Способ определения микобактерий туберкулеза в диагностической пробе

 

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии. Целью изобретения является повышение точности способа за счет концентрации бактерий в пробе. Пробу инкубируют в течение 20-60 мин в водной успензии феррочастиц размером 50-100 А, предварительно озвученных ультразвуком мощностью 80-100 Вт/см. Далее бактерии осаждают, готовят мазки, окрашивают и исследуют под микроскопом. Способ позволяет выявить микобактерии в небольшом количестве экссудата.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (я)5 G 01 N 1/28

ГОсудАРстВенный кОмитет

ПО ИЗОБРЕТГНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4688428/14 (22) 31,03.89 (46) 15.10,91. Бюл. М 38 (71) Московский научно-исследовательский институт туберкулеза, Институт химической физики, Государственный научно-исследователбский институт химии и технологии элементоорганических соединений и Запорожский центр научно-технического творчества молодежи "Веда" (72) А.А,Рухлина, В,И.Филиппов, М.А.Владимирский, А.А.Кузнецов, Ю.Л.Семененксв, В.M,Äîëæàíñêèé, Н.П,Глухоедов, В.Г.Герливанов, Э.К.Добринский. С.И.Малашин, Л.А,Гончаров, Б.А.Шестопалов и Е.А.Красиков (53) 615.475(088,8) (56) Ященко T,Н, и др. Руководство к лабораторным исследованиям при туберкулезе, М., 1973, с. 11.

Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и может быть использовано во фтизиатрии при проведении микробиологических исследований.

Целью изобретения является повышение точности и разрешающей способности бактериоскопического определения микобактерий в диагностическом материале, Способ осуществляют следующим образом.

Диагностический материал (мокроту больного) гомогенизируют в присутствии

10%-ного раствора йазР04 (добавляют равный объем 1:1) при интенсивном встряхивании со стеклянными бусами в течение

30 мин, Гомогенат нейтрализуют HCI до рН

7,0. К обработан ному материалу добавляют взвесь феррочастиц. Используют высокодисперсный порошок феррочастиц. по„„SU „„1684616 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА В ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ПРОБГ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонолсгии. Целью изобретения является повышение точности способа эа счет концентрации бактерий в пробе.

Пробу инкубируют в течение 20-60 мин в водной суспензии феррочастиц размером

50-100 А, предварительно озвученных уль граэвуком мощностью 80-100 Вт/см. Далее бактерии осаждают, готовят мазки, окрашивают и исследуют под микроскопом. Способ позволяет выявить микобактерии в небольшом количестве экссудатэ. лученный плазмохимическщч способом, с размером частиц 50-100 А и удельной поверхностью 100-130 м /г. Гидрозоль фер2 рочастиц (0,1 — 0,2%) получают в фосфатносолевом буфере непосредг-венно перед исследованием путем ультр". .вуковой обработки суспензии феррочастиц в течение

3-5 мин на стандартном ультразвуковом диспергаторе УЗДН-2Т при частоте колебаний 22 кГq. мощности излучения

80-100 Вт/см, Озвученную ферросуспенэию инкубируют при комнатной температуре с гомогенизировэнным материалом в течение 1 ч при встряхивании.

Пробирку с исследуемым материалом помещают на 10-15 мин в поле постоянного магнита размером 40х40х10 мм, выполненного из сплава ЯцСо5 с напряженность о нэ

1684616

20 нее 100 полей зрения

55 поверхности 10 -2 10 Э с градиентом поля з . э от 500 до 1000 Э/см.

При отсутствии магнитной ловушки. создающей необходимое магнитное поле для осаждения феррочастиц, осуществление способа возможно путем концентрирования феррочастиц центрифугированием на обычных центрифугах (1,5 — 2 тыс. об/мин), Полученный осадок наносят на предметные стекла в виде мазков, которые фиксируют при 80 С в течение 1 ч. Мазки окрашивают люминесцентным красителем на основе аурамина и родамина С, обесцвечивают 3%-ным раствором HCI на 70" этаноле, докрашивают 0,025 -ным растворам метиленового синего. Микроскопию мазков проводят на микроскопе ЛЮМАМ и определяют флюоресцирующие золотисто-желтые микробные палочки при просмотре не меПример 1. Исследовали мокроту больного туберкулезом. К мокроте лобавляли равный объем 10 -ного .аствора

МазРОл. Гомогенизировали при встряхивании со стеклянными бусами 30 мин. Нейтрализовали гомогенат HCI до рН 7,0. I, 9 мл обработанного материала добавляли 1,5 мл

0,2 / -ной ферросуспензии, приготовленной

ex tempore путем озвучивания в течение

3-5 мин водной суспензии феррочастиц размером 50 — 100 А (полученных плаэмохимическим способом) на ультразвуковом диспергаторе УЗДИ вЂ” 2Т мощностью 80—

100 Вт/см с частотой колебаний 22 кГц.

Инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч. Пробирку с исследуемым материалом помещали на 10—

15 мин в поле постоянного магнита размером 40х40х10 мм, выполненного из сплава

SmCos, напряженностью 2000 Э. Полученный осадок наносили на предметные стекла в виде мазков, высушивали и фиксировали при 80 С в течение 1 ч. Окрашивали люминесцентным красителем (аурамин 00+ родамин С), обесцвечивали 3 -ным раствором HCI в 70 этаноле, докрашивали раствором метиленового синего, При люминесцентной микроскопии мазков, приготовленных указанным способом, выявлено 15 МБТ, что позволило диагностировать туберкулез. При просмотре мазков, подготовленных после традиционной обработки материала, получен отрицательный результат, Пример 2. Мокроту больного туберкулезом предварительно гомогенизировали

10-ным йазРО4 и нейтрализовали HCI. К

9 мл гомогената добавляли 1,5 мл 0,2 ный ферросуспенэии, приготовленной ех

1empore путем озвучивания в течение

3-5 мин водной суспензии феррочастиц размером 600 А (полученных плазмохимическим способом) на ультразвуковом диспергаторе УЗДН-2Т мощностью 80—

100 Вт/см, частотой 22 кГц. Смесь инкуби2 ровали при встряхивании в течение 1 ч, Магнитное концентрирование проводили в течение 10-15 мин, помещая пробирку с диагностическим материалом в поле постоянного магнита, выполненного иэ сплава

SmCog, напряженностью 2000 Э. Приготовленные из осадка мазки фиксировали и окрашивали люминесцентным красителем как и примере 1, При люминесцентной микроскопии мазков, приготовленных указанным способом, а также по методу прототипа, М5Т не обнаружены. Однако при использовании феррочастиц размером 50-100 А с соответствующей ультразвуковой обработvoé и последующей люминесцентной микроскопией осадка феррочастиц выявлены бактерии в значительном количестве. При посеве диагностического материала на плотную питательную среду также получен положительный результат (обильный рост колоний микобактерий), Подтвержден диагноз туберкулеза, Таким образом, использование предлагаемого способа концентрирования микобактерий при бактериоскопическом анализе клинических образцов мокроты обеспечивает увеличение числа положительных результатов по сравнению с прототипом, Кроме того, способ позволяет повысить чувствительность зкспрессного бактериоскопического выявления бактерий при ранней диагностике туберкулеза, Формула изобретения

Способ определения микобактерий туберкулеза в диагностической пробе путем ее гомогениэации, осаждения, приготовления мазков с последующим их окрашиванием аурамином, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем концентрации микобактерий, пробу до осаждения инкубируют в течение 20-60 мин в водной суспензии феррочастиц размером

50 — 100 А, предварительно озвученных ультразвуком мощностью 80 — 100 Вт/см.