Способ определения эффективности включений изотопа иод-125 при радиоиодировании белков и нуклеотидов

 

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиоиодировании белков и нуклеотидов изотопами иода. Цель изобретения - сокращение времени определения. В реакционную смесь добавляют 0,5 - 10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 - 5 мг/мл азида натрия. Отбирают аликвоту смеси, наносят ее на пластину силуфола и хроматографируют смесью ацетона с водой, содержащей 5 - 20% воды по объему, с последующей радиометрией. 1 табл.

СОЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ((9) (ll) (5!)5 G 01 N 30/90

ГОСУДА Р СТ В Е ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4649423/25 (22) 10.02.89 (46) 15,08.91, Бюл. М 30 (71) Институт биоорганическсй химии

АН БССР (72) М.В.Макаренко и И.М.Политыко (53) 543.544 (088.8) (56) Уильямс У.Дж. Опоелеление анионов, М,;Химия, 1982, с. 383,289, Graf Е, and Penmiston J.Т. Daferminatlon

of Stoicteiometry of Radiolodlnatlon of

Proteins. - Anal Blochem, 1980,108,299-302, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВКЛЮЧЕНИЙ ИЗОТОПА ИОД-125

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиоиодировании белков и нуклеотидов иэотопами иода.

Цель изобретения — сокращение времени определения, Способ осуществляют следующим образом.

В реакционную смесь добавляют 0,5—

10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 — 5 мг/мл азида натрия. Отбирают аликвоту смеси, наносят ее на пластину силуфола и хроматографируют, смесью ацетона с водой, содержащей 5 — 207; воды по обьему с последующей радиометрией, Пример 1, Определение эффективности включения изотопа при получении 1-2 -0125 сукцинил-тирозинметилового эфира аденозин-3,5-циклофосфата (1-цАМФ).

ПРИ РАДИОИОДИРОВАНИИ БЕЛКОВ И

НУКЛ ЕОТИДОВ (57) Изобретение относигся к аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиомодировании белков и нуклеотидов изотопами иода.

Цель изобретения — сокращение времени определения. В реакционную смесь добавляют 0,5 — 10 мг/Mn бычьего сывороточного альбумина и 0,01 — 5 мг/мл азида натрия, Отбирают аликвоту смеси, наносят ее на пластину силуфола и хроматографируют смесью ацетона с водой, содержащей 5—

20;(, воды по объему, с последующей радиометрией. 1 табл.

В ампулу с 20 мкл 0,1 M натрий фосфатного буфера рН 7,0 (НФБ) вносят 2 мкл раствора (0,2 мКи) Na 1, 10 мкл раствора (10

l мкг) хлорамина Т и 10 мкл раствора (1 мкг) 2

-0-сукцинилтирозинметилового эфира аденозин-3, 5 -циклофосфата. Перемешивают в течение 30 с при комнатной температуре, Реакцию останавливают прибавлением 10 4 мкл раствора (10 мкг) метабисульфита íà- C) трия. Прибавляют к реакционной смеси 200 Ql мкл, 0,05 М натрий ацетатного буфера рН 6,0, сО содержащего 0,05 6СА и 0,1 азида натрия.

Отбирают аликвоту объемом 2 мкл, наносят ее на пластинку силуфола, сушат и хроматографируют в ацетоне, содержащем

57 воды. Пластинку силуфола режут на поперечные полоски шириной по 0,7 см и, поместив последовательно в пробирки, просчитывают на гамма-счетчике. Определяют эффективность включения изотопа (ЭВ) по отношению счета радиоактивности, остав1670599

ЭВ = — "- -X100$ (1

Эффективность, 7. при

Показатели

1 (1

357 воды

10Х воды

Ацетон 5Х воды

0,11

У@ 1 1 1 (ХОЛОСТОЙ

ОПЫТ) 0,2

0,6

33,2

42,3

54,3

11m 1 чхГ

"5 1.-РЭА

54,2

54,3

54,9

60,1

49,0

51,3

51,0

76,5

51,2

52,0

73,5

1251ц,Щф 80 8

76,9

Растворим

77,2

Время ана= лиза, мин 1,5

4,5

2,5 шейся на старте и соответствующей целевому продукту (1 np), к общему количеству счета радиоактивности взятой аликвоты (1) по формуле:

Эффективность включения 77,27ь.

Пример 2. Определение эффективности включения изотопа при радиоиодировании хорионического гонадотропина человека (1-чХГ).

В ампулу с 20 мкл 0 1 М НФЕ вносят 5 мкл раствора (1 мКи) Na 1, 10 мкл раствора (5 мкг) хлорамина Т, 10 мкл раствора (9 мкг хорионического гонадотропина человека.

Перемешивают в течение 20 с при комнатной температуре. Останавливают реакцию прибавлением 10 мкл раствора (4 мкг) метабисульфита натрия. Вносят 200 мкл 0,1 М

НФБ, содержащего 0,57ь бычьего сывороточного альбумина и 0,027ь аэида натрия.

Отбирают акликвоту объемом 2 мкл и наносят ее на пластинку силуфола. Сушат, анализируют в ацетоне, содержащем 107ь воды. Рассчитывают эффективность включения по примеру 1. Эффективность включения 54,3 .

Пример 3. Определение эффективности радиоиодирования при получении 1125 раково-эмбрионального антигена (1 251-Р ЭА), В ампулу с 20 мкл 0 1 М НФБ вносят 10 мкл раствора (2 мКи) Па 1,80 мкл раствора (80 мкг) раково-эмбрионального антигена, 20 мкл раствора (20 мкг) хлорамина Т. Реакцию проводят в течение 30 с при комнатной температуре. Останавливают прибавлением

20 мкл раствора (20 мкг) метабисульфита натрия. Разбавляют реакционную смесь 200 мкл

0,1 МНФБ,,содержащего 0,1 бычьего сывороточного альбумина и 0,027, азида натрия, 5

Аликвоту объемом 1 мкл из реакционной смеси наносят на пластинку силуфола и хроматографируют в ацетоне, содержащем 207ь воды. Рассчитывают эффективность включения по примеру 1, Эффективность включения

51 7ь, Данные определения эффективности включения изотопа в разных условиях сведены в таблицу 1.

Из таблицы следует, что продажный ацетон (ч.ж.а.) непригоден для анализа, а использование 5 — 207ь воды включает оптимальный вариант (107,). Дальнейшее увеличение количества воды ухудшает разделение иэ-за растворимости метки, при этом увеличивается время анализа.

Данный способ по сравнению с прототипом позволяет уменьшить время определения эффективности включения изотопа при радиоиодировании в 24 — 48 раэ. Использование ацетона. содержащего 5—

207ь воды, для анализа реакционной смеси на пластинке силуфола позволяетдостаточно быстро произвести определение эффективности включения изотопа и тем самым сократить время нахождения целевого продукта в реакционной смеси, содержащей избыточные количества химических реагентов.

Формула изобретения

Способ определения эффективности включений изотопа иод-125 при радиоиодировании белков и нуклеотидов, включающий хроматографию аликвоты реакционной смеси на силуфоле с последующей радиометрией, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени, определения к реакционной смеси до хроматографирования добавляют 0,5 — 10 мгlмл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 — 5 мг/мл азида натоия, а хроматографирование осуществляют смесью ацетона с вбдой, содержащей

5 — 207ь воды по объему. условиях определения

15 воды 20Х воды