Способ получения 3,4-дегидро-4-формил-8-метил-8- гидроксииридан-1-ол)-1- @ -d-глюкопиранозида

 

Изобретение касается замещенных глюкозидов, в частности получения 3,4-дегидро-4-формил-8-метил-8-гидроксииридан-1Изобретение относится к способам получения нового природного соединения ряда монотерпеновых иридоидных гликозидов, а именно 3,4-дегидро-4-формил-8-метил-8- гидроксииридан-1-ол)-1-/3 -D-глюкопиранозида (велпетина) формулы нсно () ол-1-/3 -Д-глюкопиранозида, обладающего противокашлевой и бронхолитической активностью , что может быть использовано в медицине. Цель - создание нового более активного вещества указанного класса. Синтез ведут экстракцией измельченной надземной части котовника бархатистого Ci-2-алкиловым спиртом (соотношение 1:(6- 10)) с последующим упариванием растворителя в вакууме до водного остатка. Упаренный экстракт очищают хлороформом с последующим хроматографированием на силикагеле (соотношение сырья и сорбента 1:0,4) с использованием в качестве элюента для десорбирования целевого продукта смеси хлороформа и метанола 90-100)-(88- 12) и очисткой перекристаллизацией из смеси хлороформа и метанола (3:1). Новое вещество имеет в 1,5 раза лучшую противокашлевую активность в сравнении с известным ледолом при тенденции к снижению ацетилхолинового бронхоспазма и токсичности на мышах мг/кг. (А С обладающего противокашлевой и бронхолитической активностью, Цель изобретения - способ получения нового природного соединения группы терпеноидов, обладающего более высокой противокашлевой активностью в сравнении с известными соединениями этой группы. Поставленная цель достигается тем, что измельченную воздушно-сухую надземную часть котовника бархатистого (Nepeta velutina Pojark) экстрагируют метанолом или 96%-ным этиловым спиртом в соотношении 1:(6-10) при кипении, полученные о 00 о 3

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАР СТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБ ЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

НОСИ O OOHIOB () (21) 4730707/04 (22) 14.08,89 . (46) 30.09.91. Бюл. N 36 (71) Научно-производственное объединение

"Всесоюзный научно-исследовательский институт лекарственных растений" (72) Г.Г.Запесочная, Л.Н.Первых, B.À.Êóðкин, Н.Г.Глазова и С.Я,Соколов (53) 947.94.5(088.8) (56) Takeda Y., Nlshimura Н., lnouye Н, Two

new iridold 9!исозЫев from Ixora chlnensis,,Phytochemistry, 1975, 14, р.2647 — 2650, Андронова Л.M. Изучение противокашлевых свойств ледола в опытах на морских свинках.// Результаты научных исследований в области лекарственного растениеводства; Сборник научных работ, M., 1975, вып.

8, с.186 — 188. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 3,4-ДЕГИДРО-4ФОРМИЛ-8-МЕТИЛ-8-ГИДРОКСИИРИДАН-1-ОЛ)1-P -Ä-ГЛЮКОПИРАНОЗИДА (57) Изобретение касается замещенных глюкозидов, в частности получения 3,4-дегидро-4-формил-8-метил-8-гидроксииридан-1Изобретение относится к способам получения нового природного соединения ряда монотерпеновых иридоидных гликозидов, а именно 3,4-дегидро-4-формил-8-метил-8гидроксииридан-1-ол)-1 Р -О-глюкопиранозида (вел петина) формул ы

„„!Ы „„1680705 А1 (я)л С 07 Н 19/24, А 61 К 31/70

oft-1- Р -Д-глюкопиранозида, обладающего противокашлевой и бронхолитической активностью, что может быть использовано в медицине. Цель — создание нового более активного вещества указанного класса.

Синтез ведут экстракцией измельченной надземной части котовника бархатистого

С1-2 алкиловым спиртом (соотношение 1:(6—

10)) с последующим упариванием растворителя в вакууме до водного остатка.

Упаренный экстракт очищают хлороформом с последующим хроматографированием на силикагеле (соотношение сырья и сорбента

1:0,4) с использованием в качестве элюента для десорбирования целевого продукта смеси хлороформа и метанола (90 — 100) — (88—

12)) и очисткой перекристаллизацией из смеси хлороформа и метанола (3:1). Новое вещество имеет в 1,5 раза лучшую противокашлевую активность в сравнении с известным ледолом при тенденции к снижению ацетилхолинового бронхоспазма и токсичности на мышах ЛД5о=1500 мг/кг. обладающего противокашлевой и бронхолитической активностью, Цель изобретения — способ получения нового природного соединения группы терпеноидов, обладающего более высокой противокашлевой активностью в сравнении с известными соединениями этой группы.

Поставленная цель достигается тем, что измельченную воздушно-сухую надземную часть котовника бархатистого (Nepeta

velutina Pojark) экстрагируют метанолом или 96 Р-ным этиловым спиртом в соотношении 1:(6 — 10) при кипении, полученные

1680705 экстракты фильтруют, упаривают до водного остатка, упаренный водный остаток обрабатывают хлороформом, очищенный водный раствор наносят на силикагель, высушивают, Полученный сыпучий порошок хромэтогрэфируют на колонке силикагеля, элюируя смесью хлороформ-метанол, элюаты (хлороформ-метанол, 88:12), содержащие велпетин, упаривают до сухого остатка, который перекристаллизовывают из смеси хлороформ-метанол в соотношении 4;1.

Выход велпетина составляет 0,3 — 0,4% от массы воздушно-сухого сырья.

Пример. 1; 100 г.измельченной воздушно-сухой травы котовника бархатистого, заготовленного в Нахичеванской АССР в фазу цветения, экстрагируют метанолом в соотношении 1:10 при кипении (3 раза 1 ч).

Полученные метанольные экстракты фильтруют и упаривают в вакууме до водного остатка (около 25 мл), упаренный водный остаток обрабатывают хлороформом (по 50 мл 5 раз), очищенный водный экстракт наносят нэ силикагель (10 г) и высушивают.

Полученный сухой порошок (20,5 г) наносят на слой силикагеля (40 г), сформированный в колонке в виде взвеси в хлороформе (диаметр колонки 6 см, высота слоя сорбента 3 см) и элюируют хлороформом (0,3 л), смесью хлороформ — метанол в соотношении 91;9 (0,5 л, промывка колонки) и в соотношении

88:12 (1,5 л, десорбция целевого продукта).

Фракции, содержащие целевой продукт, упаривают в вакууме досуха, сухой остаток (0,9 г) растворяют при нагревании в 2 мл метанола, добавляют 6 мл хлороформа, перемешивают и оставляют раствор для кристаллизации целевого продукта, получаемый осадок отжимают в вакууме, промывают 2 раза смесью хлороформ-метанол (3:1), Получено 0,4 r велпетина (т.пл, 204 — 205 С), что составляет 0,4% от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 2. 100 г измельченной воздушно-сухой травы котовника бархатистого, заготовленного в Нахичеванской АССР в фазу цветения, экстрагируют 96%-ным этиловым спиртом в соотношении 1:10 при кипении (3 раза <1 ч). Дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Получено 0,3 г целевого продукта (т.пл.

204 — 205 C), что составляет 0,3%. от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 3, 100 г воздушно-сухой травы котовникэ бархатистого экстрагируют 80% ным этиловым спиртом в соотношении 1:10 (3 раза при кипении). Полученные экстракты упаривают до водного остатка, который очи.щают хлороформом. Дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1. Целевой

10

20 примеру 1.

Получено 0,3 r велпетина (т.пл. 202—

204 С), что составляет 0,3% от массы воздушно-сухого сырья

30 примеру 1.

Получено 0,34 г велпетина (т.пл, 202—

205 С), что составляет 0,36% от массы воздушно-сухого сырья

50 продукт в этих условиях не кристаллизуется.

Пример 4. 100 г измельченной воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении

1:10 при комнатной температуре (3 разах24 ч). Полученные метанольные экстракты упа3 ривают в вакууме до водного остатка и далее обрабатывают аналогично примеру 1.

Получено 0,32 г велпетина (т.пл, 202204 С), что составляет 0,32% от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 5. 100 r измельченной воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют96%-ным этиловым спиртом в соотношении 1:10 при комнатной температуре (3 раза « 24 ч), полученные спиртовыа экстракты упаривают в вакууме до одного остатка, далее обработку ведут аналогично

Пример 6. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрэгируют метанолом в соотношении 1:6 (3 раза при кипении),. полученные метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка и дальнейшую обработку ведут аналогично

Пример 7, 100 r воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1:9 (3 раза при кипении), полученные метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка и дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Получено 0,39 г целевого продукта (т.нл.

203 — 204 С), что составляет 0,39% от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 8. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метаиолом в соотношении 1:11 (3 раза при кипении), полученные метанольные экстракты упаривают до водного остатка и дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Получено 0,4 r целевого продукта (т.пл.

203 — 205 С), что составляет 0,4% от массы воздушно-сухого сырья, Пример 9. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагиру-. ют метанолом в соотношений 1:5 (3 раза при кипении), полученные метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка и дальше ведут обработку аналогично примеру 1.

1680705

Получено 0,28 r велпетина (т.пл, 202203 С), что составляет 0,28 от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 10. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагиру- 5 ют метанолом в соотношении 1:10 при кипении (4 раза «1 ч), полученные метанольные экстракты упаривают до водного остатка и дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Получено 0,4 г велпетина (т.пл. 203205 С), что составляет 0,4 от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 11. 100 r воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1:10 при кипении (2 раза х1 ч), полученные метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка и дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Получено 0,29 г велпетина (т.пл, 202204 С), что составляет 0,29 от массы воздушно-сухого сырья, Пример 12. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1:10 при кипении (3 раза х1 ч), полученные метанольные экстракты упаривают до водного остатка, наносят на силикагель и высушивают. Полученный сыпучий порошок наносят на колонку силикагеля и дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Целевой продукт при этом не получен.

Пример 13. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1;10 при кипении (3 раза 1 ч). Метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка, водный остаток обрабатывают хлороформом (по 50 мл 5 раз), очищенный водный экстракт наносят на силикагель (10 г) и высушивают. Полученный сухой порошок наносят на слой силикагеля (30 г), сформированный в колонке в виде взвеси в хлороформе, и дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Получено 0,3 r велпетина, загрязненного примесями (т.пл, 190 — 193 С), Пример 14. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1:10 при кипении (3 раза «1 ч). Метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка, водный остаток обрабатывают хлороформом, очищенный водный экстракт наносят на силикагель (1 0 г) и высушивают. Полученный сыпучий порошок наносят на слой силикагеля (100 r), сформированный в колонке в виде взвеси в хлороформе, дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1.

Получено 0.35 г велпетина (T.пл. 202203 С), что составляет 0,357, oi MAccbl воздушно-сухого сырья, Пример 15. 100 г воздушно сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1: 0 (3 раза 1 ч), Метанольные экстракты упаривают до водного остатка, последний обрабатывают хлороформом (по 50 мл 5 раз), очищенный водный экстракт наносят на силикагель (10

r) высушивают. Полученный порошок (20,5 г) делят на две равные части.

Одну половину (10,25 г} сыпучего порошка наносят на слой силикагеля (20 г), сформированный в виде взвеси в хлороформе, Колонку промывают хлороформом (0,16 л) и смесью хлороформ — метанол (92:8, 0,25 л), целевой продукт десорбируют смесью хлороформ-метанол (88:12). Дальнейшую обработку проводят аналогично примеру 1, уменьшив в 2 раза объем растворителя.

Получено 0,1 г загрязнен ного велпетина (белые кристаллы с желтоватым оттенком, т.пл. 180 — 187 С}, Пример 16. 8торую половину порошка (сорбент+ экстракт), полученного в примере

15, наносят на слой силикагеля (20 г), сформированного в колонке в виде взвеси в хлороформе, промывают колонку хлороформом (0,15 л) и смесью хлороформ-метанол (92:8).

Целевой продукт десорбируют смесью хлороформ-метанол (90:10, 0,25 л) и дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1, уменьшив s 2 раза объем растворителей.

Получено 0,12 r целевого продукта (т.пл.

203 — 204 С), что составляет 0,24 Д от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 17. 150 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1:10 (3 раза при кипении). Метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка, который обрабатывают хлороформом (по 75 мл 5 раз). Очищенный водный остаток наносят на силикагель (15.0 г), высушивают и получают

30,1 г сыпучего порошка. 10,33 г полученного порошка наносят на слой силикагеля (20 г), сформированного в колонке в виде взвеси в хлороформе, промывают колонку 0,15 л хлороформа и 0,25 до смеси хлороформ-метанол (91:9), целевой продукт десорбируют смесью хлороформ-метанол в соотношении

90:10 (1 л). Дальнейшую обработку ведут а н алогично и римеру 15.

Получено 0,16 r целевого продукта (т.пл.

203 — 205 С), что составляет 0,32 от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 18. 10,33 г порошка (сорбент

+ экстракт), полученного в примере 17. Хроматографируют аналогично примеру 16, но

1680705 с тем отличием, что для десорбирования используют смесь хлороформ-метанол (89:11, 1 л), Дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 15.

Получено 0,18 г целевого продукта (т.пл.

202 — 204 С), что составляет 0,36 от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 19. 10,33 г порошка (сорбент

+ экстракт), полученного в примере 17, хроматографируют аналогично примеру 16, но с тем отличием, что для десорбирования целевого продукта используют смесь хлороформ-метанол в соотношении 87:13 (0,75 л).

Дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 15. Целевой продукт в кристаллическом виде получить не удалось.

Пример 20. 100 г воздушно-сухой травы котовника бархатистого экстрагируют метанолом в соотношении 1;10 (3 раза при кипении), метанольные экстракты упаривают в вакууме до водного остатка. Дальнейшую обработку ведут аналогично примеру 1, но с тем отличием, что на стадии кристаллизации велпетина сухой остаток растворяют при нагревании в 2 мл метанола, добавляют 4 мл хлороформа, перемешивают и оставляют раствор для кристаллизации.

Целевой продукт в таких условиях не кристаллизуется.

Пример 21, Некристаллизующийся целевой продукт, полученный в примере 20, упаривают досуха, растворяют в 2 мл метанола при нагревании, добавляют 8 мл хлороформа, перемешивают и оставляют раствор для кристаллизации, Получено 0,42 г велпетина, загрязненного примесями (т.пл. 190 — 106 Ñ), Велпетин был изучен в отношении противокашлевой и бронхолитической активности.

Противокашлевую активность велпетина изучали на кошках различных пород весом 2,5 — 5,0 кг, с применением барбамилового наркоза 60 мг/кг. Установ. лено, что велпетин в дозах 1,0 мг/кг и 10,0 мг/кг вызывает угнетение кашлевого рефлекса на 34,1 — 57,2 и 40,6 — 60,9 соответственно, Бронхолитические свойства велпетина изучали на морских свинках обоего пола массой 300-500 r. Бронхоспазм вызывали внутривенным введением ацетилхолина в дозе 10 мкг/кг. В результате проведенных исследований установлено, что на фоне выделения велпетина в дозе 10,9 мг/кг величи5 на бронхоспазма снижалась через 2, 20, 40, 60, 80, 100 мин на 25,5; 10,5; 19,3; 20Я; 24,8;

24,7 соответственно, а при дозе 10,0 мг/кг за аналогичные промежутки времени — на

9,7; 8,1; 12,6; 15,4; 29,7, 45,2 соответствен10 но, Таким образом, велпетин обладает противокашлевой активностью, примерно в 1,5 раза превышающей противокашлевую активность известного соединения группы се15 сквитерпенов — ледола, Кроме того, велпетин имеет тенденцию к снижению аце- тилхолинового бронхоспазма.

Исследование острой токсичности велпетина на мышах показало, что LD : 1500

20 мг/кг (подкожное введение).

Следовательно, велпетин по показателям острой токсичности относится к малотоксичным соединениям и почти в 1,5 раза менее токсичен известного соединения

25 группы сесквитерпенов — ледола.

Формула изобретения

Способ получения 3,4-дегидро-4-формил-8-метил-8-гидроксииридан-1-ол)-1- PD-глюкопиранозида формулы

НО СИз 0 < СИ ÎH

ОН

35 отличающийсятем, что измельченную надземную часть котовника бархатистого (Nepeta ve1utina Pojark. Lamiaceae) экстраги- руют низкомолекулярным спиртом (С -С ) в

40 соотношении 1:(6 — 10) с последующим выделением целевого продукта упариванием растворителя в вакууме до водного остатка, очисткой упаренного экстракта хлороформом, хроматографированием экстрактив45 ных веществ на силикагеле в соотношении сырье-сорбент 1:0,4 с использованием в качестве элюента для десорбирования целевого продукта смеси хлороформметанол ((90-10) — (88 — 12)) и последующей

50 его очисткой перикристаллизацией из смеси хлороформ — метанол (3:1).