Способ диагностики раннего срока беременности

 

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и гинекологии, и предназначено для диагностики раннего срока беременности. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. В основе способа - реакция непрямой иммунофлуоресценции с использованием твердофазного диагностикума - зерен цианогенбромированной агарозы, коньюгированной с омоноклональными антителами к β-субъединице хорионического гонодотропина человека, продуцируемыми гибридомным клоном Ф 12. Для осуществления способа пробу мочи женщин разводят равным объемом фосфатного буферного раствора (ФБР) с PH 7,2 - 7,4, добавляют к ней 40,0 - 60,0 мкл суспензии агарозы, соединенной с моноклональными антителами к β - ХГЧ. ИНКУБИРУЮТ СМЕСЬ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ 15 - 20 МИН, ОТМЫВАЮТ ТРОЕКРАТНО ФБР, центрифугируют при 1000 - 1500 об/мин в течение 1 - 1,5 мин. К осадку добавляют 50,0 - 60,0 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченных флуоресцеиназотиоцианатом, инкубируют смесь повторно при комнатной температуре в течение 15 - 20 мин. Троекратно отмывают ФБР, центрифугируют и исследуют осадок в люминесцентном микроскопе, и при наличии краевого свечения зерен диагностикума диагностируют ранний срок беременности. Предложенный способ позволяет выявлять у 100% женщин при сроке 3 - 4 недели беременности. Время анализа ускоряется в 5 - 6 раз при оценке результата через 1 ч.

СОК)З СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (спs G 01 N 33/577

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4416189/14 (22) 25.04.88 (46) 30.08.91. Бюл. М 32 (71) Научно-исследовательский институт морфологии человека АМН СССР (72) М.Ш,Вербицкий, И.П,Папазов, Л.Ф.Ротанова, Р,Фидлер и И,И,Биткулова (53) 615.475(088.8) (56) Димитров Д.Я. Хормальный гонадотропин человека, М.: Медицина, 1979, с.143. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАННЕГО

СРОКА БЕРЕМЕННОСТИ (57} Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии,и предназначено для диагностики раннего срока беременности. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. В осноае способа — реакция непрямой иммунофлуоресценции с использованием . вердофазного диагностикума— зерен цианогенбромированной агарозы, коньюгирова лной с моноклональными антителами к /3-субьединице хорионическоlo гонадотропина человека (ХГЧ), Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству и гинекологии. и предназначено для диагностики раннего срока беременности.

Цель изобретения — повышение точности и ускорение способа, стандартизация млмунплогических реагентов и обеспечение технологичности производства диагностикрлов.

Для достижения поставленной цели используют способ диагностики беременности путем обнаружения в моче женщин хорионического гонадотропина человека. Ж 1673975 А1 продуцируемыми гибридомным клоном

Ф12. Для осуществления способа пробу мочи женщин разводят равным объемом фосфатного буферного раствора (ФБР) с рН

7,2-7,4, добавляют к ней 40,0-60,0 мкл суспенэии агарозы, соединенной с моноклональными антителами к Р-ХГЧ, Инкубируют смесь при комнатной температуре 15 — 20 мин, отмывают троекратно

ФБР, центрифугируют при 1000 — 1500 об/мин в течение 1-1,5 мин. К осадку добавляют 50,0-60,0 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченч. х флуоресцеинаэотиоциа натом (Ф ИТ Ц), инкубируют смесь повторно при комнатной те лпературе в течение 15-20 мин. Троекратно отмывают ФБР центрифугируют и исследуют осадок в люминесцентном микроскопе и при наличии краевого свечени зерен диагностикума диагносцируют ранний срок беременности. Предла аемьи способ позволяет выявлять беременность у 100 женшин при сроке 3-4 недели при оценке результата через 1 ч.

Время анализа ускоряется в 5-6 раэ. (ХГЧ) с помощью реакции непрямой иммунофлуоресценции с использсвание л тердофазного диа; ностикума — зерен цигногентромированной агарозы, на которые коньюгированы моноклональные антитела к р-субьединице ХГЧ ф -ХГЧ), продуцируемые гибридомным клоном Ф12, Способ осуществляют следующим образом, Мочу перед исследованием разводят равным обьемом фосфатного буферного раствора (ФБР) 0.25-0.3 М, рН 7,2-7,4. В центрифужную пробирку вносят 0,5 — 1,0 мл

1673975

Пример 2, П-ва Г.А., задержка месячных 8 дней. Взято 0,5 мл мочи, прибавлено

0,5 мл ФБР с рН 7,2, к пробе мочи прибавлены 50 мкл суспензии зерен агарозы, соединенной с моноклональными антителами к Р -ХГЧ, смесь проинкубирована 20 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 1000 об/мин в течение i мин, прибавлены 50 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченых ФИТЦ, смесь повторно проинкубирована в течение 15 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 1500 об/мин в течение 1,5 мин, Осадок исследован в люминесцентном микроскопе, отсутствие краевого свечения свидетельствует, что ХГЧ в моче не выявлен— беременности нет. задержка месячных обуслолвена нарушением менструального цикла. Диагноз подтвержден.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявлять беременность у 1007ь женщин при сроке 3 — 4 недели при оценке результатов через 1 ч. исследуемой разведенной мочи, 40-60 мкл взвеси зерен диагностикума (в 1 мл 50006000 зерен), инкубируют при комнатной температуре в течение 15-20 мин, отмывают троекратно ФБР путем центрифугирования пробирки при 1000 — 1500 об/мин в течение 1 — 1,5 мин. К осадку приливают

50,0 — 60,0 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ,меченных флуоросцеинизотиоцианатом (ФИТЦ), встряхивают пробирку, повторно инкубируют при комнатной температуре в тчение 15-20 мин, отмывают троекратно ФБР путем центрифугирования. Учет результата реакции осуществляют под люминесцентным микроскопом. 1 каплю суспензии зерен наносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют при увеличении х110 — 160 с использование фильтров ФС-12, СС вЂ” 15 — 2, Б — С вЂ” 8 — 2, В случае положительной реакции наблюдают яркое краевое свечение зерен диагностикума. При постановке реакции обязательно проводят исследование контрольных образцов мочи: положительного (содержащего ХГЧ) и отрицательного (не содержащего ХГЧ).

Пример 1. А-Я И.P., задержка месячных 7 дней, Взято 0,5 мл мочи, прибавлено

0,5 мл ФБР с рН 7,2, добавлено 40 мкл суспенэии зерен агарозы, соединенной с моноклональными антителами к Р -ХГЧ, смесь проинкубирована в течение 20 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно

ФБР, отцентрифугирована при 100 об/мин в течение 1 мин, прибавлены 50 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченных ФИТЦ, смесь проинкубирована в течение 20 мин при комнатной температуре, троекратно отмыта ФБР, отцентрифугирана при 1000 об/мин в течение 1 мин, осадок исследован в люминесцентном микроскопе, по наличию краевого свечения зерен диагнос.,трован ранний срок беременности.

Спустя 3 недели диагноз беременности подтвержден при гинекологическом обследовании и ультразвуковом исследовании. Срок беременности установлен 5 — 6 недель.

Таким образом, при иммунологическом исследовании предлагаемым способом беременность была диагностирована в срок 2-3 недели.

Формула изобретения

Способ диагностики раннего срока беременности путем определения содержания хорионического гонадотропина человека в моче, отл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, пробу мочи разводят равным объемом фосфатного буферного раствора с рК 7,2-7,4, добавляют к ней суспензию агарозы, соединенной с моноклональными антителами к Р -субъединице хорионического гонадотропина человека, продуцируемыми клоном Ф12, инкубируют смесь, отмывают троекратно буферным раствором, центрифугируют, к осадку добавляют кроличьи моноспецифические антитела к хорионическому гонадотропину человека, меченные флуоресцеинизотиоцианатом, повторно инкубируют, отмывают фосфатным буферным раствором, центрифугируют и исследуют осадок в люминесцентном микроскопе и при наличии краевого свечения диагносцируют ранний срок берем ен ности.

Составитель P. Гуменюк

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Э. Лончакова

Редактор А. Огар

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 2915 Тираж 391 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5