Способ получения тест-системы для определения группы крови

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гематологической практике. Цель изобретения - повышение специфической активности тест-системы. Предлагаемая тест-система включает в себя моноклональные антитела, полученные из асцитной жидкости мыши, обработанные бычьим сывороточным альбумином в концентрации 1 - 4 мас.% и сахарозой 0,4 - 5 мас.%. Смесь наносят на подложку из синтетического материала с бумифицированным покрытием, высушивают и герметично упаковывают. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гематологической практике. Цель изобретения - повышение специфической активности тест-системы. Моноклональные антитела, полученные из асцитной жидкости мыши, обрабатывают бычьим сывороточным альбумином (БСА) и сахарозой, наносят на подложку из синтетического материала с бумифицирующим покрытием и высушивают. Основными требованиями к подбору материала для подложки являются нейтральность по отношению к моноклональным антигенам; отсутствие сорбции антител и обеспечение хорошего прилипания (адгезивность). Проверка подложки осуществлялась путем высушивания на ней 10 мкл стабилизированных моноклональных антител с последующим нанесением 50 мкл 0,15 М раствора хлорида натрия, добавлением 10 мкл осадка эритроцитов соответствующей группы крови, размешиванием и наблюдением за результатом реакции. Результаты испытаний подложки из различных материалов приведены в табл. 1. Из трех образцов синтетического материала только один на основе полиэтилентерефталата с бумифицирующим покрытием обеспечивал адгезию реагентов. Поэтому для получения тест-системы был выбран этот материал на отсутствие сорбции и обеспечение адгезии. Другим требованием к тест-системе был поиск оптимального соотношения компонентов стабилизатора, обеспечивающего максимальную адгезию. В качестве стабилизирующих компонентов были использованы известные стабилизаторы альбумин и сахароза в определенных массовых процентах в растворе хлорида натрия. Результаты испытания тест-системы приведены в табл. 2 при различном соотношении компонентов сахарозо-альбуминовой смеси. В таблицу включены предельные, запредельные, а также контрольные испытания (последние испытания в отсутствии сахарозы). При проведении данной серии испытаний учитывали как стабилизирующие свойства смеси (в отношении специфичности целевого продукта и авидности реакции), так и новые для данной смеси клеющие свойства (по проценту прилипания концентратов антител к подложке из предлагаемого материала). Авидность реакции указана в таблице по 4-крестовой системе: + реакция имеет пылевидный характер; ++ наблюдается много мелких агглютинатов; +++ наблюдается несколько крупных агглютинатов; ++++ наблюдается один крупный агглютинат. В табл. 2 приведены данные по авидности до хранения тест-системы, а также после хранения в течение 1 мес при 4 и 37^оС. Из таблицы видно, что только в диапазоне концентраций ингредиентов для альбумина, равном 1-4 мас. % и сахарозы 0,4-5 мас.%, достигается хорошее прилипание антител к подложке, обеспечиваются специфичность и высокая авидность реакции. Способ осуществляется следующим образом. Моноклональные антитела к группоспецифическим антителам А и В эритроцитов человека (в титре 1: 320) с добавлением стабилизаторов в заявляемых концентрациях наносят в объеме 10 мкл каждого на соответствующие поля на подложке, высушивают при комнатной температуре или при 37^оС в течение 10-15 мин, карточки герметично упаковывают в полиэтилен-фольгу. Карточки хранят при 2-8^оС до момента использования. В целом подложка, готовая к определению групп крови, названа авторами "Политест". При определении групп крови карточку извлекают из пакета, моноклональные тела растворяют в 50 мкл 0,15 М раствора хлорида натрия. После этого на проекции кружков наносят 10 мкл крови или осадка эритроцитов, перемешивают, осторожно покачивая карточку в течение 30-60 с, и учитывают результаты реакции агглютинации. После высыхания проб карточка заклеивается прозрачной адгезивной пленкой и подшивается к истории болезни. П р и м е р 1. Получение тест-системы. Моноклональные антитела обрабатывают 1, мас.% БСА и 0,4 мас.% сахарозы, после чего наносят на подложку и высушивают. При определении группы крови моноклональные антитела растворяют 50 мкл 0,15 М раствором хлорида натрия, добавляют 10 мкл (АВ IV) крови, смешивают, карточку осторожно покачивают. Через 34 с наступила реакция агглютинации. П р и м е р 2. Получение тест-системы. Моноклональные антитела обрабатывают 4 мас.% БСА и 5 мас.% сахарозы, после чего наносят на подложку из синтетического материала с бумифицирующим покрытием и высушивают. При определении группы крови моноклональные антитела растворяют 50 мкл 0,15 М раствором хлорида натрия, добавляют 10 мкл (АВ IV) крови, смешивают, карточку осторожно покачивают. Реакция агглютинации наступила через 40 с. П р и м е р 3. Подтверждение идентичности группы крови донора и реципиента. Высушенные моноклональные антитела на подложке растворяют 50 мкл 0,15 М раствором хлорида натрия и к ним добавляют 10 мкл 0(I) группы крови донора и реципиента. Раствор моноклональных антител тщательно перемешивают при постоянном осторожном покачивании карточки. Наблюдение велось в течение 60 с, но неспецифической реакции агглютинации не наблюдалось как у донора, так и у реципиента, что подтверждает идентичность группы донора и реципиента. Предлагаемый способ способствует более эффективному и рациональному использованию реагента (моноклональных антител). Разработка тест-системы имеет большой экономический эффект за счет меньшего расхода моноклональных антител, так как не всегда используются вскрытые флаконы (ампулы) с моноклональными реагентами для типирования крови. Во многих случаях определение проводится у единичных больных, а реагенты выпускаются объемом 5, реже 2 мл, что хватает для определения соответствующего антигена эритроцитов у 50 или 20 пациентов соответственно. Тест-система дает возможность иметь наглядный документ, подтверждающий факт осуществления определения группы крови у донора и/или реципиента, тем самым повышается ответственность медицинского персонала за проведенный анализ. Кроме того, предлагаемая тест-система рассчитана только на одно определение, исключает перекрестное загрязнение реагентов. Использование этой тест-системы удобно при транспортировке, пригодно для работы вне лабораторных условий.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ путем обработки группоспецифических антител стабилизирующим раствором с последующим нанесением на подложку с покрытием, высушиванием и герметизацией, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности тест-системы, в качестве группоспецифических антител используют анти-А и анти-В моноклональные антитела, в качестве стабилизирующего раствора используют смесь 1 - 4 мас. % бычьего сывороточного альбумина и 0,4 - 5 мас.% сахарозы, а в качестве подложки ипользуют синтетический материал с бумифицирующим покрытием.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 27.03.1996

Номер и год публикации бюллетеня: 6-2002

Извещение опубликовано: 27.02.2002        

---