Способ получения панкреатина из поджелудочной железы

 

Изобретение относится к медицине , в частности к способу получения лекарственных средств. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта с более высокой активностью. Для этого замороженные свиные поджелудочные железы размельчают, пропуская через мясорубку, и проводят ауто/ -W 2 лиз при температуре (-2)-(+30)°С и рН 6,5-8,5. Параллельно через каждые 15 мин анализируют пробу на осаждение в 55-65%-ном водном изопропилозом спирте. При наличии скорости осаждения ауюлиза 3-10 ммв течение 1-3 мин прекращают аутолиз путем добавления изопропилового спирта до конечной концентрации 30-35%, затем проводят фильтрование через сито, В полученный раствор добавляют изопропиловый спирт в конечной концентрации 55-65% при 20-24°Со Полученный осадок промывают нзопропиловым спир том концентрацией 75-95%. Суспензию фильтруют на нуч-фильтре диаметром 40 см и отсасывают для просушивания в вакууме при 55°С и давлении 5 мбар„ Способ позволяет повысить выход целевого продукта с более высокой активностью . 4 табл. S

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (Д1) А 61 К 35/39

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 3682185/14 (22) 29. 12.83 (31) Р 3248587.5; P 3248588.3 (32) 30.12.82 (33) DE (46) 23.04.91. Бвп. Р 15 (7 1) Нордмарк-Верке ГмбХ (дЕ) (72) Ханс Иультце (DE) (53) 615.45(088.8) (56) Патент С1)А Р 3223594, кл. 195-68, 1965. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПАНКРЕАТИНА ИЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОИ ЖЕЛЕЗЫ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к способу получения лекарственных средств. Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта с более высокой активностью.

Для этого замороженные свиные поджелудочные железы размельчают, пропуская через мясорубку, и проводят аутоизобретение относится к медицине, в частности к способам получения лекарственных средств.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта с более высокой активностью.

Пример 1. 100 кг замороженных при низкой температуре свиных поджелудочных желез, пропупенных через волк-машину или через мясорубку, перемешивают в 250-литровом реак.торе с раствором 100 r глюконата кальция в 20 л воды совместно с 200 г силиконового препарата, препятствующего пенообразованию. В зависимости от содержания свободного трипсина

ÄÄSUÄÄ 1644712

2 лиэ при температуре (-2)-(+30)оС и рН 6>5-8,5. Параллельно через каждые 15 мин анализируют пробу на осаждение в 55-65Е-ном водном изопропиловом спирте. При наличии скорости осаждения аутолпза 3-10 ммв течение

1-3 мин прекращают аутолиз путем добавления иэопропилового спирта до конечной концентрации 30-352, затем проводят фильтрование через сито, В полученный раствор добавляют изопропиловый спирт в конечной концентрации 55-657. при 20-24 С. Полученный осадок промывают изопропиловым спиртом концентрацией 75-95Х. Суспензию фильтруют на нуч-фильтре диаметром

40 см и отсасывают для просушивания в вакууме при 55 С и давлении 5 мбар.

Способ позволяет повысить выход це.левого продукта с более высокой ак" тивностью. 4 табл. в железах добавляют в качестве сред- @ ства, способствующего началу процес- Ф са, до 1 кг готового панкреатина, 3 растворенного в 5 л воды. Зто количе- @ ство панкреатина устанавливают по- ФЯ средством "37 пробы на гидролиз".

С этой целью отбирают из загруженной партии 120 г исходного материала.

После добавления 15 л 847.-ного изопропилового спирта замешивают ра- В® створ 1,3 кг бикарбоната натрия (A в 20 л воды. Оставляют стоять на ночь, причем температура возрастает пример,но от 2 до 12 С, на следующее утро подогревают до 20 С и продолжают перео мешивание при этой температуре.

1644712

Момент окончания аутолиэа распознают пробой на осаждение. С этой целью во время последнего периода аутолиза сначала каждые полчаса, затем через каждые 15 мин отбирают 10 г суспензия, перемешивают 1 мин с 5,4 мл 84Х-ного изопропилового спирта с помощью стеклянной палочки, образовавшийся раствор отделяют от волокон, приставших к стеклянной палочке и замешивают в

20 мл содержащегося в стакане на

50 мл, снабженном магнитной мешалкой, 84Х-ного водного раствора изопропило вого спирта. Через минуту останавли вают мешалку и оставляют для осажде ния примерно 3 мин.

Если проба положительна, аутолиз (наличие более или менее прозрачного слоя высотой 3 мм через 1 мин или 20

10 мм через 3 мин) заканчивают.

В качестве примера воспроизводится. характерная серия испытаний на осажде" ние, которые применяли, как только температура автолизата достигала 25

200С.

Данные испытания на осаждение приведены в табл. 1.

Из этого примера видно, что наиболее благоприятный момент времени 3> для окончания аутолиза наступает через 3 ч. Для того, чтобы получить возможность достижения сравнимых соотношений при применении неизвестных (иапример, сохранявшихся более корот- 3 кое или более продолжительное время) препаратов свиных поджелудочных желез, проводится "37 проба на гидролиз". Из кащицеобразной массы желез, смешанных с глюконатом кальция, 10 отбирают 120 г, смешивают с 1,5 r бикарбоната натрия в 25 мл воды и перемешивают 30 мин при 37 С. С пробой этого ускоренного аутолизата проводят испытание на осаждение. К основной массе загруженного материала добавляют свободный трипсин (в форме панкреатина) в следующих количествах: менее чем при 2 мм/3 мин — 2 млн. Е, при значении до 12 мм/1 мин — 1 мчн. Е а при еще большей скорости осаждения свободный трипсин не добавляют (1 млн. единиц свободного трипсина содержи ся, например, в 250 r поджелудочной железы с 4000 единицами в i r). Таким э5 путем возможно стандартизировать для практических производственных условий сырьевой исходный материал различного происхождения .

93,6

После определения наиболее благоприятного момента времени аутолиз загруженной партии заканчивают посредством подачи насосом 72,5 л 84Х-ного (регенерированного) изопропилового спирта. Перемешивают 1/2 ч, причем образуется прозрачный раствор, содержащий нерастворимые волокна, которые отделяют отсеиванием. Для этого содержимое реактора спускают в открытьгй котел на 50 л с заложенным ситом, имеющим ячейки около 5 мм. 1(отел снабжен якорной мешалкой. Сточный патрубок котла, снабженного ситом, соединяют посредством насоса с 500-литро" вой емкостью из полипропилена. В эту емкость загружают 318 л 84Х-ного изопропилового спирта, туда же теперь добавляют примедленном перемешивании спускаемый раствор, пропущенный через сито. Волокна, оставшиеся в котле иа сите, перемешивают еще 10 мин, причем волокна становятся относительно сухими. Вес волокон составляет 78 кг.

В 500-литровый резервуар помещают панкреатин в виде грубого осадка в течение 1 ч на объем 80 л (при 20 С; при 24 С в течение 1/2 ч. Отстоявшуюся жидкость спускают сифоном и направляют для регенерации на перегонку.

Массу, оставшуюся на днище, перемешивают с 63 л регенерированного 84Х-ного изопропилового спирта и оставляют еще на ночь для дополнительного осаждения. На следующий день этот процесс повторяют, смешивают полученный таким путем осадок на днище примерно с 45 л

84%-ного изопропилового спирта, т.е. с настолько большим количеством, чем необходимо для приготовления суспензии панкреатина в 84Х-ном изопропиловом спирте. Эту суспензию фильтруют на нуч"фильтре диаметром 40 см и отсасывают до хорошего просушивания.

Плотную массу, отжатую на фильтре, быстро измельчают на резательной машине и распределяют на металлическом листе. Высушивают всю ночь при температуре обогрева до 55 С при вакууме

О приблизительно 5 мбар.

Выход панкреатина, кг 11,6

Активность амилазы, FiP F/ìã

Активность липазы, FiP =Е/мг 90,3

Активность протеазы, FiP=E/ìã:

1644712

4,2

4,1

28,3

28,3

98,7

0,4

0,65

0,76

20 активированной энтерокинаэой 5,6 без активирования 5 6

Активность трипсина, F .Р=Е/мг:

i активированного энтерокиназой без активирования

Активность химотрипсина, 10

FiP=E/мг: . активированного энтерокиназой беэ активирования

Содержание сухого вещества, Х

Содержание жира, Х

Плотность насыпная, г/мл

Плотность, г/мл

Число микроорганизмов, на 1 r 200

Нежелательные микроорганизмы по

Фармакописи СНА 17-ro издания (USP

ХУП) отсутствуют.

Пример ы 2 - 4. Поступают 25 аналогично примеру 1, изменяя условия проведения способа (рН, содержание изопропанала, температуру при аутолизе или содержание изопропанола при прерывании или температуру и содержа- 30 ние изонропанола при осаждении/промывании). Разницы в выходе по панкреатину не наблюдается, если испытание на осаждение варьировать в каждом случае в пределахдиапазона от 3 до 10 мм/мин. Эти условия были испытаны для каждого примера в отдельности.

Результаты испытаний приведены в

:табл. 2.

Пример 5. Поступают аналогично примеру 1, но без добавки изопропанола. Конца аутолкза достигают через 2,5 ч ° Активность амилазы 83Х при нагрузочной потере 5Х и активность липазы 80Х при нагрузочкой потере 15Х.

Пример 6. Поступают аналогично примеру 1, добавляя 5 л пропанола, Конца аутолиза при этом достигают через 2,75 ч. Активность амилаэы 88Х при нагрузочной потере около 5Х; а липаэы 88Х при нагрузочкой потере 1ОХ.

Пример 7. Поступают аналогично примеру 1, но добавляют 10 л изопропанола. Конца аутолиэа достигают через 3 ч. Активность амилазы 93Х (нагрузочная потеря 5Х) и липазы 88Х (нагрузочная потеря ЯХ).

П р н м е р 8. Если поступить аналогично примеру 1 и повысить температуру до 25 С, а потом прервать реако цию, то достигнутые результаты будут те же, что и при температуре 15 С.

Пример и 9. — 12. Аутолиз и осаждение смеси энэимов иэ водного аутолиэата осуществляют, как описано в примере 1. Чтобы определить влияние концентрации изопропилового спирта на процесс промывания, к пробам суспензии панкреатина добавляют изопропиловый спирт разной концентрации. Применяют по 1 л осадка, полученного в результате сливания сиФоном отстоявшегося верхнего слоя жидкости., 1 л осадка соответствует количеству приблизительно 200 r сухого панкреатина.

К каждой пробе добавляют по 1 л изопропилового спирта. Разные концент" рации получают в результате разбавления абсолютного иэопронилового спирта. Плотный Аильтровальный осадок, полученный, как описано в примере 1 в результате двухкратного промывания и отсасывания на нутче, подвергают высушиванию, как описано в примере после чего определяют его активность и насыпной вес. При применении только

65Х-ного изопропилового спирта наблюдается небольшое уменьшение активности. Несмотря на это качество полученного в результате продукта выше, чем качество известных продуктов. Насып" ной вес продукта уменьшается с увеличением концентрации изопропилового спирта. Результаты приведены в табл. 3.

Данные сравнения стабильности ами" лазы и липазы у панкреатина приготовленного по известному и предлагаемому способам, представлены в табл. 4.

Табл. 4 показывает, что у панкреатина, полученного известными .способами, потеря при нагрузке сильно возрастает по мере увеличения активности.

Что касается панкреатина, изготовленного-по предложенному способу, то несмотря на существенно высокую знзим . ную активность, он отличается при нагрузке наименьшей потерей.

Формула и s обр ет ения

Способ получения панкреатина из поджелудочной железы путем проведения аутолиза при комнатной температуре, 1644712, перемешивания с органическим раство рителемм, удаления осадка фильтрацней, промывания его органическим растворителем и высушивания, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышеизопропиловым спиртом, а высушнвание проводят в среде азота при давлении

5 мбар.

Таблица 1 ния выхода целевого продукта.с более высокой активностью, аутолиз проводят в реакторе при рН 6,5-8,5 и температуре {-2)-{+30) С, при этом одновременно анализируют пробу, взятую из .реактора, на осаждение в,55-65Х-ном водном изопропиловом спирте и, как только в пробе достигается скорость

Продолжительность . аутолиsa при 20 С, Значение аутолиза мм/0,5 мин мм/

/3 мин мм/1 мин

1,00 осалдения выпавшего в осадок аутоли- 15 2 00 эата 3-10 мм в течение 1-3 мин, пре- 2,50 кращают аутолиз в реакторе путем до- 2,75 баапения изопропилового спирта до ко- 3,00 нечной концентрации 30-35Х, затем по- 3 ° 25 сле фильтрации в полученный раствор gp 3,50 вновь добавляют изопропиловый спирт 3,75 до концентрации 55-65Х при 20-24 С, 4,00 полученный осадок промывают 75-95Х-ным

Та бли ца 2

Пример

Промывание +

+ сушка, Х c587oH

Аутолиз рН

Выход (амилаэа) пыта Осажд ение е, /мин

Х C H>oH

30 65 88

30 65 85

10 55 91

10 55 89

15 60 94

15 60 91

Пример 9 10 11 12

Промывная жидкость (Х иэопропило, вого спирта) 65

Активность, РУРЕ/г3

Аьялаза

Липаза

Протеаэа

93,6

90,4

93,5

90,5

84,3

72,3

93,6

90,3

Иасыпной вес, г/100 мп 5,3

5,6

5,6

6,5

6,5

7 0

7ФО

8,5

8,5

0

30 3 .. 30 10

-2 3

-2 10

15 3

15 10

32

32

0

0

1

5

14

0

1

6

18

0

4

18

1644712

Та блица 4

Способ

Амила за

Липаза

Исходнаяя акИсход- Потеря ная ак- при нативность, грузке, Х

FiP-.Å/ìã тивность, FiP-Е/мг

Известный

Пр едлагаеMblH

93,6

90,3

Составитель Л.Конюхова

Техред М.Дндык Корректор 0.1Ь пле

Редактор 0.19рковецкая

Заказ 1249 Тираж 460 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,103

43,1

57,2

51 0

41

40,7

37,0

40,3

Потеря при на" грузке, Х

31

Способ получения панкреатина из поджелудочной железы Способ получения панкреатина из поджелудочной железы Способ получения панкреатина из поджелудочной железы Способ получения панкреатина из поджелудочной железы Способ получения панкреатина из поджелудочной железы 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии
Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии, и касается лечения послеродовых эндометритов
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения материала, содержащего бета-клетки поджелудочной железы новорожденных кроликов, и к трансплантологическим методам лечения сахарного диабета, преимущественно инсулинозависимого, путем трансплантации бета-клеток, полученных с использованием феномена их миграции

Изобретение относится к области медицины, и в частности касается лечения хронических заболеваний различной этиологии

Изобретение относится к врачебной деятельности и может быть использовано для лечения больных сахарным диабетом

Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения острого деструктивного панкреатита
Изобретение относится к области медицины, а именно к эндокринологии,, и может быть использовано в лечении сахарного диабета

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении сахарного диабета 1 типа

Изобретение относится к медицине, точнее к фармацевтической композиции для лечения заболеваний поджелудочной железы и расстройств пищеварения, связанных с заболеваниями печени

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для лечения больных демиелинизирующими заболеваниями, в частности рассеянным склерозом
Наверх