 91/62, 1973.

Изобретение касается способа получения 1,3,4-тиадиазол- 2-цианамида. формулы или его фармацевтически приемлемых солей, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Цель изобретения — получение нового производного 1,3,4-тиадиазола, 2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1,3,4 А

"0JI-2-ЦИАНАМИДА ИЛИ ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Изобретение касается гетероциклических веществ и, в частности, получения 1,3,4-тиадиаэол-2-цианамида или его фармацевтически приемлемых солей, обладающих антивирусной активностью. Цель изобретения - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут дебензилированием (3-4енилметил-1,3,4тиадиазол-2(ЗН)-илиден)цианамида с помощью А1С1> с последующим вццелением целевого продукта или превращением его в нужную соль обработкой

coîòýåòñòâóþùèì органическим или несрганическим соединением. Новые вещества малотоксичны, активны к вирусам гриппа типа А и В, Гон-Конг, лишая I и II, кори, а также к вирусам, приводящим к синдрому приобретенного иммунного дефицита . 3 табл .

1 имеющего преимущества перед известным аналогом подобного действия.

Пример 1. 1,3,4-Тиадиазол-2циа намид .

А. Бензилироваьие 2-амино-1,3,4тиадиа зола .

Смесь 101 r 2-амино-1,3,4-тиадиаэо (р ла, 650 мп н-пропанола и 140 мп бенэилбромида нагревают в колбе емкостью 2 л. Когда температура реак.— о ционной смеси достигнет 88 С, весь

2-амино-1,3,4-тиадиазол переходит в

15

45

55 раствор. При 98>С раствор начиняет кипеть с обратным холодильником и колбу извлекают из нагревательной рубашки, а затем помещают в водяную баню с тем, чтобы регулировать процесс дефлегмации. Дополнительную порцию в 250 мп и-пропанола добавляют для того, чтобы поддержать текучесть смесь и смесь перемешивают в течение

2 ч, нагревая до тех пор, пока необ— ходимо подпер>ю вать температуру 86 С.

Затем смесь охлаждают до 30 С. Продукт, 4-имино-3 — (фенилметил) — 1, 3,4— тиадиа зол бр омгидрат, собирают, пр омывают и-пропанолом и сушат ня воздухе. Выход 190 г (70%), т.пл, 200, 0200 .

В. Реакция с цианбромидом.

В перемешивяемую смесь 146 г бромгидрята 4-имино-3-фенилметпл1,3,4-тиадиазола, 1 л воды и 1 л этилацетата добавляют 44 мп 50%-ного раствора (проценты весовые) гидрата окиси натрия в воде для того, чтобы растворить тиадиазоловь>й исходный материал. Затем водный слой отделя— ют и сливают. В оставшийся раствор в этилацетате добавляют 800 мп воды, содержащей 84 r бикарбонатя натрия.

В этот раствор по каплям в гечение 25 мин добавляют раствор 56,3 цианбромида в 150 мл этилацетата.

Смесь перемешивают еще 30 мин. Зяте, водный слой отделяют и смешивают. Оставшийся этилацетатный раствор промывают 200 мп воды. Дпя тог о, чтобы ускорить разделение слоев, д>обаиляют насьш(енный солевой раствор, затем водный слой отделяют и сливают .

Этот ацетатный раствор концентрируioT до одной трети его первоначального объема и добавляют 100 мл толуола. Затем эту смесь концентрируют до примерно одной трети ее первоначального объема и добавляют еше

100 мл толуола . Такую процедуру концентрирования повторяют несколько раз, в результате чего получак>т искомый (3-фенилметил — 1, 3,4- гиадия зол-2 (ЗН) -илиден) циянямид в ниде осадка, который отделяют . ильтрацией, его промывают толуолом и сушат, выход

57,7 г (50,6%).

С . Деб ен знлир он,> ние .

Несть эквивалентов (7,4 г) тонко измельченного хлоридя алюминия добавляют в смесь 2,0 (З-фенилмети.!-1,3,4— тиядиа зол — 2(3H) -илиден) цианямида в

50 мп метиленхлорида. Смесь перемешивают в течение 2 ч и добавляют

50 мл ТГФ, Затем смесь сливают в

50 мл холодной воды, перемешивают

10 мин и подвергают фильтрации с т ем, чтобы удалить нерастворимые материалы. Затем в смесь добавляют примерно 5 г хлорида натрия, чтобы ускорить разделение лоев и слой

Т1Ф (тетрагидрофуряна) отделяют. В вопный слой добавляют дополнительно соли и осуществляют две зкстракции с использованием порций в 25 мп

ТIФ. Слой ТГФ соединяют, сушат при помощи с ульфата магния и концентрирун>т до получения твердого вещества.

В это твердое вещество добавляют порцик в 25 мп метиленхпорида, затем твердое вещество собирают, сушат, в результате чего получают 0,91 г 1, 3,4-тиядия зол-2-цианамида (выход

78%), которь>й, как установлено при помощи жидкостной хроматографии при высоком давлении, имеет частоту

96, /% {т.пл. 155 С, разл.) .

Как было установлено, целевые продукты, описанные вьш>е, обладают противовирусной активностью в с1яндартньгх и пытаниях, могут бьггь использовя ны для л е > ения или пр офиля ктики

>яболеняний, которые вызываются разнообразнь>ми вирусами и н настоящее нр емя широко распрос тря пены. К общим вирусам, против которых, как быпо установлено, тиадия золы являются активными, относятся все испьгганные штаммы А и В гриппа, включая та.,не штяммы гриппа, как А-3НН-Эрбор;

А-Гон-Конг; В-Великие Озера, В-Тайвань, В-Сингапур, А-Бря зилия, А-Техас, А-Фук»>ина, В-11эри-Лэнд и т.п.

h други>! вир усам, против которых можно использовать способ настоящего изобретения, относятся Пара-Грипп, Респираторные Синцитиальные Вирусы, различные штаммы лишая Т и II вирусы Г(. ПО и Уассиниа, кори, Hml ini

Forest а также те вирусы, которые приводят к синдрому приобретенного иммунного дефицита.

Тиадиа зол овые пр оти в овир ус нь>е агенты, являющиеся предметом предлагаемого изобретения, проявляют свою як>ивность против упомянутых выше вирусов как в лабораторных условиях, так и при испытании на л >, » от нем :р гя >(изме .

Ос(."бД енно детально исспс, »яня их акКоличество контрольных животных, погибших в день Х вЂ” 1

Деиь Х

Общее количество контрольных животных

+ ИВД,„, м

5 16 тивность в животном организме против гриппа А-Энн-Зрбор °

Исследование по уменьшению пятен обеспечивает количественную оценку ингибиторов размножения вирусов в культуре клеток ткани в лабораторной системе.

В этом испьггании восприимчивые

МОСК-клетки выращивали в ?5 см колбах Фалькон при температуре 370С в среде 199 вместе с 5Х инактивированной сыворотки плода теленка (СПТ), пенициллином (300 ед./мп) и стрептомицином (300 мг/мп) . После образова— ния слившихся монослоев среду для выращивания извлекали и в каждую колбу добавляли 0,3 мп разбавленного соответствующим образом вируса. После адсорбции в течение 1 ч при комнатной температуре на поверхность с зараженными клетками наносили равные части 1Х Агара и 2Х среда 199, 2,5Х

СПТ, пенициллин и стрептомицин, варьируя при этом концентрации испьггываемого соединения, содержащегося в агаровом накрывающем слое. Зти соединения растворяли в диметил сульфоокиси (ДМСО) в концентрации 10000 мг/мз

У а затем порцию разбавляли до необходимой концентрации при помощи смеси агаровой среды. Колбы инкубировали до тех пор, пока контрольные колбы не указывали на оптимальный размер пятна (2-10 мм). Раствор, содержащий

10Х формалина и 2Х ацетата натрия, добавляли в каждую колбу с тем, чтобы инактивировать вирус и зафиксировать лист с клетками на пластиковой поверхности. Пятна считали после окрашивания окружающих клетки областей кристаллическим фиолетовым красителем. Результаты, полученные для колб—

Например, если первым днем, в который погибли контрольные животные, является четвертый день, и 4 из 18 контрольных животных погибли на пятый день, то ИВ н = О, а

Г

ИВ = (5-1) --<+0=0,66 °

181

16519 6 дублетов для каждой концентрации, усредняли и сравнивали с контрольными колбами. Ингибирование образования пластинок на 50X (I> ) оценивали при

5о помощи нанесения на график вс ех результатов с ингибированием в области

10-902. Результаты, полученные для трех штаммов гриппа, собраны в табл.1

В серии испьгганий на живом организме группы из восемнадцати мьппей вида

СД-1 заражали фиксированной заранее дозой штамма гриппа A-Энн-Зрбор. 3атем вводили заранее фиксированную дозу тиадиазола, а одной иэ групп вводили только растворитель и она играла в дальнейшем роль контрольной

rpуппы, Испытание продолжали 10 дней. Фик20 сировали количество животных, погибших в каждой группе каждый день. Животные, которые остались живыми на конец 10-го дня, рассматривались как выжившие. Для анализа полученных данных затем использовали метод индекса выживания", а именно анализ выполl няли следующим образом.

На основании данных, полученных для контрольной группы, величину индекса выживаниЯ (ИВАе„ьх ) ставили в соответствие каждому дню (Х), начиная с того дня, в который была зафиксирована гибель первого животного в контрольной группе (в общем случае этот день Х=4), н такие вычис35 ления проделывали до 10-rn дня. Величину индекса выживания для того дня, в которой была зафиксирована первая гибель животного, определяли

40 равной нулю. Аналогичные значения для остальных дней до 10-го дня рассчитывали с использованием следующей формулы:

Величину индекса выживания для вижн вших животных (ИВ4 пе ж ) та к

4пе. вы к.жие же рассчитывали на основании данных для контрольных животных, используя формулу

1616519

Количество контрольных животных, погибших на 10-й день

ИВ6ЬИ. жи

Общее количество контрольных

ИВден ь 10 животных

ИВ для обраб.жив. к 100.

ИВ для выжив.жив. — ИВ для контрол.жив.

P, / ОА

20 (или меньше) =- 1 (крайнее значение)

20-40 = 2 (слабая а ктивность)

40-60 = 3 (средняя активность)

60-80 = 4 (хорошая активность)

80-100 = 5 (очень сильная активность) Полученную в результате совокупность рассчитанных значений индекса затем испол ьзовалп для установления соответствия между усреднеHHblMH значениями выживания и как контрольной группой, так и каждой группой испыты ваемых животных, с этой целью использовали следующую процедуру. Усредненное значение выживания для контрольной группы ИВ„ „ „ рассчитывали при помощи умножения каждого значения

ИВ Дэ„ь Х HR количество контрольных животных, погибших в соответствующий день Х, при помощи умножения знаИВВый А66на коли 1естно выживших животных, последующего суммирования этих произведений и деления полученной суммы на общее количество нонтИспользуя эту формулу, если среднее значение выживания для обработанных животных только равно среднему значению выживания, для контрольных животных, получают, что P = ОЕ. Если же среднее значение выживания для

Данные сравнения активности in

vivo 2-амино-1, 3,4-тиадиа зола, 1,3,4тиадиаэол-2-цца и натриевой соли 1,3,4-тиадиаэол-2-цианамида по отношению к штаммам вируса грип-1та А-Энн-Эрбор и В-Гон-Конг. Данные in viva, полученные и проанализированные с использованием описанной выше методики, приводятся в табл. 2 и 3.

Табл.2 описывает активность in

v1vo трех вьшьеукаэанных соединений относительно гриппа A--Энн-Эрбор.

В табл.2 описано испытываемое соеpoJIbIIbIx животных. Усредненное значение выживания для обработанной группы ИВ рассчитывали при помоь Раь. КИЬ. щи умножения каждого значения HB4BIIbl на количество обработг нньж животных, погибших в соответствующий день Х, при по ощи умножения ИВ SbIA „B на количество выживших обработЯ нных жи вот ных, посл едующегo суммирования этих произведений и деления полученной суммы на общее количество ,бработанньIx животных, 20

В последующем сравнение с контрольной группой осуществляли при помощи расчета по следующей формуле, в которой P равно максимуму в процентах.

ИВ для контрол.жив. обработанных животных равно значению индекса выживания для выживших животных, тогд-". значение P = 1007..

Этот максимум в процентах затем пер еводят в относительный индекс активности ОА следующим образом:

I!

45 динение метод, используемый для введения проверяемого соединения, вводимая доза и полученные результаты в виде P u RA (индекс относительной активности, 5 — наиболее активное, 1 — наименее активное, причем P u

RA соответственно определены) . Табл.3 описывает активность in vivo двух из укаэанных вьш е соединений по отношению к гриппу Гон-Конг. Информация в колонках табл.3 аналогична ин55 формации табл.2, Гоединения проявляют низкую токсичность по отношению к живым органи з мам.

1О

1616519

Таблица 1

Активность Т ц, мкг/кп, в лабораторных условиях против вирусов гриппа

С оединение

В-Великие Озера

А-Энн-Зр бор

По при- А-И меру 43

Таблица 2

Лоза, мг сое- Р, 7. ди н е ния /кг

Соединение введения опытного животного

24,0 2

160

2-Амино-1,3,4тиадиазол

20,0

95,0

42,2

36,5

18,3

Натри евая соль 1,3,4тиадиазол2-цианамида

100,0 5

10С,0 5

96,0 5

250

150

100

94,1, 5

100,0 5

10С,С 5

72,0 5

67,0 4

9,0 1

12,5

6,3

1,3,4-Тиадиазол-2цианамид

Фор мул а изобретения

Способ получения 1,3,4-тиадиазол2-цианамида формулы

I или его фармацевтически, приемлемых солей, отличающийся

Оральный

Внутрибр юши нный

Орал ьный

Оральный

Оральный

Оральный

Внутрибрюшинный

Внутрибрюшинный

Внутрибрюшинный

Внутрибрюшинный

Пищевой

Пищевой

Пищевой

Пищевой

Пищевой тем, что дебензилируют (3-фенилметил-1, 3,4-тиадиа зол-2 (ЗН) -илиден) цианамид с использованием хлористо5 го алюминия в качестве дебенэилирующего агента с последующим необязательным переводом полученного целевого продукта в фармацевтически приемлемые соли взаимодействием с сооФветствующим органическим или неорганическим основанием.

1616519

Таблица 3

Доза, мг со- Р, X еди не ни я! кг опытного

Способ введения

Соединение животного

160

21,5

98,0

96,0

2-Амино1,3,4тиадиаэол

Натриевая соль

1,3,6,4тиадиазол2-циа намида

Пищевой

Оральный

Орал ьный

100,0

Оральный

Орапьный

89,7

Э г

Составитель И. Федосеева

Редактор Е. Папп Техред Л.Олийнык Корректор Л. Патай

Заказ 3998 Тираж 318 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101