Штамм бактерий viвriо сноlеrае - продуцент меланина, используемый в качестве тест-объекта для отбора меланинпродуцирующих штаммов холерных вибрионов

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается нового бактериального штамма - продуцента меланина, который может быть использован в качестве тест-объекта при изучении меланиногенеза у штаммов холерных и эмперопатогенных вибрионов, для которых образование этого пигмента не характерно. Целью изобретение является получение штамма бактерий Vibrio cholerae KM-18 019 серовара - продуцента пигмента меланина. Использование предлагаемого штамма как эталонного ускоряет выполнение экспериментов при изучении меланиногенеза у холерных и энтеропатогенных вибрионов. у Ј

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР пюац - Щур.;,, Юйад

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ с

«= (21) 4659332/13 (22) 09.01.89 (46) 07.10.91. Бюл. М 37 (71) Всесоюзный научно-исследовательский . противочумный институт "Микроб" (72) И.И.Щуркина. Е.С.Казакова и А.К.Адамов (58) 663.15(088,8) (56) Кудрякова Т.А. и Дрожевнина M.Ñ. Пигментные штаммы холерных вибрионов биотина Эль-Мор. Зпидемиология, клин. и диагн. и профилактика антропонозных и зоон, инфекций. Астрахань, 1982, с. 193 — 194.

Гальцева Г.В., Либазон А.Е. и Саямов

P.М. Пигментообразующие штаммы вибрионов. — Там же, с. 194-195. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAEПРОДУЦЕНТ МЕЛАНИНА, ИСПОЛЬЗУЕИзобретение относится к медицинской микробиологии и касается нового бактериального штамма-продуцента меланина, который может быть использован в качестве тест-объекта при изучении меланиногенеза у штаммов холерных и эктеропатогенных вибрионов, для которых образование этого пигмента не характерно.

Целью изобретения является получение штамма бактерий Vibrio cholerae КМ-18 019 серовара продуцента пигмента меланина.

Штамм Vibrio choeerae KM — 18 представляет собой спонтанный мутант, возникший при длительном хранении исходного штамма без пересева в полужидком агаре из настоя сердечной мышцы (рН 7,6) при комнатной темяературе в анаэробных условиях. Мутант селекционируют путем отбора клеток, интенсивно образующих меланин.!

Ы,, 1682391 А1 (st)s С 12 N 15/01; С 12 Р 1/04

МЫЙ В КАЧЕСТВЕ ТЕСТ-ОБЪЕКТА ДЛЯ

ОТБОРА MEЛАН И Н П РОДУЦИ РУ10ЩИХ

ШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ (57} Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается нового бактериального штамма — продуцента меланина, который может быть использован в качестве тест-объекта при изучении меланиногенеза у штаммов холерных и эмперопатогенных вибрионов, для которых образование этого пигмента не характерно. Целью изобретение является получение штамма бактерий

Vibrio choterae КМ-18 019 cepoaapa — продуцента пигмента меланина. Использование предлагаемого штамма как эталонного ускоряет выполнение экспериментов при изучении меланиногенеза у холерных и энтеропатогенных вибрионов.

Оптимальными условиями хранения штамма являются лиофильное высушивание, «р или содержание в полужидком агаре (0,25 ) из настоя сердечной мышцы или . агаре Мартена (рН 7,6) под слоем стерильного вазелинового масла. Высушенную 4 4. культуру сохраняют при 4 С в полужидком Q агаре при 22 — 25 С. певи.

Штамм имеет следующие характеристики.

Культурально-морфологические признаки.

Слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образуют, грамотрицательные.

На стандартных плотных средах о рН

7,6 (2 -ный агар из настоя сердечной мышцы, 2 -ный агар Мартена, 2,(,-ный агар Хоттингера) при 37о через сутки растет в виде гладких, круглых, плосковыпуклых с ровным

1682391

10 краем колоний коричневой окраски диаметром 2 — 2,5 мм. В жидких стандартных средах с рН 7,6 (1%-ный пептонная вода, бульон из настая сердечной мышцы, бульон Мартена, бульон Хоттингерэ) при 37 С через сутки наблюдается равномерное помутнение и в аэробных условиях коречневая окраска среды.

Физиолого-биохимические признаки.

Отношение к источникам углерода: сбраживает глюкозу, маннит, сахарозу, мальтозу, крахмал, маннозу; не сбраживает арабикозу,мактазу.

Отношение к источникам азота.

Для хорошего роста в питательных средах должно быть от 100 до 200 мг.% аминного азота. Штамм не обладает уреазной активностью..

Имеет декарбоксилазу лицина и аргентина, не имеет дигидролизэ аргинина, обладает протеолитической активностью.

Продуцент индол, не продуцирует сероводород, разжижает желатин, Растет в 1%-ный пептонной воде с 1%

NaCl, не растет — в присутствии 7 NaCI.

Чувствителен к стрептомицину, тетрациклину, эритромицину, мономицику, неомицину, левомецитину. Агглютинируется холерными выворотками Π— B.ðaýâåäåíèè

1:100 и R0 — 1.200. Лизируется цельным фагом эльтор. Сохраняет антигенную структуру вибриона 019 серовара.

Добавление в питательную среду 0 1% тирозина в сочетании с 0,1% цистеина стимулирует образование большего количества пигмента, чем добавление 0,1 тирозина или 0,1% фенилаланина. Штамм стойко сохраняет свойство синтезировать меланин и его можно использовать в качестве тестобъекта при изучении меланогенеза у холерных и энтеропатогенных вибрионов.

Растет в аэробных и микроаэробных условиях; при полном отсутствии 02 роста нет.

Рост происходит при рН 6 — 9,6, оптимум

7,6, Температура границы роста 16 и 40 С, оптимальная температура 37 С.

Пример 1. Использование штамма

Ч.cholerat KM-18 019 серовара в качестве тест-штамма при выращивании культур на плотных питательных средах.

Штамм Ч;cholerae КМ вЂ” 18 и исследуемые на наличие пигмента культуры штаммов 1, 2, 3 высевэют в жидкую питательную среду(бульон из настоя сердечной, мышцы, 20

55 рН 7,6), После подрэщивания при 37 С в течение 5 — 6 ч пересевают на 2%-ный агар из настоя сердечной мышцы (рН 7,6) и инкубируют при 37 С в течение 18 — 20 ч; Выросшие колонии тест-штамма и среда имеют коричневое окрашивание. Проводят сравнительное исследование колоний штаммов

1, 2, 3 и KM-18, отбирают колонии, сходные по морфологии и каличию пигмента с тестштаммом.

Пример2. Применение штамма Ч. сholerae

КМ-18019 серовара в качестве тест-штамма при выращивании культур на питательных средах, обогащенных аминокислотами.

Штамм Ч. cholerae,КМ-18 019 серовара и исследуемые кэ меланогекез штаммы выращивают на агаре из настоя сердечной мышцы (рН 7,6) с добавлением 0,1 1-фенилаланина и L-тирозина или 1=тиронина и I= дистеина при 37 С в течение 24 ч, Указанные условия культивирования способствуют образованию пигмента.

Пример 3. Использование штамма V, choierae КМ вЂ” 18 019 серовара как эталонного при качественном определении меланиОтобранные колонии изучаемых штаммов и культуру эталонного штамма пересевают в пробирку, содержащую 5 мл бульона из настая сердечной мышцы (рН 7,6), и инкубируют при 37 С в течение 24 — 48 ч. Затем для доказательства наличия пигмента меланина к жидким культурам в одну пробирку добавляют 15 Н202, в другую — раствор

КМпО (по каплям), Питательная среда у эталонного штамма обесцвечивается. При наличии меланина у исследуемых штаммов также должно произойти обесцвечивание.

При добавлении небольшого количества

FeCb (по каплям) в среде с наличием меланика образуется тонкодисперсный осадок коричневого цвета, по мере увеличения количества FeCIa осадок исчезает.

Использование предлагаемого штамма, продуцирующего меланин, как эталонного ускоряет выполнение экспериментов в научных исследованиях. при изучении меланогенеза у холерных и энтеропатогенных вибрионов.

Формула изобретения, Штамм бактерий Vibrio cholerle-КМ-18

019 серовара - продуцент мелайина, используемый в качестве тест-объекта для отбора меланинпродуцирующих штаммов холерных вибрионов.