Способ получения l-глутамина
Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения L-глутамина ферментативным гидролизом его а -N-ацетилпроизводного Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта за счет предотвращения деструкции L-глу тамина в процессе гидролиза. Раствор a-(N- ацетил)-L-глутамина концентрацией 0,05-0,4 моль пропускают через колонку с иммобилизованной аминоацилазой Процесс ведут в проточном режиме при 37°С, рН 6,9-7,1 и продолжительности контакта 0,1-0,5 ч Используют аминоацилазу из свиных почек или из Streptoverticillium ollvoreticull, иммобилизованную на силохроме n-бензохиноном или включением в полиакриламидный гель Выход L-глутамина 85-45%. 2 з п ф-лы, 2 табл.
COK)3 СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (sI)5 С 12 Р 13/14
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ KOMVITFT
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ о (Я
С)
С)
С) (21) 4481368/13 (22) 12.09.88 (46) 23.05.91, Бюл. N 19 (71) Научно-производственное обьединение
"Биолар" (72) И,К.Калниня, Е.М.Белевич и Ю.П.Вейнберг (53) 577. 1 12.384.4(088. 8) (56) Maschler l., l Ichtenstein N. Synthesis of ! -dlutamlni í.i,а its а- N — acetyl derivative. . BBA, 1962, 57, р. 252 — 255. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ С-ГЛУТАМИНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения L-глутамина ферментативным гидролизом его
Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения L-глутамина ферментативным гидролизом его и -N-а цетил произв одного.
Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта за счет предотвращения деструкции L-глутамина в процессе гидролиза.
Способ получения L-глутамина осуществляют следующим образом.
Раствор а -(М-ацетил)-1 -глутамина концентрацией 0,05 — 0,4 моль пропускают через колонку с иммббилизованной аминоацилазой. Процесс ведут в проточном режиме при
37 С, рН 6,9-7,1 и-продолжительности кон-, такта а -(N-ацетил)- -глутамина с ферментом 0,1-0,5 ч. Выход (=глутамина 85 — 95 g,.
Увеличение продолжительности контакта (более 0,5 ч) приводит к снижению выхода
L-глутамина эа счет его деструкции. Уменьшение продолжительности контакта (менее. Ж, 1650700 Al а -N-ацетилпроизводного. Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта за счет предотвращения деструкции L-глутамина в процессе гидролиза.. Раствор a-(Nацетил)-L-глутамина концентрацией
0,05-0,4 моль пропускают через колонку с иммобилизованной аминоацилазой. Процесс ведут в проточном режиме при 37 С, рН 6,9-7,1 и продолжительности контакта
0,1 — 0,5 ч. Используют аминоацилазу из свиных почек или из Streptoverticiilium
ollvoreticull, иммобилизованную на силохроме и-бензохиноном или включением в полиакриламидный гель, Выход 1 -глутамина
85-457. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.
0.,1 ч) также приводит к снижению выхода целевого продукта (из-за неполноты гидролиза).
Влияние продолжительности контакта
a -(N-ацетил)-(-глутамина с ферментом и концентрации его в исходном растворе на выход L-глутамина приведены в табл.1.
Как следует из табл.1, увеличение концентрации rt -(N-ацетил)-L-глутамина в исходном растворе (более 0,4 моль) нецелесообразно в связи с выпадением осадка
L-глутамина в колонке с иммобилизованным ферментом и связанными с этим потерями целевого продукта, Для осуществления способа пригодна любая аминоацилаза. Высокий выход 1глутамина получают при использовании аминоацилазы из свиных почек или иэ
Streptoverticillium olivoreticuli. иммобилиэованной на силохроме и-бенэохиноном или включением в полиакриламидный гель.
1650700
Формула изобретения таблица 1
Оп
Таблице 2
Скорость пропускания субстрата. илl ч
Выход. 7ь
Стабильность
Сводный обьем колонки,мл
Время контакта, ч
Источник фермента
Способ иммобипизв- Активции ность им мобилизованного фермента
90.3
Включение в полиакриламидный гель
Иммобилизование на силохроме и-бензохинонол
Включение в попиакриламидный гель
0.5
7,0
Ац плаза из свиньи почек актив0,5
91.9
5,0
10 ственти
7,0 активствен91,3
0.5
Ацилвза из
StreptovertlcfiIIum
aIlvorettt;ulI
92.7
0.5
5,0
Иммобилизование на 20 силохроме и-бензохиноном ти
* 3a единицу активности принято количество микрамолей L-глутамина, образовавшегося в 1 ч. с 1 г препарата иммобилизованнай аминоацилазы при 37 C и рН 6Я-7,2, Составитель Г.Голева
Техред M,Ìîðãåíòàë
Корректор Т,Малец -1
Редактор Н,Гунько
Заказ 1584 Тираж 362 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб;, 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Результаты влияния вида иммобилизованной аминоацилазы на выход 1-глутаминэ приведены в табл.2.
П р и и е р. В реакгор емкостью 100 л загружают сг;-(N-ацетил)-L-тлутамин, 80 л дистиллированной воды и добавлением водного аммиака доводят рН раствора до
6,9-7,1. Дистиллированнои водой объем раствора доводят до 100 л.
В термостатируемую колонку емкостью
2,5 л загружают 1 кг (2,5 л) влажного препарата (содержание сухого вещества 45 Я,) иммобилизованной аминоацгллазы, С помощью дозирующего насоса через термостатированную при 37 С колонку пропускают приготовленный раствор а -(N-аценил) 1 глу3агиина. Количec l во глутамина В зл юате orlðeäeëëeò формол ьн ы м титрованием эл1оата. Злюат упаривают в вакуум-выпарном аппараге, добавляют пятикратный объем зтилового спирта. Образовавшийся осадок —; лутамина отфильтровывают и сушат.
1. Способ получения L-глутамина, включающий гидролиз а -(N-ацетил)-1-глутамина
5 действием аминоацилазы при 37 С и рН
6,9 — 7,1 и выделение целевого продукта, о тл и ч э ю шийся тем, что, с целью повышения выхода, используют иммобилизованную аминоацилазу и процесс гидролиза
10 ведут в проточном режиме при концентрации а (N-ацетил)-L-глутамина 0,05-0,4 моль и продолжительности его контакта с иммобилизованной аминоацилазой 0,1-0,5 ч.
2. Способ по п.1, отличающийся
15 тем, что используют аминоацилазу из
Streptoverticllliurf7 olivoreticuli, иммобилизованную на силохроме и-бензохиноном или включением в полиакриламидный гель.
3. Способпо п1,отл ичающийся
20 тем, что используют аминоацилазу из свиных почек, иммобилизованную на Силохроме и-бензохиноном или включением в полиакриламидный гель,
